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Articolo di ricerca

Osthole migliora l'artrite dei ratti attraverso l'asse miR-34a/bcl-2

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DOI:

10.3791/69624

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15 maggio 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Jiangsu Key Laboratory of New Drug Research and Clinical Pharmacy, and Public Experimental Research Center, Xuzhou Medical University, 2Department of Joint Surgery, Shuyang Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

L'osthole (OST) è un composto naturale con ampie attività farmacologiche. Questo studio suggerisce che l'OST allevia gli effetti dell'osteoartrite del ginocchio (KOA) tramite l'asse miR-34a/Bcl-2, come dimostrato in studi in vivo e in vitro su ratti, e fornisce nuove idee e direzioni per le sue applicazioni di medicina brevettata e cliniche.

Abstract

L'osteoartrite al ginocchio (KOA), nota anche come artrite ipertrofica o degenerativa, è un disturbo articolare diffuso. Le strategie attuali di gestione clinica includono terapia farmacologica, intervento fisico, procedure chirurgiche e trattamenti complementari. Sebbene questi approcci possano alleviare in parte i sintomi del KOA, spesso comportano limitazioni, come effetti collaterali, efficacia limitata o invasività. L'osthole (OST), un derivato naturale della cumarina, è stato ampiamente studiato per le sue proprietà medicinali, in particolare nell'alleviare il dolore articolare e migliorare la funzione articolare. In questo studio sono stati impiegati il saggio CCK8, la microscopia elettronica a trasmissione (TEM), la colorazione H&E e l'analisi biochimica sierica per dimostrare che l'OST esercita effetti protettivi sui condrociti sia in vitro che in vivo, senza che si sia osservata tossicità significativa. Indagini successive con TEM, colorazione con acridina arancione, citometria a flusso e western blotting hanno rivelato che l'OST promuove l'autofagia e sopprime l'apoptosi nei condrociti. Ulteriori studi meccanicistici tramite qRT-PCR e saggi di luciferasi hanno indicato che l'OST riduce la regolazione ridimensionale di miR-34a, aumentando così l'espressione di Bcl-2 e inibinando l'apoptosi tramite la via miR-34a/Bcl-2. In sintesi, questi risultati indicano che l'OST protegge i condrociti sia nei modelli cellulari che in quelli animali, attenuando lo stress indotto dalla LPS e riducendo infiammazione e apoptosi nei ratti KOA. La regolazione al ribasso di miR-34a e il successivo aumento dell'espressione di Bcl-2 contribuiscono al suo effetto anti-apoptotico. Questi risultati forniscono una base teorica per lo sviluppo di farmaci brevettati basati su OST e la loro potenziale traduzione clinica nella terapia KOA.

Introduzione

L'osteoartrite del ginocchio (KOA) è una comune malattia articolare nota anche come artrite ipertrofica, ipertrofica o senile del ginocchio. È causata dalla degenerazione della cartilagine articolare e dai cambiamenti nella struttura intorno all'articolazione. Secondo studi epidemiologici, l'osteoartrite del ginocchio è una malattia comune, specialmente neglianziani. La sua incidenza è strettamente correlata all'età, al peso, alla genetica, alle lesioni articolari e così via. Anche le funzioni fisiologiche possono essere influenzate, tra cui una mobilità articolare limitata, una riduzione della forza muscolare e un'andatura anomala. Attualmente, nel trattamento dell'osteoartrite al ginocchio, i metodi comunemente utilizzati includono terapia farmacologica, fisioterapia, chirurgia e terapiaadiuvante 2. I farmaci spesso includono analgesici, antinfiammatori non steroidei e farmaci per l'artrite cronica per ridurre il dolore e controllare l'infiammazione. La fisioterapia include impacchi caldi, impacchi freddi, massaggi e esercizi specifici di riabilitazione per migliorare la funzione motoria articolare e ridurre il dolore. Il trattamento chirurgico può includere chirurgia artroscopica, sostituzione articolare artificiale o riparazione morfologica dell'osso articolare per ripristinare la struttura e la funzione articolare. Inoltre, terapie complementari come agopuntura, fisioterapia e medicina tradizionale cinese sono ampiamente utilizzate.

