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Articolo di ricerca
* These authors contributed equally
Questo studio ha stabilito un nuovo modello beagle in vivo di insufficienza renale moderata cronica combinata con fibrillazione atriale tramite embolizzazione dell'arteria renale transcatetere e rapido stimolo atriale, dimostrando che questa combinazione ha gravemente compromesso la funzione endoteliale atriale sinistra, l'attività procoagulante aumentata e il rischio di trombosi elevato attraverso vie infiammatorie e mediate da RAAS.
La co-occorrenza di fibrillazione atriale (FA) e insufficienza renale (IR) rappresenta un fenomeno clinicamente complesso con alta prevalenza. Questo studio ha indagato l'impatto della rifornitura cronica moderata combinata con la FA sulla funzione endoteliale atriale sinistra nei beagle. L'IR cronica è stata indotta dall'embolizzazione transcateterica del ramo principale dell'arteria renale sinistra utilizzando granuli di spugna gelatinosa, mantenendo gli animali per 3 mesi per consentire lo sviluppo di danni parenchimatosi renali cronici. La FA è stata successivamente indotta da stimolazione atriale rapida e continua (durata del ciclo di base, 60 ms; tensione, 4 volte la soglia di stimolazione diastolica; 180 min). Le variazioni istologiche sono state valutate utilizzando la colorazione di ematossilina ed eosina. I parametri associati alla funzione endoteliale, alla coagulazione, alla fibrinolisi, all'infiammazione e all'attività del sistema renina–angiotensina–aldosterone (RAAS) nel plasma e nei tessuti cardiaci sono stati esaminati utilizzando un saggio immunosorbente legato a enzimi, reazione a catena della polimerasi in tempo reale quantitativa e western blotting. I risultati hanno dimostrato il successo dell'istituzione di un modello di danno cronico renale con IR moderato, confermato da una creatinina plasmatica significativamente elevata, azoto ureico e riduzione della clearance della creatinina. La funzione endoteliale atriale sinistra è stata significativamente compromessa nei beagle con combinazione di IR e FA, accompagnata da un aumento degli effetti procoagulanti e una riduzione della fibrinolisi. I marcatori infiammatori sono stati elevati dopo la procedura di RI o l'induzione della FA e sono stati ulteriormente potenziati nel gruppo combinato RI+FA. Inoltre, l'attività RAAS, evidenziata dall'aumento dei livelli di renina e aldosterone, è stata elevata dopo la ritarda e ulteriormente aumentata in combinazione con la FA. In sintesi, questo studio ha stabilito con successo un modello animale in vivo di IR moderata cronica combinata con FA nei beagle, dimostrando che questa combinazione ha significativamente disturbato la funzione endoteliale atriale sinistra e aumentato il rischio trombotico.
La fibrillazione atriale (FA), la forma più diffusa di aritmia cardiaca sostenuta in profondità, è strettamente legata a esiti clinici sfavorevoli. A causa delle caratteristiche fisiopatologiche sistemiche della FA, questa aritmia si manifesta frequentemente in intricati dialoghi fisiopatologici con una serie di comorbidità concomitanti, tra cui declino cognitivo, depressione ed emboliasistemica 1. La malattia renale cronica (CKD) è stata identificata come un fattore di rischio indipendente sia per lo sviluppo della FA sia per la comparsa di eventi tromboembolici. Circa il 15%-20% dei pazienti diagnosticati con CKD è affetto da FA, mentre la proporzione di pazienti che ricevono terapia sostitutiva renale che sviluppano FA varia dal 15% al 40%2. Nel frattempo, circa il 30%-60% dei pazienti diagnosticati con FA, contemporaneamente, presenta insufficienza renale (IR) da lieve a moderata3. Pertanto, la co-incidenza di FA e IR è diventata un fenomeno clinico complesso con un'alta prevalenza tra le popolazioni di pazienti. La relazione bidirezionale tra FA e IR aumenta gravemente il rischio di incidenza di FA e aggrava anche la progressione dell'insufficienza renale, contribuendo infine a peggiori esiticlinici 4.
