Questo articolo descrive uno studio sulla regolazione della fibrosi dei fibroblasti polmonari tramite la decoczione Wenyang Dingchuan tramite l'inibizione della polarizzazione dei macrofagi M2.
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Articolo di ricerca
Questo articolo descrive uno studio sulla regolazione della fibrosi dei fibroblasti polmonari tramite la decoczione Wenyang Dingchuan tramite l'inibizione della polarizzazione dei macrofagi M2.
Studiare gli effetti del Wen Yang Ding Chuan Tang (WYDCT) sulla funzione dei fibroblasti, sul rimodellamento delle vie aeree nell'asma e sul meccanismo sottostante. IL-4 è stato utilizzato per indurre la polarizzazione M2 dei macrofagi RAW264.7, e i macrofagi polarizzati sono stati poi trattati con WYDCT per indagare il suo effetto sui fibroblasti polmonari del topo. Le cellule RAW264.7 polarizzate sono state sottoposte a diversi trattamenti e poi co-colture con fibroblasti. Sono stati valutati i livelli dei marcatori M1 e M2, la morfologia cellulare e la concentrazione di IL-6. È stato analizzato il livello proteico di STAT3. La vitalità, la proliferazione, la formazione delle colonie, l'espressione di PCNA e l'espressione di fibronectina, COL1A1 e α-SMA sono state analizzate utilizzando vari saggi, tra cui PCR in tempo reale, Western blot, CCK-8, Edu, immunofluorescenza e saggi di formazione di colonie. WYDCT ha invertito i cambiamenti morfologici indotti da IL-4 nelle cellule RAW264.7, ridotto i livelli dei marcatori M2 (Arg-1, CD206) e IL-6, e diminuito l'espressione di STAT3 nelle cellule RAW264.7, mentre l'integrazione con IL-6 ha ripristinato l'effetto di WYDCT sui marcatori M2. Inoltre, WYDCT ha inibito la vitalità e la proliferazione dei fibroblasti, ridotto l'espressione di PCNA e diminuito i marcatori di fibrosi (fibronectina, COL1A1, α-SMA), suggerendo che WYDCT inibisca la vitalità, la proliferazione e la fibrosi dei fibroblasti polmonari sopprimendo la polarizzazione del macrofagio M2, in cui la via di segnalazione IL-6/STAT3 può svolgere un ruolo chiave.
L'asma, nota anche come asma bronchiale, è una condizione infiammatoria persistente delle vierespiratorie. Frequentemente collegata all'esposizione agli allergeni, alle temperature fredde e a irritanti sia fisici che chimici, questa condizione è caratterizzata da infiltrazione di cellule infiammatorie, costrizione reversibile delle vie aeree, secrezione di muco ebroncospasmo 2. Attualmente, ci sono almeno 300 milioni di pazienti asmatici in tutto il mondo, e la prevalenza aumenta di anno interzo. Nel 2015, 400.000 persone sono morte d'asma, rendendolo un grave problema di saluteglobale 4,5. Anche la Cina sta affrontando lo stesso problema, con studi che mostrano un tasso di prevalenza dell'asma del 4,2%, che rappresenta circa 45,7 milioni di pazienti adulti, con tassi di controllo inferiori rispetto ai paesisviluppati del 6,7%. Il benessere delle persone colpite da questa malattia è gravemente compromesso, causando una notevole pressione finanziaria sulle famiglie.
La rimodellazione delle vie aeree è considerata un fattore cruciale nel trattamento dell'asma, difficile dacontrollare. Pertanto, il trattamento dell'asma cronica persistente diventa un punto chiave. La pratica clinica spesso prevede l'uso di corticosteroidi inalati in combinazione con broncodilatatori, che possono alleviare efficacemente i sintomi neipazienti 9. Tuttavia, questi trattamenti hanno alcuni effetti collaterali e possono essere meno efficaci nel migliorare i sintomi per alcuni pazienti. Inoltre, l'asma tende a ripresentarsi dopo l'interruzione del farmaco. Le ricerche hanno dimostrato che l'attivazione dei fibroblasti polmonari è correlata al rimodellamento delle vie aeree durante la progressionedell'asma 10. All'attivazione, i fibroblasti polmonari subiscono una trasformazione fenotipica e secernono proteine chiave per guidare la deposizione della matrice extracellulare (ECM), la caratteristica patologica centrale del rimodellamento delle vie aeree. In particolare, la fibronectina funge da un primo impalcatura per l'assemblaggio dell'ECM, favorendo il reclutamento e l'adesione di altri componenti della matrice; COL1A1 (catena α1 del collagene di tipo I) è la principale proteina strutturale dell'ECM, e il suo eccessivo accumulo porta a un ispessimento e rigidità delle pareti delle vie aeree; α-SMA (α-muscolo liscio actina di actine) segna la trasformazione dei fibroblasti in miofibroblasti con forti capacità contrattili e secretorie, accelerando ulteriormente la deposizione di ECM e la fibrosi delle vie aeree.