Tuttavia, sebbene questi trattamenti offrano un certo sollievo dai sintomi e dalla condizione dell'osteoartrite al ginocchio, esistono ancora delle limitazioni. Il trattamento farmacologico può avere reazioni avverse e problemi di dipendenza; La fisioterapia richiede un processo di riabilitazione continuo, e i risultati variano a seconda delle differenze individuali; Il trattamento chirurgico è rischioso, il processo di recupero è lungo e necessita di una valutazione attenta; E, sebbene la terapia adiuvante abbia ricevuto ampia attenzione e applicazione, i supporti scientifici per la sua efficacia sono ancora limitati; è necessario studiare a fondo il meccanismo regolatore della terapia adiuvante. Nella terapia adiuvante, le medicine tradizionali cinesi per il trattamento dell'osteoartrite del ginocchio sono state ampiamente utilizzate in molti ambiti e si sono dimostrate utili. Devono esserci alcuni componenti della medicina tradizionale cinese che non sono ancora ben conosciuti, ma che sono stati dimostrati attraverso la pratica a lungo termine e studi di follow-up. Attualmente, molte medicine cinesi hanno accumulato una ricca esperienza nel trattamento dell'osteoartrite del ginocchio, come Cibotium barometz3, Ligusticum wallichii Franchat4, Angelicapubescens 5 e altre. Queste erbe hanno effetti analgesici e antinfiammatori che possono alleviare efficacemente il dolore e ridurre l'infiammazione.

L'OST è un composto simile alla cumarina ampiamente utilizzato in medicina come estratto naturaledi erbe 6. Ha molte attività farmacologiche ed è supportata da numerosi studi. Gli studi hanno dimostrato che il cnidio ha molte attività farmacologiche, tra cui antitumori, antiinfiammatori, iperglicemia, aggregazione antipiastrine e neuroprotezione, e ha potenziali effetti terapeutici su molte altremalattie 7. È stato riportato che l'OST può promuovere l'apoptosi delle cellule tumorali regolando l'autofagia, che OST inibisce l'apoptosi delle cellule carcinomate ovarico, tramite autofagia mediata da LC3 e piroptosi dipendenteda GSDME 8; L'OST induce l'apoptosi delle cellule HT-29 tramite stress del reticolo endoplasmatico e autofagiacellulare 9; OSTs promuove l'apoptosi del cancro colorettale sopprimendo la segnalazione AMPK/Akt, inducendo autofagia cellulare, ROS e ferroptosi10; L'OST può inibire la crescita del cancro colorettale regolando l'autofagia e la trasduzione del segnale mediata dai mitocondri11. Allo stesso tempo, la OST è particolarmente significativa per alleviare il dolore articolare e migliorare la funzione articolare, principalmente riducendo la risposta infiammatoria e alleviando il dolore articolare. E i suoi principi attivi possono ridurre il rilascio di sostanze infiammatorie e inibire la degenerazione della cartilagine articolare causata dall'artrite. Rispetto ai farmaci occidentali comuni, l'OST è più sicuro e ha bassa tossicità, e un uso prolungato non produce resistenza al farmaco. È stato riportato che l'osthole potenzia l'osteogenesi negli osteoblasti elevantando il fattore di trascrizione osterix tramite la segnalazione cAMP/CREB in vitro e in vivo12; La OST sopprime lo sviluppo dell'osteoartrite al ginocchio potenziando l'autofagia attivata tramite la via13 AMPK/ULK1; Cnidium lactone inibisce la differenziazione degli osteoclasti tramite p38 MAPK e PI3K-Akt e la via di segnalazione c-Fos/NFATc1 14; Cnidium lattone previene la perdita ossea in un modello ovariectomizzato di ratto tramite la via di segnalazione estrogeno-α/BMP-2/Smad15; L'OST migliora l'osteoporosi aumentando l'autofagia delle cellule staminalimesenchimali 16. Tuttavia, l'osservazione e l'analisi indicarono che la maggior parte degli studi rimaneva nel fenotipo, o non rivelava il meccanismo di regolazione delle vie di segnalazione della partecipazione al farmaco a livello molecolare, che è stato anche uno dei motivi per cui i composti estratti dalla medicina tradizionale cinese sono difficili da accettare ampiamente. Pertanto, è di grande importanza esplorare ulteriormente il meccanismo di regolazione biologica dell'Osthole a livello molecolare per il suo medicinale brevettato e l'applicazione clinica.

