Questo studio è stato approvato dal Comitato Etico della Ricerca Clinica dell'Università di Ordu (Approvazione: 09/11/2017–138). Lo studio è stato condotto in conformità con le pertinenti linee guida etiche istituzionali e nazionali, inclusa la Dichiarazione di Helsinki. Il consenso informato scritto è stato ottenuto da tutti i partecipanti coinvolti nello studio. Il consenso ottenuto copre esplicitamente le visite domiciliari e la raccolta di campioni di polvere domestica dalle abitazioni.
1. Progettazione dello studio
Si tratta di uno studio trasversale e descrittivo sulla prevalenza degli acari della polvere domestica condotto nella provincia di Ordu, in Turchia. Campioni di polvere domestica sono stati raccolti da specifiche superfici interne dove è comunemente previsto l'accumulo di acari. Il campionamento è stato effettuato da materassi, materiali per la biancheria da letto (cuscini e trapunte), tappeti e mobili imbottiti situati nelle camere da letto e nei salotti. La polvere veniva raccolta con un aspirapolvere portatile e i campioni provenienti da diversi luoghi all'interno della stessa casa venivano raccolti per formare un campione composito di polvere domestica.
2. Definizione della popolazione e della coorte clinica dello studio
La popolazione dello studio è composta da individui che hanno visitato le cliniche ambulatoriali di otorinolaringoiatria, naso e gola presso l'Ospedale di Educazione e Ricerca della Facoltà di Medicina dell'Università Ordu a causa di asma e/o disturbi allergici. I criteri di inclusione per i partecipanti erano avere 18 anni o più, acconsentire alla raccolta di campioni di polvere dal proprio ambiente domestico e accettare di rispondere al questionario. Gli individui che non hanno acconsentito a una visita domiciliare, non hanno fornito il consenso scritto o per i quali non è stato possibile ottenere campioni sufficienti di polvere domestica sono stati esclusi dallo studio. Le diagnosi cliniche sono state valutate sulla base delle autosegnalazioni dei pazienti e delle ragioni delle visite ambulatoriali in ambulatorio; Non è stata effettuata alcuna verifica clinica o test diagnostici. Ogni paziente è stato abbinato a un nucleo familiare e le analisi sono state condotte a livello familiare. La provincia di Ordu si trova nella regione orientale del Mar Nero della Turchia e presenta un clima umido e temperato con un'elevata umidità tutto l'anno, condizioni che possono favorire la sopravvivenza e la proliferazione degli acari della polvere domestica.
3. Unità di campionamento e metodo di campionamento
L'unità campionaria principale per questo studio era la famiglia. Sono stati prelevati diversi campioni di sotto-polvere da diverse località interne all'interno di ciascuna abitazione, con particolare attenzione alle camere da letto e alle aree living. Sebbene questi sottocampioni siano stati raccolti separatamente, sono stati aggregati e analizzati come un unico campione composito di polvere domestica in laboratorio per rappresentare l'esposizione complessiva agli acari in interno. Per stimare la densità degli acari, è stato processato circa 1 g di polvere da ciascun campione composito domestico utilizzando il metodo della precipitazione con acido lattico. Tutti gli acari osservati nelle vetrine microscopiche preparate derivate da questo campione di polvere sono stati conteggiati. Il numero totale di acari rilevati veniva poi espresso come il numero di acari per grammo di polvere domestica.
Ogni nucleo familiare è stato campionato una sola volta e non è stato effettuato alcun campionamento ripetuto. I campioni di polvere domestica sono stati raccolti utilizzando sacchi usa e getta assegnati a ciascuna area di campionamento e un aspirapolvere portatile con una potenza di aspirazione di 1200 W. Il campionamento è stato effettuato a una velocità standardizzata di circa 2 min/m2 per garantire coerenza e riproducibilità in tutte le famiglie.
4. Procedure di laboratorio e identificazione degli acari
Una volta portati in laboratorio, i campioni venivano setacciati per rimuovere particelle grossolane. I campioni sono stati esaminati con il metodo della precipitazione dell'acido lattico. Il metodo della precipitazione dell'acido lattico veniva utilizzato per chiarire i campioni di polvere dissolvendo i detriti organici, facilitando la separazione e visualizzazione degli acari e consentendo una rilevazione microscopica affidabile e un'identificazione morfologica. Un grammo di polvere domestica è stato aggiunto a 5 mL di acido lattico al 90% nei provetti. I tubi sono stati delicatamente miscelati e incubati per 1 ora. Dopo l'incubazione, i campioni raccolti sia dalla superficie che dal fondo del liquido venivano montati tra un vetrino e un coperto e esaminati al microscopio a 100×, 200× e 400×ingrandimenti 15. L'identificazione delle specie è stata successivamente effettuata su campioni di polvere in cui sono stati rilevati acari.
I campioni in cui sono stati rilevati acari sono stati definiti "positivi agli acari". La presenza di almeno un acaro in qualsiasi fase di sviluppo (larva, ninfa o adulto) in un'abitazione era considerata sufficiente affinché la dimora fosse considerata positiva agli acari. Per l'identificazione della specie in campioni positivi, gli acari visibili sotto stereomicroscopio venivano raccolti utilizzando un ago di siringa a punta fine dopo la filtrazione dal surnatante su carta filtrante e montati nel mezzo di Hoyer. I campioni preparati venivano esaminati al microscopio lucino per l'identificazione morfologica. Le analisi statistiche sono state effettuate utilizzando softwaredi analisi statistica 16,17,18,19,20. Gli esemplari sono stati identificati secondo specie, genere o livelli tassonomici superiori a seconda della fase di sviluppo e della disponibilità di caratteristiche diagnostiche. Dermatophagoides spp. include stadi larvali, protonimfi e deutonimphe che non sono stati identificati in modo affidabile a livello di specie. Oribatida rappresenta gli acari identificati a livello di ordine. Larva e ninfa non identificate si riferiscono a esemplari immaturi, e imago non identificati a esemplari adulti, che non potevano essere classificati tassonomicamente a causa di caratteristiche morfologiche insufficienti o danneggiate. Il numero totale rappresenta il conteggio cumulativo di tutti gli individui di acari rilevati nei campioni positivi.
5. Applicazione del sondaggio e definizioni di variabili
Ai partecipanti è stato somministrato un sondaggio contenente domande su caratteristiche demografiche, struttura abitativa, fattori ambientali e disturbi allergici. I dati sono stati valutati sulla base delle dichiarazioni dei partecipanti e non sono stati clinicamente verificati.
6. Analisi statistica
L'associazione tra variabili categoriche è stata esaminata utilizzando il test chi-quadrato, e la variazione della densità degli acari in base alle caratteristiche demografiche e vitali è stata esaminata utilizzando i test Mann-Whitney U o Kruskal-Wallis. La regressione logistica binaria è stata utilizzata per esaminare l'associazione tra la variabile dipendente (positività degli acari) e le variabili indipendenti. Sono stati calcolati i odds ratios (OR) con intervalli di confidenza (IC) al 95%.