IL-6 è il fattore di segnalazione citoplasmatica più importante per l'attivazione della viaSTAT3 11. Un IL-6 elevato attiva la via STAT3. Nel tessuto polmonare di topo asmatico, l'espressione di STAT3 e mRNA e proteine fosforilati aumentano significativamente. La via di segnalazione IL-6/STAT3 è uno degli obiettivi per il trattamento dell'asma. Gli studi hanno confermato che l'attivazione della via di segnalazione IL-6/STAT3 è associata all'infiammazione delle vie aeree nell'asma, e inibire questa via può ridurre l'infiammazionedelle vie aeree 12,13. IL-6/STAT3 è anche associato alla polarizzazione M2 dei macrofagi. Studi stranieri hanno dimostrato che l'espressione di IL-6 riduce significativamente l'attivazione di STAT3 a valle, correlata con una riduzione dei numeri della superficie tumorale, una diminuzione della proliferazione e una riduzione dei numeri di macrofagi M2 nelfegato 14.
Le cellule immunitarie note come macrofagi possono essere classificate in fenotipi distinti, ovvero attivazione classica (M1) e attivazione alternativa (M2), ognuna delle quali svolge ruoliunici 15. I macrofagi M1 possono indurre reazioni infiammatorie e danni ai tessuti, mentre i macrofagi M2 favoriscono la proliferazione cellulare e facilitano la guarigione delle ferite e la riparazione dei tessuti. Le ricerche hanno dimostrato che il rimodellamento delle vie aeree nell'asma è associato ai macrofagiM2 16. Esperimenti in vitro hanno dimostrato che l'induzione della polarizzazione M2 dei macrofagi con IL-4 aumenta significativamente la capacità di proliferazione delle cellule α-SMA-positive17. Inibire la polarizzazione dei macrofagi M2 è un approccio efficace per trattare il rimodellamento delle vie aeree nell'asma.
L'asma appartiene alla categoria dei "Xiao Bing" nella medicina tradizionale cinese. I fattori patologici di Xiao Bing riguardano principalmente il catarro. La produzione di catarro deriva da uno squilibrio tra Yin e Yang nelle visceri, combinato con fattori esterni come patogeni esogeni, dieta e condizioni post-malattie, che influenzano il movimento dei fluidi corporei, portando a stagnazione e accumulo. Con la continua esplorazione dei meccanismi della medicina tradizionale cinese nel trattamento dell'asma, sempre più studi hanno dimostrato che la medicina tradizionale cinese ha effetti significativi nell'alleviare l'infiammazione delle vie aeree, ridurre la secrezione eccessiva di muco e inibire il rimodellamento delle vieaeree 18,19. In Xiao Bing, il polmone è principalmente colpito, seguito dalla milza e dai reni. I pazienti con Xiao Bing presentano un qi polmonare carente e una difesa debole contro patogeni esterni, che porta a una perdita della diffusione del qi polmonare e a danni ripetuti e a lungo termine allo yang qi, con conseguente carenza di yang polmonare. La carenza di yang porta a una circolazione anomala dei fluidi corporei, che si condensano in catarro. Con attacchi a lungo termine, il catarro freddo colpisce lo yang della milza e dei reni, causando un modello di carenza di yang polmone-milza-rene, squilibrio di yin e yang, eccessiva preponderanza o carenza della costituzione e circolazione anomala dei fluidi corporei. Il polmone non può disperdere i fluidi, la milza non può trasformare acqua ed essenza, e i reni non possono vaporizzare e trasformare i liquidi, portando alla condensazione del catarro e alla