Il miRNA è un piccolo RNA che regola la funzione biologica inibendo l'espressione dei geni bersaglio. Molte medicine tradizionali cinesi sono note per esercitare i loro effetti biologici regolando il miRNA. Analogamente, anche l'OST è stato segnalato influenzare l'espressione dei miRNA. Innanzitutto, l'OST svolge un ruolo biologico antitumorale attraverso il miRNA. È stato riportato che l'OST inibiva la proliferazione cellulare e indotto l'apoptosi cellulare attraverso la diminuzione dell'espressione di CPEB2 tramite la regolazione rialzata di miR-424 nel carcinomaendometriale 17; L'OST sopprime la proliferazione e accelera l'apoptosi delle cellule gliomate umane tramite la regolazione all'alto di miR-16 e la riduzione dellaMMP-9-18; L'OST mostra un effetto antitumorale nel retinoblastoma inebendo la via PI3K/AKT/mTOR e regolando l'asse hsa_circ_0007534/miR-214-3p19. In secondo luogo, l'OST può anche influenzare i processi fisiologici degli organi del corpo attraverso la regolazione dei miRNA, che l'OST allevia il rimodellamento vascolare polmonare modulando la riprogrammazione metabolica lipidica mediata da miR-22–3p 20; L'OST protegge i ratti da ischemia miocardica/lesioni da reperfusione tramite la riduzione del miR-30a e la promuovendo l'autofagia21; L'OST protegge i cardiomiociti H9c2 dai danni indotti dal trastuzumab potenziando l'autofagia attraverso la via di segnalazione p38MAPK/mTOR 22. In terzo luogo, l'OST può svolgere un ruolo neuroprotettivo tramite il miRNA, che ha stimolato la differenziazione delle cellule staminali neurali in neuroni in un modello cellulare per la malattia di Alzheimer tramite la regolazione all'alto del miR-9 e ha salvato il compromisso funzionale dei neuroni ippocampali nei topi transgenici APP/PS1 23; L'OST riduce i livelli di beta-amiloide attraverso la regolazione all'alto di miR-107 nella malattia di Alzheimer 24. Tuttavia, non è stato riportato che il miRNA possa essere regolato dall'OST per trattare l'osteoartrite del ginocchio. La letteratura ha mostrato che miR-34a migliora l'apoptosi dei condrociti e facilita lo sviluppo dell'osteoartrite mirando alla DLL1 e regolando la via PI3K/AKT 25. L'RNA non codificante lungo MEG3 regola la progressione dell'osteoartrite regolando l'asse miR-34a/Klotho 26; La ridimensionamento di miR-34a favorisce la proliferazione e inibisce l'apoptosi delle cellule cartilaginei osteoartritiche del ratto attivando la viaPI3K/Akt 27. Quindi, il KOA potrebbe essere trattato con OST secondo la regolamentazione miR-34a? Pertanto, si ipotizza che l'OST possa trattare l'osteoartrite del ginocchio regolando il miRNA.

In sintesi, l'OST è un composto naturale con ampie attività farmacologiche28. In precedenza, il gruppo di ricerca aveva confermato che l'OST può migliorare l'osteoartrite del ginocchio nei ratti, ma la trasduzione del segnale cellulare e i meccanismi molecolari alla base di questo effetto biologico non sono stati completamente chiariti. In questo articolo, studiando ulteriormente le vie di segnalazione di miRNA, autofagia e apoptosi dell'OST, si intende chiarire il meccanismo dell'OST nel trattamento dell'osteoartrite al ginocchio e fornire nuove idee e indicazioni per la sua medicina brevettata e applicazione clinica.

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Protocollo

Tutti gli studi sono stati approvati dal Comitato Istituzionale per la Cura e il Trattamento degli Animali dell'Università Medica di Xuzhou. I reagenti e le attrezzature utilizzate sono elencati nella Tabella dei Materiali.