In studi precedenti, i ratti sono stati spesso utilizzati per stabilire modelli RI; tuttavia, la loro piccola dimensione cardiaca li rende inadatti a esperimenti elettrofisiologici cardiaci. I cani, al contrario, sono frequentemente impiegati in modelli animali di medie e grandi dimensioni di insufficienza renale, con la nefrectomia come metodo principaledi modellazione 5. Tuttavia, questo approccio è associato a un tasso di successo limitato nella modellazione. Ancora più importante, poiché la nefrectomia non induce direttamente danni al parenchimatose renale, non riesce a simulare efficacemente i processi patologici dell'insufficienza renale. Pertanto, è essenziale stabilire un modello animale adatto con RI e FA. Da notare che Liang Z et al. hanno stabilito con successo un modello RI lieve nei beagle tramite embolizzazione di piccoli rami dell'arteria renale nel rene sinistro per due settimane usando granuli di spugna gelatinosa, associato all'AF6; tuttavia, un periodo di osservazione di due settimane è generalmente considerato insufficiente per simulare una maledizione renale cronica clinica, poiché le caratteristiche distintive della nefropatia cronica, inclusa glomerulosclerosi e fibrosi tubulointerstiziale, richiedono lunghi periodi di danno parenchimatose renale sostenuto per svilupparsi completamente nei modellianimali 7,8. Questo evidenzia la necessità di un modello cronico con un periodo di osservazione più lungo che ricapitoli più fedelmente la natura progressiva della MRC clinica.
Il presente studio, quindi, mirava a stabilire un modello animale di IR cronica moderata combinata con FA effettuando embolizzazione transcateterica del tronco principale dell'arteria renale sinistra nei beagle e mantenendo gli animali per 3 mesi per consentire lo sviluppo di patologie renali croniche consolidate. Inoltre, abbiamo esplorato la patogenesi della disfunzione endoteliale atriale sinistra in queste condizioni patologiche, testando l'ipotesi che la combinazione di IR moderato cronico e FA comprometterebbe sinergicamente la funzione endoteliale atriale sinistra attraverso un'infiammazione aumentata e l'attivazione della RAAS, aumentando così il rischio di trombosi oltre entrambe le condizioni. Questi risultati potrebbero fornire una comprensione più approfondita della RI cronica combinata con FA e gettare le basi per ulteriori indagini sui benefici della terapia anticoagulante nei pazienti con FA e IR.
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Questo studio è stato condotto in stretta conformità con le raccomandazioni contenute nella Guida per la Cura e l'Uso degli Animali da Laboratorio dei National Institutes of Health (Pubblicazione n. 85-23, revisionata nel 1996). Il protocollo dello studio è stato approvato dal Comitato per la Cura e l'Uso Istituzionale degli Animali dell'Ospedale Anzhen di Pechino (Approvazione n. 81700293). Il protocollo dello studio è stato esaminato e approvato dal Comitato per la Cura e l'Uso degli Animali Istituzionali della nostra istituzione. Furono fatti tutti gli sforzi per minimizzare la sofferenza animale e ridurre il numero di animali utilizzati nello studio. I reagenti e le attrezzature utilizzate sono elencati nella Tabella dei Materiali.
1. Modello animale e progettazione sperimentale
2. Embolizzazione dell'arteria renale per l'induzione di una RI cronica moderata
Un catetere polifunzionale 5F è stato introdotto attraverso la guaina arteriosa e avanzato sotto guida fluoroscopica C-arm nell'aorta addominale. È stata eseguita una canulazione selettiva dell'arteria renale sinistra e l'angiografia basale dell'arteria renale è stata eseguita iniettando 5–8 mL di mezzo di contrasto iodurato non ionico a una velocità di 3 mL/s per visualizzare l'intero albero arterioso renale. Il posizionamento efficace del catetere è stato verificato dalla dimostrazione dell'intera arteria renale sinistra e dei suoi rami nelle immagini angiografiche.
Successivamente, la RI è stata indotta tramite embolizzazione transcateterica del ramo principale dell'arteria renale sinistra utilizzando granuli di spugna gelatinosa assorbibili (diametro 50 mg). I granuli di spugna gelatinosa sono stati preparati come una suspensa mescolando circa 50 mg di granuli con una miscela 1:1 di mezzo di contrasto e soluzione salina normale per un volume totale di circa 2–3 mL. La suspense di embolizzazione è stata iniettata lentamente tramite iniezione manuale attraverso il catetere per circa 2–3 minuti sotto monitoraggio fluoroscopico continuo. L'embolizzazione riuscita è stata confermata da una repetizione dell'angiografia dell'arteria renale sinistra, che ha dimostrato l'assenza di opacificazione arteriosa distale nei rami embolizzati. Dopo la conferma angiografica, il catetere e la guaina sono stati rimossi e l'arteria femorale è stata riparata con una sutura al polipropilene 6-0. La ferita chirurgica fu chiusa a strati e gli animali furono lasciati riprendersi sotto stretta sorveglianza.
