Articolo metodologico

Purificazione e identificazione della proteina antimicrobica dalla tetraspora verde alga sp. CU2551

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DOI:

10.3791/70066

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17 febbraio 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biology, School of Science, King Mongkut's Institute of Technology Ladkrabang, 2Division of Biology, Faculty of Science and Technology, Rajamangala University of Technology Thanyaburi, 3Bioenergy Research Unit, School of Science, King Mongkut's Institute of Technology Ladkrabang

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo descrive un flusso di lavoro per l'indagine di proteine antimicrobiche intatte utilizzando molteplici tecniche, tra cui l'ottimizzazione dei tamponi di estrazione proteica, la rottura delle cellule algali, la frazionazione proteica tramite cromatografia a scambio ionico, la separazione delle proteine tramite SDS-PAGE e saggi di attività antimicrobica. La proteina attiva è stata successivamente confermata e identificata tramite analisi LC-MS/MALDI-TOF.

Abstract

La resistenza agli antimicrobici (AMR) rappresenta una minaccia sanitaria globale in crescita, che ha reso necessaria la scoperta di nuovi agenti antimicrobici. Le proteine e i peptidi derivati dalle alghe hanno ricevuto una crescente attenzione per il loro potenziale bioattivo; tuttavia, i protocolli standardizzati per l'indagine dei peptidi antimicrobici (AMP) nelle alghe verdi, in particolare Tetraspora sp. CU2551, rimangono limitati. Questo protocollo descrive un flusso di lavoro passo dopo passo per l'isolamento, la purificazione e la caratterizzazione delle proteine antimicrobiche intate provenienti dall'alga verde Tetraspora sp. CU2551. La procedura integra estrazione proteica ottimizzata, frazionamento cromatografico, separazione elettroforetica, screening dell'attività antimicrobica e identificazione delle proteine. Le condizioni di estrazione proteica sono inizialmente ottimizzate per ridurre gli effetti inibitori di fondo provenienti dai componenti tamponi. Quando l'identità del peptide attivo è sconosciuta, viene applicato un test pull-down per valutare il legame proteico tra diverse resine a scambio ionico e per guidare la selezione di una matrice di purificazione appropriata. La cromatografia a scambio ionico DEAE-Sepharose è un metodo adatto per arricchire frazioni proteiche antimicrobiche. Tutte le frazioni vengono valutate sistematicamente per l'attività antimicrobica e analizzate tramite SDS-PAGE. La banda proteica corrispondente alla massima attività antimicrobica, insieme a un profilo elettroforetico distinto, viene espulsa e sottoposta ad analisi LC-MS/MALDI-TOF per l'identificazione delle proteine. Il flusso di lavoro è ulteriormente integrato da analisi in silico per prevedere proprietà antimicrobiche correlate ai peptidi utilizzando strumenti bioinformatici pubblicamente disponibili. Questo protocollo fornisce un quadro versatile per la scoperta di proteine antimicrobiche e può essere facilmente adattato ad altre specie algali e ad applicazioni biotecnologiche correlate.

Introduzione

La resistenza agli antimicrobici (AMR) rappresenta una sfida sanitaria globalecrescente 1, evidenziando l'importanza di strategie continue per identificare nuovi agenti antimicrobici provenienti da fonti naturali. Sebbene ci siano sempre più ricerche sulle proprietà antimicrobiche di proteine e peptidi derivati dallealghe 2,3. La maggior parte degli studi si concentra su approcci basati su peptidi o idrolizzati4, e i metodi standardizzati per preservare e valutare l'attività delle proteine algali intere rimangonolimitati 5. Questo articolo descrive un metodo volto a isolare, purificare e valutare proteine intatte provenienti dall'alga verde Tetraspora sp. CU2551 per l'attività antimicrobica.

Il protocollo delinea un processo passo dopo passo che comprende l'estrazione di proteine intere, la frazionazione tramite cromatografia a scambio ionico, la valutazione delle proprietà antibatteriche, la separazione proteica a base di gel, l'identificazione delle proteine tramite spettrometria di massa e la previsione dei peptidi antimicrobici tramite tecniche in silico. L'efficacia degli agenti antibatterici viene valutata utilizzando test standard di diffusione dell'agar e inibizione della crescita liquida su ceppi batterici tipici Gram-positivi eGram-negativi 4,6. Questo approccio consente di collegare l'attività antimicrobica identificata a specifiche frazioni proteiche o bande elettroforetiche, invece di affidarsi a miscele peptidiche digerite o a previsioni computazionali che potrebbero non identificare proteine antimicrobiche o sequenze simili a AMP al di fuori delle definizioni canoniche 7,8 del database.