formazione di stasi, che si manifesta come asma. Pertanto, la carenza di yang è la causa principale di Xiao Bing, e la stasi del catarro è la sua caratteristica. Wen Yang Ding Chuan Tang è composto da 12 erbe medicinali cinesi, tra cui Epimedium (15 g), Ephedra (lavorata) (10 g), Ginseng (15 g), Astragalus (15 g), Ginkgo biloba (15 g), Flos Farfarae (15 g), Chicco di albicocca amara (15 g), Pinellia ternata (10 g), Schisandra chinensis (10 g), Verme (10 g), Persica (10 g) e Liquirizia (lavorata) (10 g). Questa formula erboristica deriva dalla formulazione modificata del Ding Chuan Tang nel libro "She Sheng Zhong Miao Fang" e ha effetti di riscaldare lo yang, rinforzare il qi, risolvere il catarro, favorire la circolazione sanguigna e alleviare tosse e asma. L'efficacia clinica di questo trattamento è stata stabilita, il che ha stimolato le attuali indagini sperimentali sul suo meccanismo per affrontare il rimodellamento delle vie aeree nell'asma.
Rispetto alle attuali terapie farmacologiche per l'asma, come corticosteroidi inalati, agonisti β2 e biologici monoclonali basati su anticorpi che mirano a IgE o IL-5, Wen Yang Ding Chuan Tang (WYDCT) offre una potenziale strategia terapeutica più sicura e multi-bersaglio. I corticosteroidi convenzionali alleviano efficacemente l'infiammazione delle vie aeree, ma sono spesso associati a effetti collaterali come immunosoppressione, squilibri ormonali e ricadute in caso di astinenza. Gli agenti biologici, pur essendo più specifici, sono costosi e limitati a particolari fenotipi d'asma. Al contrario, la WYDCT, derivata dalla teoria della medicina tradizionale cinese di "riscaldamento dello yang e risoluzione del catarro", esercita effetti complessivi sulla regolazione dell'equilibrio immunitario, la riduzione dell'infiammazione delle vie aeree e la soppressione del rimodellamento delle vie aeree, come dimostrato in studi clinicie sperimentali 20. La sua composizione multicomponente può modulare simultaneamente la polarizzazione dei macrofagi, l'attivazione dei fibroblasti e il rilascio di citochine, fornendo un miglioramento più ampio e potenzialmente più sostenibile nella patologia dell'asma.
In questo studio, l'estratto d'acqua di Wen Yang Ding Chuan Tang (WYDCT) è stato preparato da dodici erbe in un rapporto tradizionale fisso, concentrato in una soluzione di stock finale di 1 g/mL (equivalente grezzo di farmaco) e filtrato per l'uso in coltura cellulare. L'estratto è stato applicato a concentrazioni di 50, 100 e 200 μg/mL, selezionate sulla base di saggi preliminari di vitalità cellulare per garantire la non citotossicità mantenendo l'attività farmacologica. Il modello in vitro ha coinvolto la polarizzazione M2 indotta da IL-4 dei macrofagi RAW264.7 e la co-coltura con fibroblasti polmonari di topo (cellule L929), permettendoci di valutare gli effetti paracrini dei macrofagi sull'attivazione dei fibroblasti e sulle risposte correlate alla fibrosi. Questi dettagli forniscono un quadro riproducibile per studi futuri che indagano le caratteristiche dose-risposta e i percorsi meccanicistici della WYDCT nella rimodellazione delle vie aeree.
Sulla base dei risultati sopra riportati, ipotizziamo che Wen Yang Ding Chuan Tang eserciti i suoi effetti anti-rimodellamento delle vie aeree nell'asma inibendo la polarizzazione M2 dei macrofagi e sopprimendo l'attivazione dei fibroblasti.