Per il gruppo di controllo e il gruppo FA (procedura simulata), è stato eseguito lo stesso processo di cateterismo e un volume uguale (2–3 mL) di soluzione fisiologica normale è stato iniettato nell'arteria renale sinistra tramite il catetere multiuso dopo l'angiografia dell'arteria renale.
3. Induzione AF tramite stimolazione atriale rapida
Tre mesi dopo la procedura RI (o procedura simulata), la FA è stata indotta nel gruppo FA e nel gruppo RI+FA. La FA è stata indotta in un totale di 12 beagle (n = 6 nel gruppo AF e n = 6 nel gruppo RI+AF). Dopo la ri-anestetizzazione e l'accesso vascolare come descritto sopra, la vena femorale destra è stata canulata per l'inserimento del catetere. Un catetere a elettrodo quadripolare 6F (vedi Tabella dei Materiali) fu avanzato sotto guida fluoroscopica e posizionato sulla parete laterale dell'atrio destro. La corretta posizione del catetere è stata confermata dalla registrazione di elettrogrammi atriali caratteristici sul canale intracardiaco, mostrando chiare e nette deviazioni atriali. La soglia di stimolazione diastolica è stata determinata diminuendo progressivamente la tensione di uscita dello stimolatore in decrementi di 0,1 V da 5 V fino all'osservazione della perdita di cattura atriale; La tensione più bassa che raggiunge una cattura atriale costante 1:1 è stata registrata come soglia di stimolazione diastolica. Il rapido stimolo atriale (durata del ciclo di base, 60 ms, corrispondente a una frequenza di 1000 battiti al minuto; larghezza dell'impulso in uscita, 2 ms; tensione, 4 volte la soglia diastolica, tipicamente corrispondente a 2–4 V) veniva somministrato ininterrottamente per 180 minuti utilizzando uno stimolatore cardiaco per indurre la FA, come descrittoin precedenza 9. L'induzione FA riuscita è stata confermata dalla comparsa di intervalli R-R irregolari sostenuti sull'ECG superficiale e da potenziali atriali rapidi e disorganizzati sull'elettrogramma intracardiaco che persistono per almeno 1 minuto dopo una breve interruzione del pacing. Tutti e 12 i beagle (100%) hanno raggiunto una FA sostenuta al completamento del protocollo di stimolazione. La durata media della fibrillazione atriale sostenuta dopo la cessazione del pacing variava da 3 a 8 minuti prima della cardioversione spontanea al ritmo dei seni.
È importante notare che, a differenza dei protocolli di pacing a raffica (tipicamente raffiche da 3–10 s) usati per valutare la suscettibilità alla FA, l'approccio continuo di stimolazione atriale rapida di 180 minuti impiegato in questo studio è stato specificamente progettato per modellare la FA sostenuta e per stimolare un rimodellamento molecolare precoce. Questo protocollo è stato ben consolidato e ampiamente validato nella ricerca sulla FAcanina 9,10.
4. Progettazione sperimentale e assegnazione di gruppo
Gli animali sperimentali sono stati assegnati casualmente a quattro gruppi (n = 6 per gruppo): gruppo di controllo, gruppo RI, gruppo FA e gruppo RI combinato con gruppo FA (RI+AF). I Beagle nei gruppi RI e RI+AF hanno subito la procedura di embolizzazione RI al punto di partenza, mentre i Beagle nel gruppo di controllo e nel gruppo AF hanno ricevuto l'iniezione fittizia di soluzione fisiologica normale nell'arteria renale. Tre mesi dopo, la FA è stata indotta nei gruppi AF e RI+AF come descritto sopra. Una panoramica schematica dell'intero disegno sperimentale e della cronologia è presentata nella Figura 1.