Seguire questo protocollo consente ai lettori di ottenere in modo affidabile frazioni proteiche bioattive contenenti potenziali sequenze proteiche antimicrobiche, adatte per future validazioni e valutazioni funzionali. I risultati rappresentativi indicano l'identificazione di frazioni bioattive contenenti sia candidati proteici noti che sconosciuti. Questo protocollo fornisce un quadro versatile e pratico per identificare sostanze antimicrobiche da proteine intatte ottenute da alghe e altre fonti biologiche.

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Protocollo

Questo studio non ha coinvolto partecipanti umani, animali o soggetti vertebrati. Tutte le procedure sperimentali sono state condotte in conformità con le linee guida istituzionali sulla biosicurezza e l'etica della ricerca della School of Science, King Mongkut's Institute of Technology Ladkrabang (KMITL), Thailandia. Tutti gli esperimenti microbici sono stati condotti secondo condizioni di laboratorio di Livello di Biosicurezza 2 (BSL-2) secondo lo standard nazionale di biosicurezza9 dell'OMS.

Indossare dispositivi di protezione individuale adeguati, inclusi camici da laboratorio, guanti e mascherine, durante tutte le procedure sperimentali. Raccogliere e smaltire i rifiuti chimici e contenenti argento secondo le linee guida istituzionali sulla gestione dei rifiuti pericolosi prima di inviarli a una società autorizzata di gestione dei rifiuti.

Prepara soluzioni concentrate di sostanze chimiche pericolose, tra cui dodecile solfato di sodio, β-mercaptoetanolo e reagenti di colorazione d'argento contenenti formaldeide, in una cappa chimica. Convolgere esperimenti utilizzando basse concentrazioni di lavoro e piccoli volumi sul banco di laboratorio in conformità con le pratiche standard di sicurezza di laboratorio.

1. Coltura delle alghe

NOTA: Mantenere condizioni asettiche durante la coltivazione delle alghe.

  1. Preparazione della coltura iniziale
    1. Prepara un medium TAP sterile (pH 7.0)10 e dispensa 150 mL in fiaschette Erlenmeyer sterili da 500 mL.
    2. Inoculare il mezzo con un inoculo notturno all'1% (v/v) di Tetraspora sp. CU2551 utilizzando una tecnica asettica in un armadietto di biosicurezza di Classe I.
    3. Incubare le colture in un incubatore agitabile dotato di luce a 35 °C, 120 giri al minuto e 45,9 μmol/m 2/s per 48 ore. Usa la cultura completamente adulta come base per la crescita culturale.
  2. Coltura su scala e raccolta cellulare
    1. Trasferire 25 mL di coltura starter in 275 mL di medium TAP sterile fresco. Incubare le colture nelle stesse condizioni per 48 ore.
    2. Prelevare le cellule algali tramite centrifugazione a 3.800 × g per 15 minuti a 25 °C.
    3. Lavare i pellet cellulari una volta con acqua distillata sterile e centrifugare di nuovo a 3.800 × g per 15 minuti a 25 °C.
    4. Rimuovere completamente il sovrantato e conservare i pellet delle cellule algali a −20 °C fino a ulteriori lavorazioni.

2. Formulazione del tampone di lisi e screening per inibizione di fondo

ATTENZIONE: Maneggiare SDS e β-mercaptoetanolo con guanti in gomma o nitrile. Apri la bottiglia concentrata di β-mercaptoetanolo in una cappa chimica.

