Effetto regolatorio della moxibustion sulla polarizzazione e migrazione dei macrofagi nei ratti modello RA e il ruolo di TIM-3

Sommario

Questo studio esamina gli effetti regolatori della moxibustione sulla polarizzazione e migrazione dei macrofagi nei modelli ratti di artrite reumatoide, con particolare attenzione al ruolo dell'immunoglobulina a cellule T e della proteina contenente il dominio mucinico 3 (TIM-3), per chiarire i meccanismi terapeutici della moxibustion in questa malattia.

Abstract

Questo studio mirava a esaminare gli effetti regolatori della moxibustion sulla polarizzazione e migrazione dei macrofagi in un modello ratto di artrite reumatoide, nonché il ruolo dell'immunoglobulina a cellule T e della proteina contenente il dominio mucino 3 (TIM-3) in questo processo. Il giorno 0 dell'esperimento, i ratti Sprague–Dawley (SD) sono stati divisi in cinque gruppi. L'adiuvante di Freund completo (CFA) è stato iniettato nei cuscinetti posteriori per stabilire il modello dell'artrite reumatoide. Inoltre, l'interferenza di RNA Havcr2 mediata da lentivirus (LV-Havcr2-RNAi) è stata iniettata nei cuscinetti posteriori per inibire l'espressione di TIM-3. A partire dal giorno 7, i ratti hanno subito il trattamento per moxibustione in cicli comprendenti sei giorni di trattamento e un giorno di riposo, per un totale di tre cicli completi. Dopo il completamento della terapia con moxibustione, lo stato infiammatorio è stato valutato tramite analisi istologica e misurazione dello spessore delle zampe. I marcatori fenotipici dei macrofagi M1 e M2 sono stati valutati tramite un saggio immunosorbente legato agli enzimi (ELISA) e immunofluorescenza. L'espressione di TIM-3 è stata rilevata tramite reazione a catena della polimerasi in tempo reale quantitativa (qRT-PCR) e Western blot. Inoltre, macrofagi essudati peritoneali (PEM) sono stati isolati da altri ratti SD e la migrazione dei macrofagi è stata esaminata tramite un test di Transwell. Lo studio ha rilevato che, dopo l'iniezione di CFA, i ratti hanno mostrato un significativo rossore e gonfiore delle zampe, insieme a uno squilibrio nell'espressione del fenotipo dei macrofagi. Inoltre, i test di migrazione di Transwell hanno rivelato che i ratti modello indotti dalla CFA hanno mostrato un aumento della migrazione dei macrofagi rispetto agli esemplari controllo. Tuttavia, il trattamento con moxibustion attenuò questi cambiamenti. I risultati hanno anche dimostrato che la moxibustion ha aumentato l'espressione di TIM-3 e, dopo l'intervento lentivirale, i livelli di TIM-3 sono stati notevolmente ridotti, portando all'esacerbazione delle manifestazioni infiammatorie e a uno squilibrio dei macrofagi. Questi risultati indicano che TIM-3 funge da mediatore chiave nella regolazione della mossibustion della polarizzazione e migrazione dei macrofagi.

Introduzione

L'artrite reumatoide (AR) è un disturbo autoimmune sistemico diffuso che si manifesta clinicamente con artrite infiammatoria simmetrica. L'infiammazione colpisce principalmente la membrana sinoviale, la cartilagine e l'osso, causando distruzione dei tessuti e culminando in una deformità articolare^{irreversibile 1}. La gestione farmacologica attuale dell'AR si basa principalmente su farmaci antireumatici modificanti della malattia (DMARD^)2, che spesso richiedono somministrazione a vita. Tuttavia, questi agenti terapeutici sono associati a vari effetti avversi. Di conseguenza, un numero significativo di pazienti cerca terapie complementari sicure ed efficaci per alleviare i sintomi clinici e potenzialmente ridurre la dipendenza dai regimi farmacologici convenzionali. Come componente chiave della medicina tradizionale cinese, la moxibustione può rappresentare una promettente terapia complementare per l'AR. Esercita i suoi effetti terapeutici attraverso meccanismi sistemici antinfiammatori e^{immunomodulatori.} Le evidenze indicano che la moxibustione può alleviare i sintomi e proteggere le strutture^{articolari 4}. Inoltre, rispetto alla potenziale tossicità epatorenale, ai rischi di infezione e agli elevati costi associati ai DMARD, la moxibustione offre una sicurezza superiore e costi inferiori. Tuttavia, la moxibustion non è una panacea e non può sostituire completamente i DMARD per la gestione dell'AR. La moxibustione richiede tipicamente sedute di trattamento ripetute e a lungo termine per ottenere i suoi effetti. Durante le esacerbazioni acute dell'AR, potrebbe non garantire un controllo rapido dei sintomi. Inoltre, l'esito terapeutico della moxibustion dipende fortemente dalle competenze e dall'esperienza del professionista, introducendo variabilità. Di conseguenza, l'integrazione della moxibustione con i DMARD dovrebbe essere considerata per ottenere un effetto sinergico di "efficacia aumentata con tossicità ridotta", rendendola una strategia valida per la gestione a lungo termine^{dell'AR 5}.