5. Determinazione della clearance della creatinina
La clearance della creatinina (CCr) è stata determinata utilizzando il metodo di eliminazione endogena dellacreatinina di 30 minuti 11. Per un breve periodo, dopo l'anestesia, un catetere di Foley fu inserito nella vescica urinaria in condizioni asettiche, e la vescica fu completamente svuotata. È stato quindi avviato il periodo di raccolta delle urine di 30 minuti, durante il quale tutta l'emissione di urina veniva raccolta tramite catetere in un recipiente calibrato. Al termine del periodo di raccolta di 30 minuti, la vescica è stata nuovamente svuotata per garantire il completo recupero delle urine. Contemporaneamente, è stato prelevato un campione di sangue a metà strada dalla vena giugulare per la determinazione della creatinina plasmica. CCr è stato calcolato utilizzando la formula standard: CCr (mL/min/kg) = (concentrazione di creatinina nelle urine × volume urinario) / (concentrazione plasmatica di creatinina × tempo di raccolta), normalizzato al peso corporeo.
6. Raccolta di tessuti e campioni di sangue
I campioni di sangue sono stati prelevati dalla vena giugulare al momento della linea di base e prima del sacrificio nei tubi separatori di sieroEDTA e semplice 11. Alla fine, tutti i beagle sono stati soppressi con un'iniezione endovenosa di una dose letale di pentobarbital sodio a una dose di 150 mg/kg prima del recupero dall'anestesia. I reni venivano prelevati per l'esame istologico. I cuori venivano prelevati, e l'appendice atriale sinistra (LAA) veniva accuratamente dissezionata, congelata bruscamente in azoto liquido entro 5 minuti dall'escissione e conservata a −80 °C fino all'analisi molecolare. La LAA è stata selezionata per l'analisi tissutale perché è il sito più comune di formazione di trombosi nei pazienti con FA e rappresenta quindi la località anatomica clinicamente più rilevante per valutare la funzione endoteliale e il rischio di trombosi.
7. Osservazione istologica
I tessuti renali sono stati fissati con paraformaldeide tamponata neutra al 10% per 24 ore, disidratati tramite una serie di etanolo gradato (70%, 80%, 90%, 95% e 100% etanolo, 1 ora ciascuno), eliminati con xilene (due variazioni, 30 min ciascuno), incorporati nella paraffina e tagliati in fette di spessore 5 μm utilizzando un microtomo rotante. Successivamente, le fette sono state colorate con HE per osservare cambiamenti istopatologici. In particolare, le sezioni sono state deparaffinate nello xilene (due variazioni, 10 min ciascuna), reidratate attraverso una serie discendente di etanolo, colorate con soluzione di ematossilina per 5 minuti, differenziate nell'acido cloridrico-etanolo all'1% per 30 secondi, risciacquate con acqua del rubinetto corrente per 10 minuti, controcolorate con soluzione di eosina per 2 minuti, disidratate, pulite e montate con balsamo neutro. Le sezioni venivano esaminate al microscopio lucico con ingrandimenti di 100× e 400×.
8. Saggio immunoenzimatico legato agli enzimi (ELISA)
I campioni di sangue venivano centrifugati a 3000 × g a 4 °C per 20 minuti, poi il surnatante (plasma) veniva raccolto e conservato a −80 °C fino all'analisi. I livelli plasmamici di creatinina, azoto ureico, fattore di Von Willebrand (vWF), trombomodulina (TM), dimetilarginina asimmetrica (ADMA), ossido nitrico (NO), inibitore attivatore del plasminogeno-1 (PAI-1), attivatore tissutale del plasminogeno (t-PA), fattore di necrosi tumorale α (TNF-α), proteina C-reattiva ad alta sensibilità (hs-CRP), interleuchina-6 (IL-6), renina e aldosterone (ALD) sono stati esaminati utilizzando kit ELISA commerciali secondo le istruzioni dei produttori. Brevemente, sono stati aggiunti 100 μL di campione plasmatico o standard a micropiastre rivestite di anticorpi a 96 pozzi, incubati a 37 °C per 2 ore, lavati quattro volte con tampone di lavaggio, incubati con anticorpo biotinilato di rilevamento per 1 ora a 37 °C, lavati di nuovo, incubati con coniugato streptavidina-HRP per 30 minuti a 37 °C, seguiti dallo sviluppo del substrato TMB per 15–20 minuti al buio. La reazione fu interrotta con 50 μL di soluzione di stop e l'assorbanza fu misurata a 450 nm utilizzando un lettore a microplacche. Tutti i campioni sono stati analizzati in duplicato.