  1. Preparazione del tampone di lisi
    1. Preparare il tampone di lisidi riferimento 11 composto da 10 mM di Tris-HCl (pH 9,0) integrato con 0,1 % di SDS w/v e 38 mM di β-mercaptoetanolo.
      NOTA: Passo critico: Ottimizzare le concentrazioni di SDS e β-mercaptoetanolo per evitare attività antimicrobiche falsamente positive.
    2. Preparare set fattoriali completi di tampone di lisi variando il solfato dodecile di sodio (SDS) (0, 0,01, 0,05 o 0,1% p/v) e β-mercaptoetanolo (0, 0,5, 1 o 2 mM), generando 16 formulazioni.
      NOTA: Le composizioni di tutte le formulazioni del tampone di lisi testate sono riassunte nella Tabella 1. Aggiungi β-mercaptoetanolo immediatamente prima dell'uso.
  2. Screening antimicrobico di base
    1. Usa una perforatrice per carte per preparare dischi da 6 mm con carta No. 42 Whatman. Applicare 5 μL di ogni formulazione del tampone di lisi sul disco di carta ed eseguire i test di diffusione del disco secondo le linee guidaCLSI 6. Incubare le piastre di analisi a 37 °C per 20 ore e valutare le zone di inibizione.
      1. Test di formulazioni contro Bacillus subtilis TISTR 1248, Staphylococcus aureus TISTR 746, Escherichia coli TISTR 074 e Pseudomonas aeruginosa TISTR 2370.
    2. Seleziona la formulazione che non mostra alcuna attività inibitoria per l'estrazione proteica successiva.

3. Estrazione proteica

NOTA: Mantenere i campioni a bassa temperatura durante la sonicazione e la centrifugazione.

  1. Scongelare i pellet algali congelati (dal passo 1.2.5) a 37 °C e ricongelare a −20 °C. Ripeti i cicli di congelamento-scongelamento (-20 °C / 37 °C) 3 volte.
  2. Aggiungere il buffer ottimale di lisi (10 mM Tris-HCl, pH 9,0, 0,01% SDS, 2 mM β-mercaptoetanolo) a un volume finale di 5 mL e mantenere i campioni sul ghiaccio durante la lavorazione a valle. Interrompi le celle tramite sonda sonicante (25 kHz, 500 W, 40% ampiezza, 1 s on/off, 5 minuti).
  3. Aggiungi il cocktail inibitore di proteasi secondo le istruzioni del produttore e mescola delicatamente.
  4. La centrifuga lisa a 3.800 × g per 15 minuti a 4 °C e raccoglie il soprandanante come estratto proteico grezzo.
  5. Chiarire gli estratti tramite centrifugazione a 10.000 × g per 10 minuti a 4 °C. Raccogli e conserva i soprantativi a 4 °C.

4. Valutazione dell'attività antimicrobica

  1. Saggi di diffusione su disco
    1. Coltivare batteri patogeni (Bacillus subtilis TISTR 1248, Staphylococcus aureus TISTR 746, Escherichia coli TISTR 074 e Pseudomonas aeruginosa TISTR 2370) su agar nutritivo a 37 °C per 16-18 ore.
    2. Utilizzando un anello sterile in alluminio, raschiare le colonie dalle superfici dell'agar e risospendere in NaCl allo 0,9% (w/v). Regolare le sospensioni batteriche a 0,5 standard McFarland e tamponare uniformemente sulle piastre di agar Mueller-Hinton.
    3. Posizionare dischi di carta sterili su superfici di agar inoculati e applicare 5 μL di campioni di prova. Incubare le placche a 37 °C per 16-20 ore e misurare le zone inibitorie usando un calibro Vernier.
      NOTA: Mantenere la stessa distanza tra tutti i dischi.
  2. Determinazione di MIC e MBC
    1. Prepara sospensioni batteriche a 2 × 10⁶ CFU/mL in 4x brodo Mueller-Hinton.
    2. Pipettare 50 μL delle sospensioni batteriche e 100 μL dei campioni di proteine serialmente diluite in piastre da 96 pozzi e regolare tutti i pozzi a un volume finale di 200 μL usando 10 mM di Tampone Tris-HCl (pH 7,5).
    3. Usa 5 μL di streptomicina (50 μg) come controllo positivo. Usa 10 mM di Tris-HCl (pH 7,5) e 0,9% (p/v) di NaCl come controlli negativi.
    4. Incubare le placche a 37 °C per 20 ore e determinare la MIC come la concentrazione più bassa senza crescita batterica visibile.
    5. Placcare aliquote da pozzi chiari sull'agar Mueller-Hinton per determinare MBC.
  3. Determinazione della curva di crescita batterica
    1. Prepara sospensioni batteriche a 1 × 10⁶ CFU/mL in 2x brodo Mueller-Hinton.
    2. Incubare 100 μL di coltura batterica con 100 μL di campioni proteici in una piastra da 96 pozzi a 37 °C per 20 ore.
    3. Usa 5 μL di streptomicina (50 μg) come controllo positivo. Utilizzare acqua distillata sterile, 10 mM di Tris-HCl (pH 7,5) e 500 mM di NaCl in 10 mM di Tris-HCl (pH 7,5) come controlli.
    4. Misurare OD₆₀₀ ogni 30 minuti utilizzando un lettore di microplacche con scuotimento intermittente orbitale (2 minuti prima della misurazione).
    5. Calcola curve di crescita e tassi di crescita specifici.
      NOTA: Alte concentrazioni proteiche possono interferire con le misurazioni della densità ottica.