Sebbene numerosi studi abbiano confermato l'efficacia terapeutica della moxibustion^{nell'AR 6,7,8}, i suoi meccanismi d'azione precisi rimangono poco chiari. Questo studio indaga gli effetti della moxibustion sulla polarizzazione e migrazione dei macrofagi nell'AR, utilizzando immunoglobuline delle cellule T e proteina contenente il dominio mucinico 3 (TIM-3) come punto di ingresso meccanicistico. Questo approccio è progettato per chiarire un potenziale percorso immunomodulatore attraverso il quale la moxibustion esercita i suoi effetti anti-artritici.

In quanto cellule immunitarie fondamentali, i macrofagi svolgono un ruolo centrale nella patogenesi e nella progressione dell'AR ^9,10. All'insorgenza dell'infiammazione, i macrofagi residenti nei tessuti rilasciano una varietà di citochine e chemimochine. Queste molecole di segnalazione agiscono sulle cellule endoteliali vascolari, favorendo la differenziazione dei monociti circolanti nei macrofagi e il loro successivo reclutamento nei tessuti^{infiammati 11,12}. Questi macrofagi infiltranti amplificano ulteriormente la risposta infiammatoria producendo mediatori aggiuntivi, che a loro volta reclutano più macrofagi e aggravano l'infiltrazione tissutale, stabilendo così un circolo vizioso di infiammazione e infiltrazione tissutale.

A seconda degli stimoli ambientali, i macrofagi mostrano una significativa plasticità polarizzandosi in fenotipi funzionali distinti, principalmente stati M1 (attivato classicamente) e M2 (attivato alternativamente^{) 13}. In condizioni fisiologiche, la polarizzazione dei macrofagi mantiene un equilibrio dinamico tra i fenotipi M1 e M2. Tuttavia, nell'AR, questo equilibrio è interrotto, caratterizzato da una maggiore polarizzazione M1 con un maggiore rilascio di mediatori pro-infiammatori, tra cui interferone (IFN)-γ e ossido nitrico indottibile (iNOS), che aggrava le risposte infiammatorie. Contemporaneamente, la polarizzazione M2 si indebole, accompagnata da un rilascio ridotto di fattori antinfiammatori, tra cui interleucina (IL)-4 e CD206, compromettendo la loro capacità di inibire l'attivazione e la proliferazione delle cellule T, aggravando così la progressione della^{malattia 14}. Numerose indagini hanno rivelato che modulare il bilancio dei macrofagi M1/M2 può mitigare la progressione^{dell'AR 15,16}.

TIM-3, identificata come glicoproteina superficiale delle cellule T, è ampiamente espressa su uno spettro di cellule immunitarie, inclusi cellule T, macrofagi e cellule natural killer, dove si lega a specifici liganti per esercitare funzioni^{immunoregolatrici 17}. La segnalazione TIM-3 esercita un'influenza definitiva sull'espressione e sulla polarizzazione delle citochine infiammatorie dei macrofagi. In particolare, TIM-3 è fortemente espresso sui macrofagi M2, dove promuove il fenotipo M2 mentre sopprime il fenotipo M1. Al contrario, la ricerca indica che l'inibizione di TIM-3 produce l'effetto opposto, guidando la polarizzazione M1 e attenuando la polarizzazione M2 18,19,20. Inoltre, le evidenze evidenziano TIM-3 come un regolatore chiave del comportamento migratorio dei^{macrofagi 21,22}. Pertanto, l'intervento terapeutico rivolto a TIM-3 per controllare la polarizzazione dei macrofagi e la dinamica migratoria mostra un notevole potenziale come strategia di trattamento della RA.