1. Modello animale

Maschi e femmine adulti di ratti Sprague-Dawley (SD) del peso di 250–300 g sono stati acquistati presso l'Experimental Animal Center dell'Università Medica di Xuzhou. I ratti venivano allevati in una stanza speciale senza patogeni. Le procedure sperimentali sugli animali, inclusi trattamento, cura e scelta dell'endpoint, seguivano le linee guida "Ricerca sugli animali: Segnalazione degli esperimenti in vivo". Sono stati condotti esperimenti su animali con randomizzazione. I ratti SD sono stati raggruppati in quattro gruppi (n = 8 per gruppo): gruppo normale (nessun intervento chirurgico, alimentazione normale) (gruppo normale), gruppo sham (chirurgia simulata: incisione cutanea e muscolare senza transezione del legamento crociato anteriore [ACLT], seguita da goffa salina), gruppo KOA/NC (chirurgia ACLT + gavage salina), gruppo KOA/OST (chirurgia ACLT + gavage OST). Il modello KOA del ginocchio del ratto è stato costruito utilizzando il metodo della transezione del legamento crociato anteriore (ACLT) come descrittoin precedenza 29. Il gruppo con soluzione salina è stata somministrata tramite gavage, mentre il gruppo OST è stato somministrato tramite gavage per 4 settimane. La dose di OST è di 50 mg/kg di peso corporeo (disciolta in PEG 400 e diluita con soluzione fisiologica), e la frequenza di somministrazione è una volta al giorno per 4 settimane nella sottosezione dei ratti. Successivamente, i ratti sono stati eutanasiati per l'analisi (seguendo protocolli istituzionalmente approvati). I tessuti venivano immediatamente congelati in azoto liquido o fissati al 4% di paraformaldeide.

2. Coltura cellulare

La linea cellulare di condrociti umani (C28/I2) è stata ottenuta dalla American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA). Le cellule sono state colte secondo le linee guida ATCC e utilizzate entro 6 mesi.

Condizioni della coltura: mezzo DMEM/F-12 integrato con siero fetale bovino al 10% e 1% penicillina-streptomicina, incubato a 37 °C in un incubatore umidificato al 5% CO2 .

Trattamenti: Le cellule sono state seminate a 1 × 106 cellule/pozzo in placche a 6 pozzi; dopo 24 ore di adesione, venivano trattati solo con LPS (1 μg/mL) o con OST (100 μM) per 24 ore.

3. Saggi per la vitalità cellulare

Le cellule condrocitarie sono state co-incubate con OST o LPS in diverse concentrazioni in piastre a 96 pozzi. Il test CCK8 riflette la vitalità cellulare rilevando l'assorbanza (OD450 nm) tramite un lettore di microplacche, con valori OD più alti che indicano celle più vitali.

Gradiente di concentrazione OST: 0, 25, 50, 100, 200, 400 μM (incubato per 24 ore). Il test CCK8 ha mostrato una vitalità cellulare del >90% a tutte le concentrazioni, confermando la non tossicità del composto.

Gradiente di concentrazione LPS: 0, 0,1, 0,5, 1, 2 μg/mL (incubato per 24 ore). Il gruppo LPS da 1 μg/mL aveva ~50% di vitalità cellulare (rispetto al gruppo Ctrl), quindi questa concentrazione è stata scelta per gli esperimenti successivi.

4. Colorazione di ematossilina ed eosina (H&E) e colorazione con Safanin O

I tessuti venivano incorporati in paraffina, decerati, reidratati e colorati con reagenti H&E e Safranin O/Fast Green secondo le indicazioni del produttore. Condizioni di colorazione: la concentrazione di lavoro AO era di 1 μg/mL; le cellule sono state incubate a 37 °C per 5 minuti al buio.

Metodo quantitativo: il tasso di positività AVO è stato calcolato contando le celle contenenti punti arancioni in 5 campi casuali (ingrandimento ×400) per campione utilizzando il software ImageJ. Successivamente, le sezioni venivano catturate al microscopio BX43 (ingrandimento ×400).

5. Citometria a flusso

Le cellule sono state prelevate e risospese in soluzione di Annexin-V FITC/PI per l'analisi dell'apoptosi. Condizioni di incubazione: Le cellule sono state risospese a 1 ×10 6 cellule/mL in soluzione di Annexin-V FITC/PI (KeyGEN) e incubate a temperatura ambiente per 15 minuti al buio.

Strategia di gating: scatter frontale (FSC) vs. le porte a scattering laterale (SSC) venivano utilizzate per escludere i detriti delle cellule; Le celle FITC⁺/PI⁻ Annexin-V sono state definite come apoptotiche precoce, mentre quelle FITC⁺/PI⁺ Annexin-V come apoptotiche tardate. Il grafico di gating è incluso nel File Supplementare 1 (dati grezzi della citometria del flusso). Le cellule venivano raccolte tramite un citometro a flusso. I dati sono stati analizzati utilizzando il software Flow Jo.