9. PCR quantitativa in tempo reale (qRT-PCR)
L'estrazione dell'RNA totale dai tessuti LAA è stata effettuata utilizzando il reagente TRIzol, seguita dal rilevamento della purezza e concentrazione dell'RNA tramite uno spettrofotometro con rapporti di assorbanza di 260/280 nm (intervallo accettabile 1,8–2,0). Un totale di 1 μg di RNA è stato trascritto inversamente in DNA complementare (cDNA) utilizzando un kit di reagenti RT PrimeScript. La reazione di trascrizione inversa è stata eseguita a 37 °C per 15 minuti, seguita da inattivazione a 85 °C per 5 secondi. Successivamente è stata eseguita una PCR quantitativa in tempo reale sul sistema PCR utilizzando SYBR Green Master Mix. Il programma di ciclo termico consisteva in una denaturazione iniziale a 95 °C per 5 minuti, seguita da 40 cicli di denaturazione a 95 °C per 10 secondi e ricottura/estensione a 60 °C per 30 secondi. Il segnale di fluorescenza veniva rilevato alla fine di ogni passaggio di estensione utilizzando il canale SYBR Green. I valori del ciclo di soglia (Ct) venivano determinati automaticamente dal software dello strumento. I cambiamenti di piega dei livelli di mRNA sono stati determinati utilizzando il metodo 2−ΔΔCt . β-actin fungeva da controllo interno. Tutti i campioni sono stati analizzati in triplice.
10. Western blotting
La proteina totale è stata estratta dai tessuti LAA utilizzando il tampone di lisi con il saggio di immunoprecipitazione radioimmune (RIPA) (composto da 50 mM Tris-HCl, pH 7,4, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0,5% desossicolato di sodio, 0,1% SDS, integrato con cocktail di proteasi e inibitori della fosfatasi; vedi Tabella dei Materiali). I tessuti sono stati omogeneizzati sul ghiaccio e centrifugati a 12.000 × g a 4 °C per 15 minuti, e il soprandante è stato raccolto. La concentrazione proteica è stata quantificata utilizzando un kit per analisi proteiche BCA. Successivamente, quantità uguali di proteine (30 μg per corsia) sono state sottoposte al 12% di SDS-PAGE per separazione a 80 V per 30 minuti (gel di impilamento), seguite da 120 V per circa 60 minuti (gel risolutivo) e quindi trasferite su membrane di fluoruro di polivinilidene (PVDF) a 300 mA per 90 minuti in tampone di trasferimento (25 mM Tris, 192 mM glicina, 20% metanolo). Le membrane sono state bloccate con il 5% di latte scremato disciolto in TBST (soluzione fisiologica con Tris-buffer con 0,1% Tween-20) a temperatura ambiente per 2 ore, e poi sondate con anticorpi primari (vedi Tabella dei materiali per fonti di anticorpi, numeri di catalogo e diluizioni) a 4 °C durante la notte. Il giorno seguente, le membrane sono state lavate tre volte con TBST (10 min ciascuna) e incubate con il corrispondente anticorpo secondario coniugato con HRP (vedi Tabella dei Materiali) per 2 ore a temperatura ambiente. Dopo tre ulteriori lavaggi TBST (10 min ciascuno), i blot sono stati visualizzati con un kit di chemiluminescenza (ECL) potenziata utilizzando un sistema di imaging a chemiluminescenza. La gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi (GAPDH) fungeva da controllo interno. L'analisi densitometrica è stata effettuata utilizzando il software ImageJ e i livelli relativi di espressione proteica sono stati normalizzati a GAPDH. I pesi molecolari approssimati delle proteine rilevate erano i seguenti: vWF (~260 kDa), TM (~60 kDa), sintetasi endoteliale di ossido nitrico (eNOS, ~130 kDa), sintetasi ossido nitrico indottibile (iNOS, ~130 kDa), PAI-1 (~45 kDa), t-PA (~70 kDa) e GAPDH (~36 kDa). Immagini a figura intera e non ritagliate del Western blot sono fornite nella Figura Supplementare 1 e nella Figura Supplementare 2.
