Gavage orale nei cuccioli neonatali di topo e valutazione funzionale dell'integrità della barriera intestinale utilizzando camere di uso

Louis Berthet; Camille Tardiveau; Maryline Roy; Emilie Viennois

doi:10.3791/69751

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Articolo metodologico

Gavage orale nei cuccioli neonatali di topo e valutazione funzionale dell'integrità della barriera intestinale utilizzando camere di uso

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DOI:

10.3791/69751

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9 gennaio 2026

Louis Berthet¹ , Camille Tardiveau¹ , Maryline Roy¹ , Emilie Viennois¹^,²

¹INSERM U1149, Center of Research on Inflammation, Université Paris Cité, ²CHRU Nancy, IHU Infiny

In questo articolo

Sommario

Questo articolo descrive: (1) somministrazione orale tramite gavage di molecole di prova ai topi neonatali già a partire dal DOL 6; e (2) valutazione ex vivo della funzione della barriera epiteliale del colon nelle biopsie dai cuccioli DOL 10 allo svezzamento (DOL 20) valutando la permeabilità paracellulare e transcellulare con camere di Ussing.

Abstract

Le crescenti evidenze sottolineano l'importanza dei primi 1.000 giorni di vita nel plasmare l'asse intestino-microbioma. Questa finestra di vita precoce è fondamentale per l'instaurazione di traiettorie fisiologiche a lungo termine e adattamenti immunologici, influenzando potenzialmente la suscettibilità alle malattie legate alla disbiosi e alla disfunzione della barriera. Una comprensione più approfondita dei meccanismi sottostanti richiede una valutazione completa dei parametri fisiologici chiave, inclusa la permeabilità paracellulare e transcellulare dell'intestino neonatale. Valutare questi parametri è essenziale per chiarire come le esposizioni precoci a molecole esogene possano influenzare l'integrità intestinale e gli esiti di salute a lungo termine. Pertanto, la prima parte di questo articolo descrive la somministrazione orale di molecole di interesse nei cuccioli di topo già dal giorno di vita, minimizzando allo scoperto stress, al contempo il rischio di infortuni e il cannibalismo. Aghi da alimentazione lubrificati e con punta arrotondata da 24 G vengono utilizzati per far sparire i cuccioli di topo che pesano almeno 2,5 g. La seconda parte delinea la valutazione ex vivo della permeabilità paracellulare e transcellulare utilizzando saggi in camera di Ussing su campioni di colon di cuccioli tra DOL-10 e lo svezzamento. I cursori senza perni adattati per piccole biopsie vengono utilizzati in combinazione con camere di Ussing per montare campioni di colon neonatale. La sonda paracellulare FITC-Dextrano 4 kDa e il marcatore transcellulare perossidasi rafano 44 kDa Tipo VI vengono aggiunti al compartimento apicale del sistema all'inizio del saggio. I campioni vengono raccolti nel compartimento basolaterale a 0 min, 30 min, 60 min, 90 min e 120 min per quantificare il passaggio della sonda. Il passaggio di entrambi i marcatori viene quantificato direttamente (FITC) e indirettamente (HRP) da un lettore di lastre, calcolato usando curve standard ed espresso come flusso.

Introduzione

L'integrità della barriera intestinale svolge un ruolo fondamentale nel mantenimento della salute generale coordinando la risposta immunitaria mucosa e regolando la permeabilità selettiva dell'epitelio intestinale. Questo sistema barriera controlla il passaggio dei nutrienti impedendo al contempo la traslocazione di patogeni, antigeni e tossine nella circolazione^{sistemica 1}. La rottura cronica di questa interfaccia, associata a un aumento della permeabilità intestinale, comunemente chiamata "intestino permeabile", è ora identificata non solo come conseguenza ma anche come un fattore che causa gli stati infiamma....