Basandosi sulla motivazione sopra menzionata, questo studio è stato condotto per contribuire al crescente corpo di conoscenze sui meccanismi con cui la moxibustion esercita i suoi effetti terapeutici nell'AR.

Protocollo

Dichiarazione Etica e Precauzioni di Sicurezza
Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal Comitato Etico dell'Università di Medicina Tradizionale Cinese di Chengdu (2024029). Durante tutte le procedure di iniezione, inclusa la somministrazione di CFA e lentivirus, gli operatori devono indossare dispositivi di protezione individuale (DPI) composti da guanti usa e getta, occhiali protettivi e camici da laboratorio. Queste procedure devono essere condotte all'interno di un armadietto di biosicurezza o in un ambiente ben ventilato. Tutti gli oggetti appuntiti che sono entrati in contatto con i reagenti devono essere immediatamente scartati in contenitori designati per i taglienti. Durante tutto il trattamento di moxibustione, l'operatore monitorava attentamente la risposta dell'animale. Il cono moxa è stato sostituito rapidamente per prevenire danni termici alla pelle. Inoltre, i materiali infiammabili devono essere tenuti lontani dalla moxa in fiamme per eliminare i rischi di incendio.

1. Istituzione del modello RA

Trenta ratti maschi SD (peso: 200 ± 20 g), di età di sei settimane (numero di licenza: SCXK 2020-030), sono stati divisi casualmente in cinque gruppi (n = 6): gruppo di controllo, gruppo modello RA (gruppo RA), gruppo di trattamento RA + moxibustion (gruppo Mox), gruppo di interferenza lentivirus RA + TIM-3 (gruppo RA + TIM-3) e gruppo di trattamento interferenza lentivirus RA + TIM-3 + moxibustion (RA + TIM-3– + gruppo Mox). Prima dell'esperimento, i ratti venivano acclimatati per sette giorni in un ambiente controllato con una temperatura di 22–24 °C, umidità del 20% e un ciclo naturale luce/buio, con libero accesso a cibo e acqua. Al giorno 23 dell'esperimento, sono stati acquistati altri cinque ratti SD maschi di tre settimane dalla stessa azienda. Questi ratti sono stati acclimatati per cinque giorni in condizioni di alloggio identiche prima di essere utilizzati per l'estrazione del PEM. Un diagramma schematico che riassume la procedura sperimentale e fotografie procedurali rappresentative sono mostrati nella Figura 1.

Il giorno 0 dell'esperimento, sono stati iniettati 0,5 mL/kg di CFA nei cuscinetti posteriori di tutti i ratti tranne quelli del gruppo di controllo per indurre l'AR. Lo stesso volume di soluzione salina è stato somministrato nello stesso luogo nei ratti del gruppo di controllo. Lo spessore delle zampe è stato utilizzato come criterio per valutare il successo dell'istituzione del modello^{RA 23}.

2. Iniezione di lentivirus

I ratti nei gruppi RA + TIM-3^- e RA + TIM-3^- + Mox hanno ricevuto iniezione di LV-Havcr2-RNAi (94435-1) nei cuscinetti posteriori delle zampe (3,5 × 10⁷ TU/mL; 10 μL per cuscinetto) al primo giorno dell'esperimento. Tutti gli altri ratti hanno ricevuto iniezioni identiche di soluzione salina normale nello stesso sito^{anatomico 24}.

3. Moxibustion

Al settimo giorno dell'esperimento, i ratti nei gruppi Mox e RA + TIM-3^- + Mox hanno ricevuto un trattamento con moxibustione. Per facilitare la procedura, i capelli in un'area di circa 1 × 1 cm intorno ai punti di agopuntura BL23 e ST36 sono stati rasati (questa procedura è stata eseguita anche per i ratti dei gruppi rimanenti). Durante la moxibustione, ogni ratto veniva delicatamente legato a un blocco di legno leggermente più grande della sua dimensione corporea usando due elastici per esporre completamente le aree trattate (i ratti di altri gruppi erano altrettanto immobilizzati). Successivamente, sono stati applicati coni moxa a forma di grano su entrambi i punti di agopuntura. Per garantire la coerenza della stimolazione termica tra gli individui, ogni cono di moxa (diametro: 2 mm; altezza: 5 mm; contenuto di lana di moxa: 60%) è stato preparato da una porzione standardizzata di lana di moxa da 5 mg. Ogni giorno, cinque coni venivano applicati ai due punti di agopuntura su un lato del corpo, con il trattamento alternato al lato controlaterale il giorno successivo. Questo protocollo di trattamento alternato è stato mantenuto per tre settimane, con un periodo di riposo di un giorno ogni settimo giorno.