6. Trasfezione di plasmidi e mimetismo

MiR-34a mimic (34a-mimic) e control-mimic non specifico (NC) sono stati ottenuti da una fonte commerciale. Le cellule sono state trasfettate con plasmidi utilizzando LipofectaminaTM 3000 secondo le istruzioni del produttore.

7. Macchiatura di arancione acridina

L'autofagia veniva solitamente valutata tramite colorazione con acridina arancione nelle cellule. Dopo che le cellule sono state trattate con LPS o OST a concentrazioni specifiche per 24 ore, sono state incubate con AO (1 μg/mL) a 37 °C per 5 minuti al buio. Le immagini venivano catturate utilizzando un microscopio confocale laser. Il tasso di positività AVO è stato calcolato contando celle contenenti punti arancioni in 5 campi casuali (ingrandimento ×400) per campione utilizzando il software ImageJ. I dati sono riportati come media ± SD da tre esperimenti indipendenti.

8. Osservazione al microscopio elettronico a trasmissione

I campioni sono stati fissati con glutaraldeide al 2,5% e tetrossido di osmio all'1%, poi disidratati, risciacquati e impregnati. Dopo la polimerizzazione, i campioni venivano tagliati in sezioni spesse 70 nm utilizzando un ultramicrotomo. L'ultrastruttura delle cellule è stata osservata tramite microscopia elettronica a trasmissione.

9. Immunoblotting

Anticorpi monoclonali di topo (Abs) contro Bcl-2 (#68103), anticorpo policlonale di coniglio contro LC3 (#14600-1-AP), IL-6 (21865-1-AP) e anticorpo monoclonale di topo contro β-Actin (#66009-1-lg) sono stati acquistati da Proteintech. Gli ABS secondari coniugati con IRDye 800CW Goat (policlonale) anti-Rabbit IgG (H+L) o IRDye 800CW Goat (policlonale) anti-Mouse IgG (H+L) sono stati ottenuti commercialmente. Le cellule sono state lisate in un saggio di lisi a intera cellula, separate tramite elettroforesi su elettroforesi in gel SDS-poliacrilamide. Le proteine sono state rilevate utilizzando l'Abs primario e l'Abs secondario corrispondente. Il carico proteico era di 30 μg per corsia; diluizioni primarie degli anticorpi: Bcl-2 (1:1000), LC3 (1:1500), β-tubulina (1:5000); anticorpi secondari (IRDye 800CW) sono stati utilizzati a 1:10.000, IL-6 (1:800). Successivamente, le bande proteiche sono state catturate dal sistema di imaging laser a chemiluminescenza potenziata. Le bande proteiche sono state quantificate dal software ImageJ.

10. Reazione a catena della polimerasi in tempo reale quantitativo (qRT-PCR)

Gli RNA totali sono stati isolati dalle cellule utilizzando il reagente Trizol. I cDNA derivati da RNA totali sono stati sintetizzati utilizzando il cDNA regent kit e analizzati con i metodi SYBR Green. I cDNA derivati da miRNA sono stati sintetizzati utilizzando un kit cDNA di primo filamento miRcute plus miRNA e analizzati con un kit qPCR miRcute plus miRNA. Tutte le procedure venivano eseguite secondo il protocollo del produttore. L'espressione del trascrizione target è stata calcolata utilizzando il metodo 2-△△CT . GADPH e U6 venivano utilizzati come controllo del carico rispettivamente per mRNA e miRNA. La sequenza degli innesco è elencata nella Tabella 1.

11. Analisi dei giornalisti di Luciferase

Plasmide reporter di tipo selvaggio psiCHECK2-Bcl-2-3′UTR (WT) e plasmide reporter psiCHECK2-Bcl-2-3′UTR con un mutante nel sito di legame miR-34a (Mut). I reporter e il mimetico miR-34a sono stati co-trasfettati nelle cellule condrocitarie usando LipofectamineTM 3000. Le cellule venivano prelevate e lisate dopo 24 ore di trasfezione. L'intensità della luciferasi è stata poi misurata utilizzando il kit Dual-LumiTM Luciferase Reporter Gene Sagy secondo le istruzioni del produttore.