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Questo studio è stato condotto seguendo linee guida internazionali, nazionali e istituzionali per il trattamento umano degli animali e in conformità con la legislazione pertinente. In particolare, tutte le procedure che coinvolgono i topi sono state approvate dal Comitato per la Cura Etica degli Animali del Terzo Ospedale Affiliato del Qiqihar Medical College (AECC-2022-009). I topi venivano ospitati in condizioni standard di laboratorio con accesso ad libitum a cibo e acqua, e si facevano tutti gli sforzi per minimizzare la sofferenza. Durante lo studio sono stati stabiliti e monitorati parametri umani.
1. Preparazione dell'estratto WYDCT
Le 12 erbe di Wen Yang Ding Chuan Tang sono state pesate secondo il rapporto tradizionale: Epimedium (15 g), Efedra lavorata (10 g), Ginseng (15 g), Astragalus (15 g), Ginkgo biloba (15 g), Flos Farfarae (15 g), Chicco di albicocca amara (15 g), Pinellia ternata lavorata (10 g), Schisandra chinensis (10 g), Lombrico (10 g), Persica (10 g), e liquirizia lavorata (10 g).
È stato aggiunto dieci volte il volume di acqua distillata e la miscela è stata bollita per 30 minuti. L'estrazione fu ripetuta due volte e i filtrati furono combinati. L'estratto combinato è stato concentrato a pressione ridotta fino a una concentrazione equivalente a un farmaco greggio di 1 g/mL. L'estratto veniva filtrato attraverso una membrana da 0,22 μm, allicitato e conservato a −20 °C. Le concentrazioni operative (50, 100 e 200 μg/mL) venivano preparate per diluizione immediatamente prima dell'uso.
2. Coltura cellulare e polarizzazione M2
Le cellule RAW264,7 (ATCC, USA) sono state scongelate e seminate a una densità di 1 × 10⁶ cellule per piatto da 10 cm in 10 mL di DMEM integrato con siero bovino fetale al 10%, 100 U/mL di penicillina e 100 μg/mL di estreptomicina. Le cellule sono state incubate a 37 °C in un'atmosfera umidificata contenente il 5% di CO₂ per 24 ore fino a raggiungere una confluenza dell'80%-90%.
Il mezzo di coltura è stato poi sostituito con DMEM fresco contenente 20 ng/mL di IL-4, e le cellule sono state incubate per ulteriori 24 ore per indurre la polarizzazione M2. Dopo l'incubazione, le cellule sono state lavate due volte con PBS e successivamente trattate con estratto di WYDCT (soluzione di stock da 10 mg/mL diluita alle concentrazioni finali indicate) per 24 ore. Per gli esperimenti di integrazione con IL-6, durante il trattamento WYDCT sono stati aggiunti 50 ng/mL di IL-6.
Le cellule trattate con DMSO allo 0,1% sono state il controllo negativo. La morfologia cellulare è stata esaminata al microscopio rovesciato e sono state catturate immagini rappresentative.
3. Isolamento e coltura di fibroblasti polmonari di topo
I topi venivano soppressi secondo i protocolli etici approvati. I lobi polmonari venivano raccolti e posti nella soluzione salina equilibrata di Hanks fredda. I vasi sanguigni visibili e il tessuto connettivo sono stati rimossi e il tessuto polmonare è stato tritato in piccoli pezzi (~1 mm3).
I frammenti di tessuto sono stati digeriti allo 0,25% di tripsina per 40 minuti a 37 °C con una leggera agitazione, seguiti da una seconda digestione allo 0,25% di tripsina per 30 minuti. La sospensione cellulare è stata centrifugata a 300 × g per 5 minuti, il soprantantante è stato scartato e il pellet è stato risospeso in DMEM integrato con siero bovino fetale al 10%.
La sospensione è stata incubata per 100 minuti per permettere l'aderenza ai fibroblasti, dopo di che le cellule sono state nuovamente centrifugate a 300 × g per 5 minuti per migliorare la purificazione. I fibroblasti purificati sono stati seminati in piastre di coltura appropriate e incubati a 37 °C in un'atmosfera umidificata contenente il 5% di CO₂ fino a raggiungere circa l'80% di confluenza.