Dopo tre cicli di trattamento con moxibustione, i ratti sono stati anestetizzati con isoflurano (induzione 4%, mantenimento del 2%, inalazione) e sono stati prelevati 5 mL di sangue arterioso dall'aorta addominale. Dopo la centrifugazione (2.000 × g, 15 min, 4 °C), il siero soprantantante veniva trasferito in tubi microcentrifughe e conservato a −20 °C. Dopo il prelievo di sangue, i ratti sono stati soppressi per lussazione cervicale. Le articolazioni della caviglia sono state accuratamente dissezionate e fissate con paraformaldeide al 4%. I tessuti sinoviali e le milze venivano rapidamente congelati usando azoto liquido e conservati a −80 °C.

4. Misurazione dello spessore delle zampe di ratto

I punti centrali delle zampe posteriori dei ratti erano segnati con un pennarello impermeabile per garantire una posizione costante delle misurazioni. Lo spessore della zampa è stato misurato utilizzando pinze vernier prima della modellazione, dopo la modellazione riuscita e tra ogni ciclo di trattamento (nei giorni 0, 7, 14, 21 e 28 dell'esperimento).

5. Analisi istologica

Dopo la fissazione nel 4% di paraformaldeide, le articolazioni della caviglia del ratto sono state inserite in tubi centrifughe contenenti un abbondante volume di soluzione di decalcificazione (acido formico al 10%). I tubi venivano montati su uno shaker e sottoposti a una leggera agitazione a temperatura ambiente per 30 ore. Durante questo periodo, la soluzione di decalcificazione veniva sostituita a intervalli regolari e le condizioni dei tessuti venivano monitorate per prevenire la decalcificazione eccessiva. Successivamente, i tessuti sono stati trasferiti in una soluzione al 5% di tiosolfato di sodio per la neutralizzazione nell'arco di 6 ore, seguita da un accurato risciacquo di 4 ore sotto acqua del^{rubinetto corrente per 25} ore. I tessuti venivano quindi disidratati e inseriti in blocchi di paraffina. Le sezioni furono tagliate trasversalmente con uno spessore di 5 μm. Dopo la deparaffinizzazione e l'idratazione, le sezioni sono state colorate con ematossilina per 3 minuti, risciacquate con acqua, differenziate brevemente (5 secondi), risciacquate di nuovo e bluizzate per 5 secondi, seguite da un risciacquo accurato sotto acqua corrente del rubinetto. Successivamente, le sezioni sono state disidratate al 95% di etanolo per 1 minuto e controcolorate con eosina per 15 secondi. Infine, le sezioni venivano disidratate, ripulite e montate con un coperto per l'osservazione al microscopio ottico. Con questa colorazione, i nuclei apparivano blu, mentre citoplasma, fibre di collagene e globuli rossi venivano visualizzati in diverse sfumature di rosa; Lo strato cheratinizzato tipicamente si tingeva di rosso acceso.

6. ELISA

Seguendo il protocollo del produttore, veniva aggiunta una aliquota di 100 μL di ciascun campione siero (pre-diluito 1:2) ai pozzi designati. Furono inclusi in parallelo pozzi vuoti e standard. Dopo la sigillatura, la piastra è stata incubata a 37 °C per 90 minuti. Dopo un passaggio di lavaggio, l'anticorpo di rilevamento è stato aggiunto e incubato a 37 °C per 60 minuti. Dopo un altro lavaggio, è stato aggiunto il coniugato streptavidina–HRP. Dopo un lavaggio accurato, veniva aggiunta la soluzione di substrato per lo sviluppo del colore, che veniva interrotta con l'aggiunta della soluzione di stop. L'assorbanza è stata misurata a 450 nm (OD₄₅₀). Le concentrazioni campionarie di IL-4 e IFN-γ sono state determinate tramite interpolazione dalla curva standard, e le concentrazioni finali sono state calcolate moltiplicando per il rispettivo fattore di diluizione.