12. Test di analisi dell'andatura

Il sistema MGT-PR veniva utilizzato per osservare i movimenti in corsa degli arti dei ratti in ciascun gruppo. Prima dei test, ai ratti è stato permesso di adattarsi all'ambiente della pista. Sono stati registrati i dati sull'andatura durante la camminata libera, con tre prove valide consecutive di camminata catturate per ciascun ratto. I parametri analizzati includevano la lunghezza del passo, la durata dell'oscillazione e la coordinazione tra gli arti posteriori destro e sinistro.

13. Analisi statistica

Gli esperimenti sono stati condotti in triplicata e ripetuti indipendentemente almeno tre volte. L'analisi statistica è stata effettuata utilizzando il software GraphPad Prism 9. I dati sono stati mostrati come media ± SD. Le differenze statistiche sono state valutate tramite ANOVA unidirezionale (test post hoc di Tukey) per confronti multipli, oppure con il test Student's a due code per due confronti sperimentali di gruppo. Le differenze sono state accettate come significative a p < 0,05.

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Risultati

Cellule condrociti protette da OST sia in vitro che in vivo
Come prodotto naturale, il profilo di sicurezza dell'OST richiede un'indagine approfondita. Questo studio ha inizialmente valutato la citotossicità sui condrociti in vitro utilizzando il saggio CCK8. I risultati indicarono che l'OST non mostrava tossicità verso i condrociti nemmeno a una concentrazione di 400 μM (Figura 1A). Per esaminare g...

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Discussione

Soprattutto, l'OST ha protetto i condrociti dallo stress indotto da LPS in vitro e ha alleviato infiammazione e apoptosi nei ratti KOA in vivo. Questi effetti protettivi erano associati alla regolazione al ribasso di miR-34a e a un conseguente aumento dell'espressione di Bcl-2, coerente con il ruolo proposto dell'asse miR-34a/Bcl-2 nella mediazione dell'azione dell'OST.

In questo studio è stato riscontrato che l'OST promuove l'autofagia delle...

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno conflitti di interesse finanziari.

Ringraziamenti

Questa ricerca è stata finanziata dal Key Laboratory of New Drugs and Clinical Medicine (XZSYSKF2021037) dell'Università del Jiangsu. Gli esperimenti in questo articolo sono stati in parte condotti presso il Centro Pubblico di Ricerca Sperimentale e il Centro per Animali da Laboratorio dell'Università Medica di Xuzhou. I ringraziamenti sono rivolti a Fuxing Dong, Kejia Zhang, Jinxia Kuai e Min Zhang per il loro entusiasta aiuto.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Tetrossido di osmio all'1%Tecnologia Ruixin
2,5% glutaraldeideTecnologia Zhongjingkeyi
Arancia acridinaSigmaAmresco 0360
Soluzione fitc/pi Annexin-VKeyGENKGA107
Bcl-2Proteintech#68103
Kit di conteggio delle celle-8VICMED39.VC5001L
ChimiluminescenzaOdyssey CLX
Microscopio confocaleLeicaSTELLARIS 5
DMEM/F-12HyClone12.SH30023-01
Kit Dual-LumiTM Luciferase Reporter Gene AssayBeyotimeRG088
Kit regente cDNA FastKingTIANGENKR116-03
Citometro a flussoBDFACS Canto II
Linea cellulare di condrociti umaniCollezione della Cultura di Tipo AmericanoYTLK280144
LC3Proteintech#14600-1-AP
LipofectaminaTM 3000InvitrogenL3000015
LipopolisaccaridiSigma29.L2880
Analisi di lisiKeyGENKGP704-100
Lettore micropiastraBioTekSinergia 2
Kit cDNA di prima filiazione miRcute plus miRNATIANGENKR211-02&ZWNJ;
Kit qPCR miRcute plus miRNATIANGENFP411-02
OstholeMedchemexpressO815127-25g
Elettroforesi gel SDS-poliacrilammideNCM BiotechP2012
SieroClark BioscienceFB15015
SYBR GreenTIANGENFP217-01‌
Microscopia elettronica a trasmissioneFEITecnai G2
Ultra-microtomoLeciaUC7
Microscopio a fluorescenza verticaleOlympusBX43
β-ActinProteintech#66009-1-LG

Riferimenti

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