4. Co-coltura di fibroblasti con mezzo condizionato
Il soprantantante è stato raccolto da cellule RAW264,7 trattate e centrifugato a 3000 × g per 10 minuti a 4 °C. Il mezzo di coltura fibroblastica è stato sostituito con il mezzo raccolto e condizionato dai macrofagi. I fibroblasti sono stati incubati per 24 ore a 37 °C in un'atmosfera umidificata contenente il 5% di CO₂ prima dei test funzionali. Dopo l'incubazione, i fibroblasti sono stati prelevati per l'estrazione di RNA e proteine per successive analisi qRT-PCR e Western blot.
5. Vitalità delle celle (saggio CCK-8)
I fibroblasti sono stati seminati a una densità di 5 × 10³ cellule per pozzo in piastre da 96 pozzi contenenti 100 μL di mezzo di coltura. Le cellule sono state sottoposte ai trattamenti indicati per 24 ore. Successivamente, sono stati aggiunti 10 μL di reagente CCK-8 a ciascun pozzo e le placche sono state incubate per 2 ore a 37 °C. La densità ottica (OD) è stata misurata a 450 nm utilizzando un lettore di microplacche. La vitalità cellulare è stata calcolata come (OD_treated / OD_control) × 100%. Tutti gli esperimenti sono stati condotti con tre repliche biologiche.
6. Saggio di formazione della colonia
Le cellule sono state seminate a una densità di 1 × 10³ cellule per pozzo in piastre a 6 pozzi, con tre pozzi replicati per condizione. Le placche venivano incubate per 10-14 giorni fino alla formazione di colonie visibili. Le colonie sono state colorate con viola cristallino allo 0,1% per 10 minuti a temperatura ambiente. Dopo la tintura, le colonie venivano lavate e fotografate. Il colorante legato è stato sciolto al 30% di acido acetico per 15 minuti, e la densità ottica è stata misurata a 590 nm. Furono condotti tre esperimenti indipendenti.
7. Saggio di proliferazione di EdU
Le cellule sono state trattate come indicato per 24 ore. Successivamente, sono stati aggiunti 100 μL di 50 μM di EdU a ciascun pozzo e le cellule sono state incubate per 2 ore a 37 °C. Le cellule sono state fissate al 4% di paraformaldeide per 30 minuti e temprate con 2 mg/mL di glicina per 5 minuti. Le cellule sono state permeabilizzate con 0,5% di Triton X-100 in PBS, lavate e incubate con soluzione di colorazione Apollo per 30 minuti. I nuclei sono stati controcolorati con Hoechst 33342 (1×) per 30 minuti. Le cellule EdU positive sono state osservate e imaggiate utilizzando un microscopio a fluorescenza.
8. ELISA per IL-6
Il surnatant della cella RAW264.7 è stato centrifugato a 3000 × g per 15 minuti a 4 °C. I livelli di IL-6 sono stati misurati utilizzando un kit Beyotime ELISA secondo le istruzioni del produttore. L'assorbanza è stata misurata utilizzando un lettore di microplacche e le concentrazioni di IL-6 sono state calcolate sulla base di una curva standard.
9. Immunofluorescenza
I fibroblasti sono stati fissati in acetone pre-raffreddato per 10 minuti e lavati tre volte con PBS. Le cellule sono state permeabilizzate con lo 0,1% di Triton X-100 per 10 minuti e bloccate con l'1% di BSA in PBS per 30 minuti. Le cellule sono state poi incubate con un anticorpo primario contro PCNA (1:100) durante la notte a 4 °C. Dopo aver lavato tre volte con PBS, le cellule sono state incubate con un anticorpo secondario coniugato con FITC (1:200) per 1 ora a temperatura ambiente. I nuclei sono stati controcolorati con DAPI, lavati e fotografati con un microscopio a fluorescenza.
10. qRT-PCR
L'RNA totale è stato estratto utilizzando il reagente Trizol (Beyotime, Cina) secondo il protocollo del produttore. La trascrizione inversa è stata eseguita con il cDNA Synthesis Kit utilizzando 2 μg di RNA e primer casuali. Le reazioni PCR sono state preparate in un volume da 20 μL contenente 10 μL di SYBR Green Master Mix, 0,5 μL di ciascun primer specifico per gene (concentrazione finale 0,5 μM) e 1 μL di modello di cDNA. Gli innesco utilizzati includevano CD16, iNOS, Arg-1, CD206, fibronectin, COL1A1, α-SMA e GAPDH (sequenze fornite).