7. qRT-PCR

L'RNA totale è stato estratto da campioni di siero utilizzando il reagente TRIzol secondo un protocollo modificato. Per un breve periodo, 100 μL di siero sono stati omogeneizzati con 1 mL di reagente TRIzol tramite pipetazione vigorosa. Successivamente, sono stati aggiunti 100 μL di cloroformio e la miscela è stata agitata vigorosamente per 15 secondi, seguita da incubazione a temperatura ambiente per 3 minuti. Il campione è stato poi centrifugato a 12.000 × g per 15 minuti a 4 °C per ottenere la separazione di fase. La fase acquosa superiore è stata accuratamente trasferita in un nuovo tubo, miscelata con 0,5 mL di isopropanolo e incubata a temperatura ambiente per 10 minuti. Successivamente, l'RNA totale è stato messo in pellet tramite centrifugazione a 12.000 × g per 10 minuti a 4 °C. Il pellet di RNA risultante è stato lavato una volta con 1 mL di etanolo al 75% (centrifugazione a 8.000 × g per 5 minuti a 4 °C) e asciugato all'aria prima della dissoluzione finale. L'RNA ottenuto è stato sottoposto a trascrizione inversa utilizzando un kit di sintesi del cDNA. L'analisi dell'espressione genica è stata effettuata tramite qRT-PCR utilizzando software di sistema PCR quantitativo in tempo reale. β-actina veniva utilizzata come gene di mantenimento per la normalizzazione. L'espressione relativa dell'mRNA di TIM-3 è stata calcolata utilizzando il metodo 2^−ΔΔCt . I dettagli degli innesco sono aggiunti nella Tabella 1.

8. Western blot

La milza estratta è stata lavata tre volte con soluzione salina fosfato tamponata (PBS) preraffreddata, tagliata in piccoli pezzi e lisata aggiungendo tampone di lisi a un volume dieci volte superiore a quello del tessuto. L'omogeneizzazione è stata effettuata utilizzando un tubo omogeneizzatore. L'omogeneato è stato messo sul ghiaccio per 30 minuti per la lisi, con cinque o sei cicli di vortici per garantire la completa interruzione del tessuto. I campioni sono stati centrifugati a 12.000 × g per 10 minuti a 4 °C, e il soprannatante è stato raccolto come estratto proteico totale. Le concentrazioni di proteine target sono state misurate utilizzando il saggio sull'acido bicinconinico (BCA) secondo il protocollo del kit.

Dopo la separazione tramite elettroforesi in gel di dodecil solfato di sodio e poliacrilamide al 10% (SDS–PAGE), i campioni proteici estratti sono stati trasferiti in una membrana di difluoruro di polivinilidene (PVDF). La membrana è stata bloccata a temperatura ambiente per 1 ora con soluzione salina Tween 20 (TBST) tamponata con Tris-buffer, integrata con il 5% di latte scremato, seguita da un'incubazione notturna a 4 °C con anticorpi primari. Dopo un lavaggio accurato, la membrana è stata incubata con anticorpi secondari coniugati perossidasi di rafano (HRP) a 37 °C per 2 ore. Infine, le immagini sono state catturate utilizzando un sistema di imaging chemiluminescenza e analizzate per l'intensità in scala di grigi con il software di analisi ChemiScope. I dettagli degli anticorpi primari e secondari sono elencati nella Tabella 1.

9. Rilevamento dell'immunofluorescenza

Il tessuto sinoviale estratto è stato immerso nel 4% di paraformaldeide, disidratato e incorporato nella paraffina prima di essere sezionato in fette spesse 5 μm. Le sezioni sono state decerate in sequenza in xilene I, xilene II e xilene III (10 min ciascuna), seguite da tre lavaggi in etanolo assoluto (5 min ciascuno) e un ultimo risciacquo con acqua distillata.

Dopo il prelievo dell'antigene nell'acido etilendediaminatetraacetico (EDTA), le vetrine sono state lavate tre volte in soluzione salina tamponata fosfato (PBS) (5 min ciascuna) con una delicata agitazione. Le sezioni sono state poi bloccate con incubazione con albumina sierica bovina al 3% (BSA) per 30 minuti a temperatura ambiente. Dopo il blocco, sono stati applicati e incubati a 4 °C a 4 °C gli anticorpi primari, tra cui la sintasi anti-indottibile di ossido nitrico (iNOS) (1:500) e l'anti-CD206 (1:400).

