Questo articolo raccomanda un sistema integrato completamente automatizzato che impiega la tripla tecnologia PCR per diagnosticare simultaneamente le coinfezioni di Chikungunya, Dengue e virus Zika utilizzando un singolo campione, ottimizzando così l'efficienza dei test nei laboratori clinici e di medicina primaria.
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Articolo metodologico
Una piattaforma di punto di assistenza per il rilevamento simultaneo della PCR triplex di infezioni da chikungunya, dengue e virus Zika
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
La febbre chikungunya (CHIKF), una malattia virale acuta trasmessa dalle zanzare e scoperta per la prima volta in Tanzania nel 1952, ha mostrato una diffusione intermittente in Cina, con un aumento delle epidemie locali. A luglio 2025, la provincia del Guangdong, attualmente centro dell'epidemia, aveva segnalato 4.824 casi locali, inclusi quasi 3.000 nuovi contagi in una sola settimana. Questo rapido aumento crea un bisogno urgente di tecnologie diagnostiche avanzate. Tali strumenti sono fondamentali per supportare gli sforzi di contenimento in prima linea. Proponiamo una soluzione per la rilevazione simultanea e rapida delle infezioni da dengue (DENV), chikungunya (CHIKV) e virus Zika (ZIKV) per migliorare le capacità precoci di prevenzione e controllo delle epidemie. Questo approccio prevede lo sviluppo di protocolli di test personalizzati per i posti di blocco di frontiera e le strutture sanitarie primarie.
I metodi diagnostici tradizionali per CHIKV e DENV spesso mancano di sensibilità/specificità nei casi di coinfezione. Poiché CHIKV, DEV e ZIKV condividono schemi di trasmissione e sintomi simili, il monitoraggio simultaneo è fondamentale. Questo protocollo presenta un metodo triplex qPCR utilizzando sonde TaqMan per rilevare questi arbovirus in un singolo tubo entro 90 minuti. Rispetto alla coltura virale e ai test serologici, questo metodo migliora l'efficienza identificando infezioni attive e coinfette con alta specificità, semplificando il flusso di lavoro ed eliminando i requisiti di attrezzature specializzate.
La validazione con campioni clinici e di Valutazione Esterna della Qualità (EQA) ha confermato una concordanza del 100% con i saggi singleplex di standard d'oro. Questo metodo rappresenta uno strumento efficace per monitorare le malattie febbrili nelle regioni endemiche, in particolare in contesti a risorse limitate dove il rapido contenimento delle epidemie è fondamentale.
Introduzione
La febbre chikungunya (CHIKF) è una malattia arbovirale sempre più diffusa, trasmessa principalmente dai vettori zanzare Aedes aegypti e Aedes albopictus. Caratterizzata da focolai ricorrenti nelle regioni tropicali, questa malattia si manifesta clinicamente come una febbre acuta, spesso accompagnata da forti dolori articolari e artritepersistente 1. Al 26 luglio, il totale cumulativo dei casi di chikungunya confermati in laboratorio nella città di Foshan aveva raggiunto 4.824, con un notevole 87,2% di questi casi nel distretto di Shunde. Questa marcata concentrazione geografica impone un onere sostanziale alle....
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Protocollo
Questo studio aderisce alle linee guida etiche stabilite dal Comitato Etico dell'Ospedale Popolare Provinciale del Guangdong, Southern Medical University, Guangzhou, Cina (n. approvazione: KY2025-510-01). Informazioni dettagliate riguardo ai materiali utilizzati in questa ricerca (reagenti, sostanze chimiche, attrezzature e software) si trovano nella Tabella dei Materiali.
1. Selezione dei partecipanti
- Scegli partecipanti nella fascia d'età compresa tra 18 e 60 anni.
- Scegliere i partecipanti che presentano una malattia febbrile acuta (T ascellare ≥ 38 °C) entro 12 gior....
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Risultati
Per convalidare la stabilità e l'accuratezza del sistema di rilevamento triplo PCR, abbiamo selezionato cinque campioni clinicamente rappresentativi dal nostro laboratorio interno e dieci campioni esterni EQA ciechi per la verifica. Questi cinque campioni clinici rappresentativi includono sia casi negativi che positivi (S1-S5), inclusi campioni positivi a CHIKV e DENV, selezionati per dimostrare l'applicabilità clinica del test e per supportare la validazione interna delle prestazioni del test (Tabella 1.......
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Discussione
CHIKV è un virus RNA a senso positivo, a singolo filamento, classificato nel genere alphavirus della famigliaTogaviridae 7. L'accelerazione del riscaldamento globale, l'intensificazione del commercio internazionale e l'espansione delle reti turistiche hanno collettivamente aumentato il rischio di esposizione umana a minaccearbovirali 8. Nell'ultimo decennio, la rapida evoluzione della diagnostica molecolare ha trasformato radicalmente il pa.......
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere interessi in competizione.
Ringraziamenti
Questo studio è stato finanziato dalla Guangdong Medical Research Foundation (A2025034). I finanziatori non hanno avuto alcun ruolo nella progettazione dello studio, nella raccolta e analisi dei dati, nella decisione di pubblicare o nella preparazione del manoscritto.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Estrattore automatico di acidi nucleici | DAAN | Smart 32 | Per l'estrazione del DNA |
| BECKMAN X-12 | BECKMAN | ALA04H01 | For centrifugazione siero/nbsp; |
| BSC-1500IIA2-X | BIOBASE | SEDA 20143222263 | Cabina di biosicurezza |
| E-centrifuga | WEALTEC | Centrifuga il liquido residuo dalla parete del tubo | |
| Analizzatore PCR medico completamente automatico | Bioustar | UP0102 | Amplificazione quantitativa per PCR fluorescente |
| Kit di rilevamento degli acidi nucleici per il virus chikungunya (metodo sonda PCR-fluorescente) | DAAN | 20250804 | Rilevamento di Geni del virus chikungunya |
| Kit di rilevamento degli acidi nucleici per il virus della dengue (metodo sonda PCR-fluorescente) | DAAN | 202504003 | Rilevamento di Geni del virus della dengue |
| Kit di rilevamento degli acidi nucleici per il virus della dengue, del virus Zika e del virus chikungunya (metodo della sonda PCR-fluorescente) | Bioustar | 20250724 | Rilevamento di Virus della dengue, virus Zika e virus chikungunya geni |
| Kit di rilevamento degli acidi nucleici per il virus Zika (metodo della sonda PCR-fluorescente) | DAAN | 202508041 | Rilevamento del virus Zika Geni |
| Kit di estrazione degli acidi nucleici | DAAN | Estrazione dell'acido nucleico | |
| SLAN Sistema di analisi PCR medica completamente automatico | HONGSHI | Analisi dei Dati | |
| SLAN-96S macchina PCR in tempo reale | HONGSHI | SLAN-96S | Amplificazione quantitativa per PCR fluorescente |
| Congelatori a bassissima temperatura (DW-YL450) | MELING | SEDA 20172220091 | -20 ° C per conservare reagenti |
| Vortex-5 | Kylin-bell | Per il reagente di miscelazione |
Riferimenti
- Chikungunya epidemiology update - June 2025. , World Health Organization. https://www.who.int/publications/m/item/chikungunya-epidemiology-update-june-2025 (2025).
- Li, Y., Chen, H., Wang, J., Zhang, X., Liu, B. Notes from the field: An outbreak of chikungunya fever in China - Foshan City, Guangdong Province, China....
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Ristampe e permessi