11. Analisi statistica
Tutti i valori sono stati analizzati tramite software statistico e grafico e sono presentati come media ± deviazione standard (SD). La normalità della distribuzione dei dati è stata valutata utilizzando il test di Shapiro-Wilk prima dell'analisi parametrica. L'omogeneità della varianza è stata valutata utilizzando il test di Levene. Per i dati che soddisfano le ipotesi di normalità e omogeneità della varianza, è stato condotto un confronto tra differenze utilizzando ANOVA unidirezionale seguito dal test post hoc di Dunnett per confronti multipli con il gruppo di controllo. Per i dati che non soddisfano l'assunzione di normalità, è stato applicato il test di Kruskal-Wallis non parametrico seguito dal test post hoc di Dunn. In questo studio, tutte le variabili soddisfacevano le assunzioni di normalità e uguale varianza; pertanto, sono state applicate analisi parametriche ovunque. Nel software di analisi, i dati sono stati inseriti in tabelle di dati raggruppate, l'ANOVA unidirezionale è stata selezionata dal menu Analisi a Colonne, il test di Dunnett è stato scelto per confronti post hoc e la soglia di significatività è stata impostata a p < 0,05.
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Modello animale di IR e FA croniche moderate
Una panoramica schematica del disegno sperimentale e della timeline è presentata nella Figura 1. Le immagini rappresentative dell'angiografia dell'arteria renale sinistra prima e dopo l'embolizzazione tramite catetere, mostrate nella Figura 2A,B, hanno rivelato che i piccoli rami dell'arteria renale sono stati occlusionati con successo dopo l'embolizzaz...
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Il presente studio ha stabilito un modello animale in vivo di RI moderato combinato con fibrillazione atriale ed ha esplorato la patogenesi della disfunzione endoteliale atriale sinistra in queste condizioni patologiche. I principali risultati di questo studio sono i seguenti: innanzitutto, l'embolizzazione dell'arteria renale principale sinistra per 3 mesi nei beagle ha indotto con successo un IR moderato. In secondo luogo, un modello AF fu di fatto stabilito nei beagle. In ter...
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Gli autori dichiarano di non avere interessi in conflitto.
Questo lavoro è stato supportato dal Progetto Maggiore Nazionale di Scienza e Tecnologia per le Malattie Croniche Non Trasmissibili (n. 2024ZD052500, n. 2024ZD0521504), dalla National Natural Science Foundation of China (Grant No. 81700293 e No. 81970272) e dal Finanziamento di Ricerca ad Alto Livello dell'Ospedale Anzhen di Pechino (Funding Project No. 2025AZB5005).
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 6-0 Sutura in polipropilene | Ethicon (Johnson & Johnson) | 8706H | Per riparazione dell'arteria femorale |
| Catetere multifunzionale 5F | Cordis (Cardinal Health) | 521-550S | Per cannulazione e embolizzazione dell'arteria renale |
| Catetere elettrodo quadripolare 6F | St. Jude Medical | 401443 | Per il pacing atriale destro |
| Sheath introduttore vascolare 6F | Terumo | RS*A60K10SQ | Per l'accesso all'arteria femorale |
| Sistema PCR in tempo reale ABI 7500 | Applied Biosystems (Thermo Fisher Scientific) | 4351105 | Per il ciclo termico qRT-PCR e il rilevamento della fluorescenza |
| Granuli di spugna gelatinosa assorbibile (diametro 50 mg) | Jinling Pharmaceutical | — | Per l'embolizzazione transcatetere dell'arteria renale; preparato come slurry con mezzo di contrasto e soluzione salina (1:1) |
| Kit ELISA ADMA (canino) | Cusabio | CSB-E09297c | Per la misurazione della dimetilarginina asimmetrica plasmatica |
| Kit ELISA Aldosterone (canino) | Cusabio | CSB-E08014c | Per la misurazione dell'aldosterone plasmatico |
| Kit per dosaggio delle proteine BCA | Thermo Fisher Scientific | 23225 | Per la quantificazione della concentrazione proteica |
| Beagles (maschio, 4–5 anni, 10–12 kg) | Shanghai Jiao Tong University Agricultural Experimental Animal Farm Co., Ltd. | — | Beagles maschi sani; alloggiati singolarmente in condizioni standard |