Le condizioni di ciclo termico consistevano in una denaturazione iniziale a 95 °C per 5 minuti, seguita da 40 cicli a 95 °C per 30 secondi, 60 °C per 30 secondi e 72 °C per 30 secondi. L'analisi della curva di fusione è stata eseguita da 60 °C a 95 °C in incrementi di 0,5 °C per verificare la specificità dell'amplificazione.
Analisi dei dati: L'espressione relativa è stata calcolata utilizzando il metodo 2^−ΔΔCT e normalizzata a GAPDH. Gli innesco erano i seguenti: CD16 (mouse): 5′- AGGAGCTGAGGAGGAGGAGGAGG-3′ e 5′- TGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGG-3′, iNOS (mouse): 5′-TGCTCCCCAGGAGATGTTGT-3′ e 5′-TGGTCTTAGGGCTGTACGG-3′, Arg-1 (mouse): 5′- GCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGGGG-3′ e 5′- GGTGGCTTTGCTGTGTGTC-3′ ��, CD206 (topo): 5′- GGCTTCTATGAGCTGTGTGA-3′ e 5′- CTGGGCTTCTGTGTGTTGTT-3′, fibronectina (topo): 5'-CGTGGTGAAGGTGTCTCTGC-3' e 5'-GAGGTCACAGTGTCTTGCT-3', COL1A1 (topo): 5'-CCCTGGACACCTGGCTTTTT-3' e 5'-GCGGGTCCCCTTCTCTCTC-3', α-SMA (topo): 5'-CTGGAACAGCACAGCTTCTC-3' e 5'-GGGATATAGCAGCTTCTC-3', GAPDH (topo): 5′-TGTGTCCGTCGTGGATCTGA -3′ e 5′- CCTGCTTCACCTTCTTGAT-3′.
11. Western blot
Le cellule sono state lisate utilizzando inibitori della proteasi contenenti un tampone RIPA. Le concentrazioni proteiche sono state determinate tramite un saggio BCA. Per SDS-PAGE, 60 μg di proteine sono stati caricati in ogni corsia di un gel di poliacrilammide al 10% e separati a 120 V per 1,5-2 ore. Le proteine sono state trasferite su una membrana PVDF utilizzando un metodo di trasferimento umido a 100 V per 1 ora. Dopo aver bloccato con il 5% di latte scremato in TBS-T per 1 ora a temperatura ambiente, la membrana è stata incubata con anticorpi primari (diluizione 1:1000) durante la notte a 4 °C. Dopo lavaggi con TBS-T, la membrana è stata incubata con anticorpi secondari coniugati con HRP (diluizione 1:5000) per 1 ora a temperatura ambiente. Dopo ulteriori lavaggi, le bande proteiche sono state rilevate utilizzando un reagente di chemiluminescenza ECL e sono state riprese con un sistema di imaging chemiluminescenze. Le intensità delle bande sono state quantificate tramite il software ImageJ e i livelli proteici sono stati normalizzati in GAPDH come controllo interno.
12. Analisi statistica
I dati sono stati analizzati utilizzando SPSS 17.0. Le variabili continue sono state espresse come media ± deviazione standard (SD). I confronti tra due gruppi sono stati effettuati utilizzando un test t non accoppiato, mentre confronti tra più gruppi sono stati condotti utilizzando ANOVA unidirezionale seguiti dal test post hoc LSD. Un valore p inferiore a 0,05 è stato considerato statisticamente significativo.
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Gli effetti della WYDCT sulla polarizzazione M2 delle cellule RAW264.7 dei macrofagi
Abbiamo osservato la morfologia cellulare di RAW264.7 utilizzando un microscopio ottico. Come mostrato nella Figura 1A, la stimolazione IL-4 ha causato allungamenti delle cellule, risultando in una forma più allungata e simile a un fuso rispetto alle cellule non trattate. Inoltre, le cellule stimolate da IL-4 hanno mostrato una granularità citoplasmatica aumentata...