5. Saggio pull-down e purificazione proteica

  1. Saggio a pull-down
    1. Bilanciare resina DEAE-Sepharose con 10 mM di Tris-HCl buffer (pH 8,0) o resina CM-Sepharose con 10 mM di Phosphate buffer (pH 7,0).
    2. Mescolare 100 μL di resina equilibrata con 500 μL di estratto proteico grezzo, poi aggiungere 100 μL del corrispondente tampone di equilibrio (10 mM Tris-HCl, pH 8,0 per DEAE; 10 mM tampone fosfato, pH 7,0 per CM). Incubare con inversione gentile (10 inversioni).
    3. Centrifugare brevemente, raccogliere il soprandanante e valutare l'attività antimicrobica tramite un saggio di diffusione su disco.
    4. Seleziona la resina di lavoro (DEAE-Sepharose). Per l'ottimizzazione del pH, bilanciare la resina con 10 mM di Tris-HCl a pH 7,0, 7,5, 8,0, 8,5 o 9,0 e seguire i passaggi 5.1.1-5.1.3.
    5. Seleziona la condizione di pH che mostra l'attività antimicrobica per la cromatografia a scambio ionico.
  2. Purificazione proteica basata su cromatografia a scambio ionico
    1. Imballare la resina DEAE-Sepharose in una colonna di cromatografia di vetro (volume di letto di 16 mL) e bilanciare con 10 mM di tampone Tris-HCl (pH 7,5) a 25 °C per 10 volumi di colonna.
    2. Carica 15 mL di estratto proteico grezzo (sezione 3.6) a una portata di 8 mL/min.
    3. Lavare la colonna con un buffer di equilibrio finché l'assorbenza a 280 nm non scende sotto 0,05.
    4. Proteine legate agli eluti utilizzando un gradiente lineare di NaCl da 0-500 mM in Tris-HCl di 10 mM (pH 7,5) su 500 mL a 8 mL/min.
    5. Raccogli 5 mL frazioni, monitora l'assorbimento a 280 e 220 nm e tieni le frazioni sul ghiaccio. Conservare le frazioni a 4 °C fino allo screening antimicrobico e all'analisi delle proteine.

6. SDS-PAGE e colorazione d'argento

NOTA: Prepara soluzioni per macchiare l'argento in una cappa chimica e indossa l'attrezzatura di protezione individuale adeguata. Prepara tutte le soluzioni con cura.

  1. Separare le frazioni proteiche usando SDS-PAGE12 % e visualizzare le bande colorandol'argento 13.
  2. Eliminare le bande proteiche target e inviare campioni per l'analisi MS di MALDI-TOF.
  3. Identificare le proteine tramite ricerca nel database rispetto al NCBInr.

7. Previsione dei peptidi antimicrobici

  1. Recuperare sequenze di proteine candidate dall'analisi NCBInr.
  2. Valutare il potenziale antimicrobico utilizzando strumenti pubblici di previsione degli AMP disponibili (ad esempio, DBAASP, APD3, AMPScanner, CAMPR4) e database.
  3. Estrae i risultati della previsione, inclusi punteggi di probabilità antimicrobica, classificazione prevista e proprietà fisicochimiche (carica netta, contenuto di residui idrofobi, indice GRAVY [ExPASy ProtParam] e ampipathicità).
  4. Integrare i risultati computazionali su tutte le piattaforme per dare priorità alle proteine antimicrobiche candidate per la validazione a valle.
    NOTA: Le previsioni in silico supportano la selezione dei candidati e non costituiscono una classificazione definitiva dei peptidi antimicrobici.

8. Test statistici

  1. Esegui tutti gli esperimenti in triplicata biologica. Analizza i dati utilizzando ANOVA unidirezionale seguita dal test a più intervalli di Duncan o da analisi post hoc appropriate con un livello di confidenza del 95%.