| Sistema di fluoroscopia a braccio C | GE Healthcare | OEC 9900 Elite | Per la guida fluoroscopica durante la cateterizzazione e l'angiografia |
| Sistema di imaging a chemiluminescenza | Bio-Rad | ChemiDoc XRS+ | Per la visualizzazione delle bande del Western blot |
| Kit ELISA per creatinina (canino) | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | C011-2-1 | Per la misurazione della creatinina plasmatica |
| Tubo endotracheale con cuffia (ID 7.0–8.0 mm) | Covidien (Medtronic) | 86449 | Per l'intubazione endotracheale e la ventilazione meccanica |
| Stimolatore cardiaco DF-5A | Suzhou Dongfang Electronic Technology Research Institute | DF-5A | Per il pacing atriale rapido; impostazioni: BCL 60 ms, larghezza di impulso 2 ms, tensione 4× soglia |
| Substrato ECL per Western Blotting | Thermo Fisher Scientific | 32106 | Kit di chemiluminescenza migliorata per la visualizzazione del blot |
| Tubetti anticoagulanti EDTA | BD Vacutainer | 367835 | Per la raccolta del sangue (separazione del plasma) |
| Anticorpo primario eNOS (coniglio) | Cell Signaling Technology | 32027 | Diluizione 1:1000; per il Western blotting (~130 kDa) |
| Soluzione di Eosina Y (acquosa) | Solarbio | G1100 | Per il controcolore H&E (2 min) |
| Catetere urinario Foley (8 Fr) | C.R. Bard | 0165SI08 | Per la raccolta urinaria programmata durante la determinazione della CCr |
| Anticorpo primario GAPDH (coniglio) | Cell Signaling Technology | 5174 | Diluizione 1:1000; controllo interno per il Western blotting (~36 kDa) |
| GraphPad Prism (versione 8.0) | GraphPad Software | — | https://www.graphpad.com; per l'analisi statistica (ANOVA a una via, test di Dunnett's) |
| Soluzione di Ematossilina (Harris) | Solarbio | G1140 | Per la colorazione nucleare H&E (5 min) |
| Iniezione di Eparina Sodica (non frazionata) | Changzhou Qianhong Biopharma | H32022088 | 4000 UI diluite in 10 mL di soluzione salina normale; per l'anticoagulazione durante la cateterizzazione |
| Anticorpo secondario HRP-coniugato Anti-IgG di Capra (topo) | Cell Signaling Technology | 7076 | Diluizione 1:5000; per il Western blotting |
| Anticorpo secondario HRP-coniugato Anti-IgG di Capra (coniglio) | Cell Signaling Technology | 7074 | Diluizione 1:5000; per il Western blotting |
| Kit ELISA per hs-CRP (canino) | Cusabio | CSB-E08557c | Per la misurazione della proteina C-reattiva ad alta sensibilità plasmatica |
| Kit ELISA per IL-6 (canino) | R&D Systems | CA6000 | Per la misurazione dell'interleuchina-6 plasmatica |
| Software ImageJ (versione 1.53) | National Institutes of Health | — | https://imagej.nih.gov/ij/; per l'analisi densitometrica del Western blot |
| Anticorpo primario iNOS (coniglio) | Abcam | ab178945 | Diluizione 1:1000; per il Western blotting (~130 kDa) |
| Soluzione di Ringer Lattato | Baxter | 2B2324 | Fluido endovenoso; infuso a 5–10 mL/kg/h durante le procedure |
| Microscopio ottico | Olympus | BX53 | Per l'esame istologico delle sezioni renali colorate con HE |
| Ventilatore meccanico (veterinario) | Midmark | Matrx Model 3000 | Volume corrente 15 mL/kg; frequenza respiratoria 12–15 respiri/min |
| Lettore di micropiastre | BioTek | Synergy HTX | Per la misurazione dell'assorbanza ELISA a 450 nm |
| Paraformaldeide tamponata neutra (10%) | Solarbio | P1110 | Per la fissazione dei tessuti renali (24 h) |
| Kit ELISA per NO (canino) | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | A012-1-2 | Per la misurazione dell'ossido nitrico plasmatico |
| Mezzo di contrasto iodinato non ionico (Iohexol) | GE Healthcare | Omnipaque 350 | 5–8 mL per iniezione a 3 mL/s per l'angiografia dell'arteria renale |
| Kit ELISA per PAI-1 (canino) | Cusabio | CSB-E13043c | Per la misurazione dell'inibitore dell'attivatore del plasminogeno plasmatico |
| Anticorpo primario PAI-1 (coniglio) | Abcam | ab66705 | Diluizione 1:1000; per il Western blotting (~45 kDa) |
| Cera paraffinica | Leica Biosystems | 39601006 | Per l'impiallacciatura dei tessuti |
| Kit PrimeScript RT Reagent | Takara Bio |