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L'obiettivo di questo studio era esplorare l'impatto della WYDCT sull'attività dei fibroblasti e sul rimodellamento delle vie aeree nell'asma, nonché i meccanismi sottostanti. I risultati attuali dimostrano che WYDCT può inibire la polarizzazione M2 dei macrofagi RAW264.7, il che successivamente influisce sulla vitalità, proliferazione e fibrosi dei fibroblasti polmonari di topo. Inoltre, la via di segnalazione IL-6/STAT3 ha svolto un ruolo chiave nella mediazione di questi effetti.
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Ringraziamo sinceramente tutti i partner che hanno contribuito a questo progetto di ricerca. Questo lavoro è stato supportato dalle Spese Operative della Ricerca Scientifica di Base dell'Università nella Provincia di Heilongjiang nel 2022 (No.2022-KYYWF-0827), per cui siamo grati.
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Reagente di ibridazione Apollo 643 | Guangzhou RiboBio Co., Ltd. | C10371-2 | |
| Arginase-1 (E4U1I) mouse mAb | Cell Signaling Technology, Inc. | 43933T | |
| Kit per la determinazione della concentrazione di proteine BCA | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | P0012 | |
| BeyoBlot HRP Coniugato Topo Anti-Coniglio Nativo IgG (H+L) | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | A0210 | |
| Incubatore a anidride carbonica | Shanghai Lishen Scientific Equipment Co., Ltd. | HF240 | |
| CD206/MRC1 (E6T5J) XP® Rabbit mAb | Cell Signaling Technology, Inc. | 24595T | |
| Kit di conteggio delle celle-8 | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | C0037 | |
| COL1A1 (E8F4L) XP Rabbit mAb | Cell Signaling Technology, Inc. | 72026T | |
| Dimetil solfossido | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | ST038-100ml | |
| DMEM medium ad alto contenuto di zucchero | Compagnia Biologica di Grand Island | 11965092 | |
| EDU | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | ST067-250mg | |
| Fcγ RIII/CD16 (F6K6G) Rabbit mAb | Cell Signaling Technology, Inc. | 71345T | |
| Siero fetale per vitelli | Compagnia Biologica di Grand Island | A5256701 | |
| Fibronectina/Anticorpo FN1 & nbsp; | Cell Signaling Technology, Inc | 63779S | |
| FITC-Combinato con IgG Anti-Topo per Capre (H+L) | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | A0568 | |
| Strumento di PCR quantitativo a fluorescenza | Yarui Biotechnology Co., Ltd. | MA-6000 | |
| Hoechst 33342 Soluzione di colorazione a cellule vive (100X) | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | C1029 | |
| iNOS (E1W4J) Rabbit mAb | Cell Signaling Technology, Inc. | 70706SF | |
| microscopio invertito | Guangzhou Mingmei Optoelectronics Technology Co., Ltd. | MI52-N | |
| LRRK2 T1348N mut RAW 264.7 | ATCC | SC-6005 | |
| Tamponaggio di permeabilizzazione a mmunocolorazione (con Triton X-100) | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | P0096-100ml | |
| Mouse IL-6 ELISA Kit | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | PI326 | |
| Cellule fibroblastiche polmonari del topo | Wuhan Procell Life Technology Co., Ltd. | CP-M006 | |
| PCNA (PC10) mouse mAb | Cell Signaling Technology, Inc. | 2586T | |
| Penicillina-streptomicina | Compagnia Biologica di Grand Island | 15140148 | |
| Murina ricombinante IL-4 | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | P5916-5 & mu; g | |
| Murina ricombinante IL-6 | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | P5925-10 & mu; g | |
| Strumento di etichettatura enzimatica Redu | Scienze della Vita Rayto | RT-6100 | |
| Stat3 (124H6) Mouse mAb | Cell Signaling Technology, Inc. | 9139T | |
| Panca superclean | Jinan BioBase Biotech Co., Ltd. | BBS-SDC | |
| SynGAP-& alpha; 2 (E4Y6I) Coniglio mAb | Cell Signaling Technology, Inc. | 56927T | |
| Thermo Fisher Scientific RIPA Lysis and Extraction Buffer | ThermoFisher | 89901 | |
| Trizol (reagente di estrazione totale di RNA) | Beyotime Biotechnology Co., Ltd. | R0016 | |
| β-Anticorpo di Actina | Cell Signaling Technology, Inc. | 4967S |
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