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Risultati

Il flusso di lavoro sviluppato basato su proteine intate, che integra estrazione proteica ottimizzata, frazionamento a scambio ionico, screening antimicrobico e identificazione delle proteine, ha permesso con successo il rilevamento di frazioni proteiche bioattive da Tetraspora sp. CU2551. Questo protocollo è progettato per minimizzare gli artefatti di fondo preservando l'integrità delle proteine native, permettendo all'attività antimicrobica di essere direttamente associata a f...

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Discussione

Per ottenere letture antimicrobiche affidabili utilizzando questo protocollo, devono essere controllati attentamente diversi passaggi critici, in particolare durante l'estrazione delle proteine e lo screening precoce della bioattività. Ottimizzare il buffer di lisi è essenziale, poiché l'inibizione di fondo da parte dei componenti del tampone è una fonte frequente di risultati falsi positivi nello screening proteico antimicrobico. L'attività antimicrobica osservata con la formulazione ta...

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno conflitti di interesse da dichiarare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni di ricerca della School of Science, King Mongkut's Institute of Technology Ladkrabang, concesse a C. Maneeruttanarungroj (RA/TA-2566-M-013) e dall'Istituto di Tecnologia King Mongkut Ladkrabang, concesse a Y. Tonawut (KREF016329). L'analisi spettrometrica di massa è stata effettuata dall'Unità di Servizio Proteomica, Facoltà di Tecnologia Medica, Università Mahidol, Thailandia.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Soluzione di acrilammide/bis-acrilammideLaboratori Bio-Rad1610156Per la preparazione del gel SDS-PAGE
Categoria: Chimico
Lampada ad alcol / Bruciatore BunsenVari—Per la tecnica asettica
Categoria: Strumento
AMPScannerUniversità George Mason (Veltri et al.)—Strumento di previsione AMP basato su deep learning
Categoria: Software / Database
Strumenti di Previsione dei Peptidi Antimicrobici (DBAASP, APD3, AMPscanner, CAMPR4)Varie fonti accademiche—Analisi AMP in silico
Categoria: Software / Database
APD3Wang Lab, Università del Nebraska—Antimicrobial Peptide Database
Categoria: Software / Database
AutoclaveTomy—Sterilizzazione di mezzi e materiali
Categoria: Strumento
Armadio di biosicurezza Classe I/IIVari—Manipolazione asettica
Categoria: Strumento
BioTool 2.0Bruker Daltonics—Strumento per visualizzare spettri e peptidi della SM
Categoria: Software
Reagente di BradfordMerckB6916Quantizzazione delle proteine
Categoria: Chimica
CAMPR4Istituto Indiano di Tecnologia di Bombay—Collezione di peptidi antimicrobici
Categoria: Software / Database
Centrifuga, Microcentrifuga refrigerata Eppendorf 5415REppendorf—Microcentrifugazione
Categoria: Strumento
Centrifuga, Thermo Scientific Megafuge 8RThermo Fisher Scientific—Centrifugazione ad alto volume
Categoria: Strumento
Colonna Cromatografia (Vetro)Vari—Cromatografia a scambio ionico
Categoria: Vetro
CM-Sepharose ResinaMerckCEF100Resina a scambio cationico
Categoria: Chimica (Resina)
Cotton SwabVari—Inoculazione batterica
Categoria: Plastica
Cuvette, QuarzoHellma Analytics—Spettrofotometria UV
Categoria: Vetro
DBAASPIstituto di Chimica Bioorganica (Russia)—Database dell'attività antimicrobica e delle strutture peptidiche
Categoria: Software / Database
DEAE-Sepharose ResinaMerckDEFF100Resina a scambio anione
Categoria: Chimica (Resina)
Fiaschetta Erlenmeyer, 100 mLVari—Coltivazione delle alghe
Categoria: Vetro
Fiaschetta Erlenmeyer, 500 mLVari—Coltivazione delle alghe
Categoria: Vetro
Escherichia coli TISTR 074TISTR, Thailandia—Microrganismo di test
Categoria: Materiale biologico
ExPASy ProtParamIstituto Svizzero di Bioinformatica—Strumento online per calcolare le proprietà fisicochimiche delle proteine