Dopo tre lavaggi PBS da 5 minuti, le sezioni sono state incubate per 50 minuti a 37 °C al buio con un anticorpo secondario (IgG anti-coniglio di capra coniugato con Cy3, 1:300). La colorazione nucleare è stata eseguita lavando i vetrini tre volte con PBS (5 min per lavaggio), seguita dal trattamento con soluzione di colorazione 4′,6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI) e da un'incubazione di 10 minuti a temperatura ambiente al buio. Le immagini sono state esaminate al microscopio a fluorescenza.

10. Isolamento dei PEM

Dopo l'eutanasia per lussazione cervicale, i ratti sono stati disinfettati al 75% di etanolo per 10 minuti e trasferiti in un armadietto sterile di biosicurezza. La pelle addominale è stata incisa con forbici sterili, seguita da un'iniezione intraperitoneale di 15 mL di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) con una siringa. L'addome veniva delicatamente massaggiato prima che il liquido peritoneale venisse aspirato nuovamente nella siringa e trasferito nei tubi centrifughe per ottenere sospensioni di macrofagi.

La sospensione cellulare è stata lavata tre volte con PBS prima di essere seminata nel medium Eagle modificato (DMEM) di Dulbecco, contenente il 10% di siero bovino fetale (FBS). Le cellule sono state coltivate per 24 ore in un'atmosfera umidificata al 5% di CO₂ a 37 °C. Le cellule aderenti ottenute dopo questo periodo di incubazione sono state identificate come macrofagi.

11. Transwell

Il test di migrazione è stato condotto utilizzando piastre a 24 pozzi. Dopo 24 ore di carestia sierica, sono stati aggiunti 4 × 10⁴ macrofagi in 300 μL di DMEM integrati con siero bovino fetale (FBS) all'1% e antibiotici all'1% (50 U/mL penicillina, 50 μg/mL di estreptomicina) nella camera superiore, mentre nella camera inferiore sono stati introdotti 700 μL di DMEM contenenti il 10% di FBS e l'1% di antibiotici. Le cellule sono state pretrattate con siero di diversi gruppi di ratti per 24 ore. Successivamente, le placche sono state incubate a 37 °C in un ambiente al 5% di CO₂ per 24 ore. Dopo la colorazione viola cristallino, la camera superiore veniva tamponata per rimuovere le cellule non migrate. Le cellule migranti sono state quantificate tramite conteggio manuale su quattro campi visivi selezionati casualmente sotto un microscopio ottico.

12. Analisi statistica

Le analisi statistiche sono state effettuate utilizzando SPSS versione 25.0. I dataset sono stati inizialmente testati per la normalità e l'omogeneità delle varianze. Quando queste ipotesi parametriche sono state soddisfatte, sono stati effettuati confronti tra gruppi utilizzando un'analisi unidirezionale della varianza (ANOVA) seguita da un'analisi post hoc a differenza minima significativa (LSD). Per i dati che violavano queste assunzioni, è stato applicato il test non parametrico di Kruskal–Wallis, seguito dai test Mann–Whitney U con correzione appropriata per confronti multipli. Tutti i valori sono stati espressi come media ± deviazione standard, e P < 0,05 è stato considerato statisticamente significativo.

Risultati

Disponibilità dei dati
I dati grezzi generati durante lo studio attuale sono disponibili nel repository Figshare (https://doi.org/10.6084/m9.figshare.31550197)

Patologia articolare e spessore delle zampe nei ratti dopo il trattamento con moxibustion
I ratti iniettati con CFA hanno sviluppato un evidente gonfiore e arrossamento delle zampe. La colorazione di ematossilina e...

Discussione

La gestione attuale dell'AR si basa prevalentemente sui DMARD. Tuttavia, questi agenti farmacologici sono spesso costosi e associati a effetti avversi non trascurabili, tra cui insufficienza epatorenale e infezioni^{gravi 2}, imponendo un onere significativo su individui e sistemi sanitari. Al contrario, come trattamento esterno, la moxibustione presenta un profilo di sicurezza favorevole con un rischio minimo segnalato di tossicità sistemica. La sua tecnica è relati...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Completamente Freund' s Adiuvante (CFA)	Sigma-Aldrich	F5881	Utilizzato per induire l'artrite reumatoide (AR) modello nei ratti
Lentivirus (RNAi TIM-3)	GenChem Biotechnology, Shanghai	3,5 e volte; 107 TU/mL	Usato per silenziare l'espressione del genio TIM-3
Coni moxa (dimensioni grano)	Fornitore di Medicina Tradizionale Cinese	N/A	Utilizzato per la moxibustion ai punti di agopuntura BL23 e ST36