Categoria: Software / Database
FormaldeideMerck1.04002Colorazione d'argento
Categoria: Chimica
Freezer (-20 °C; C)Vari—Archiviazione campioni
Categoria: Strumento
Sistema di elettroforesi in gel (Mini-PROTEAN Tetra)Laboratori Bio-Rad—SDS-PAGE
Categoria: Strumento
Provetta in vetro (16 e 150 mm)Pyrex / Duran—Gestione dei campioni
Categoria: Vetro
Guanti, nitrileVari—Protezione personale
Categoria: Plastica
Stop Protein Inhibitor Cocktail (100 volte)Thermo Fisher Scientific87786Inibizione della proteasi
Categoria: Chimica
IncubatoreVari—Coltura batterica
Categoria: Strumento
Shaker IncubatoreVari—Coltura algale
Categoria: Strumento
Anello inoculanteQualsiasi fornitore di laboratorio—Trasferimento microbico
Categoria: Consumabile
KClMerckP5405Preparazione tampone
Categoria: Chimica 
Spettrometro di massa MALDI-TOF (Reflex IV)Bruker Daltonics—Identificazione delle proteine
Categoria: Strumento
MASCOTTEScienza delle Matrices—Motore di ricerca per l'identificazione delle proteine tramite dati MS
Categoria: Software / Database
MASCOTTE 2.2Scienza delle Matrices—Identificazione delle proteine
Categoria: Software
Cilindro di misuraPyrex—Misurazione del volume
Categoria: Vetro
Tubo microcentrifuga (1,5 mL)-—Trattamento dei campioni
Categoria: Plastica
Tubo microcentrifuga (2,0 mL)-—Trattamento dei campioni
Categoria: Plastica
Micropipetta (100&nline; 1000 & micro; L)-—Manipolazione liquida
Categoria: Strumento
Micropipetta (1– 10 & micro; L)-—Manipolazione liquida
Categoria: Strumento
Micropipetta (1– 5 & micro; L)-—Manipolazione liquida
Categoria: Strumento
Micropipetta (1– 5 mL)-—Manipolazione liquida
Categoria: Strumento
Micropipetta (20– 200 & micro; L)-—Manipolazione liquida
Categoria: Strumento
Lettore di microplaccheBioTek —Misurazione OD600
Categoria: Strumento
Mueller e Dash; Agar/Brodo di HintonVari—Saggi antimicrobici
Categoria: Media
Nanodrop / Spettrofotometro BiodropVari—Misurazione proteica
Categoria: Strumento
Database NCBInrCentro Nazionale per l'Informazione Biotecnologica—Database proteico non ridondante
Categoria: Software / Database
Agar nutritivo-—Coltura batterica
Categoria: Media
Disco di carta (6 mm)Whatman n.42—Analisi di diffusione su disco
Categoria: Plastica
Piastra di PetriVari—Coltura microbica
Categoria: Plastica
Misuratore di pHMettler Toledo—Aggiustamento del pH
Categoria: Strumento
Tampone fosfatico (10 mM, pH 7,0)-—Buffer cromatografia
Categoria: Buffer
Sonda Sonicatore (VCX500)Sonics & Materials Inc.—Disturbo cellulare 500 W, 20 kHz, con sonda
Categoria: Strumento
Frigorifero (4 & deg; C)Vari—Archiviazione campioni
Categoria: Strumento
Nitrato d'argentoLaboratori di Ricerca Sisco94118Colorazione d'argento
Categoria: Chimica
Cloruro di sodio (NaCl)MerckS9888Elution buffer
Categoria: Chimico
Solfato di Dodecile di Sodio (SDS)Laboratori Bio-Rad11667289001Lisi e PAGE
Categoria: Chimica
SpettrofotometroShimadzu—Misurazione dell'assorbimento
Categoria: Strumento
Centrifuga a spin-downEppendorf—Centrifugazione rapida
Categoria: Strumento
Staphylococcus aureus TISTR 746TISTR, Thailandia—Microrganismo di test
Categoria: Materiale biologico
StreptomicinaMerckS9137-25GControllo positivo
Categoria: Chimica
Tetraspora sp. CU2551Collezione Culturale KMITL—Ceppo algale
Categoria: Materiale biologico
Medium fosfato di tris acetato (TAP)-—Coltura delle alghe
Categoria: Media
Tris-HClMerck—Preparazione del buffer
Categoria: Buffer 
Calibro vernierVari—Misurazione della zona
Categoria: Strumento
Bagno d'acquaVari—Controllo della temperatura
Categoria: Strumento
XMASSBruker Daltonics—Software di spettrometria di massa MALDI-TOF
Categoria: Software
&alfa;-Ciano-4-acido idrossicinnamico (CHCA)Bruker Daltonics—Matrice MALDI
Categoria: Chimica

Riferimenti

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