Sintesi verde di nanoparticelle di magnesio da piante native neotropicali della savana per formulazioni nanofitocosmetiche scalabili

Sommario

Questo lavoro descrive un protocollo per la sintesi verde di nanoparticelle di magnesio utilizzando estratto vegetale di Stryphnodendron adstringens , una specie della Native Neotropical Savannah, seguito dalla loro incorporazione e valutazione in una formulazione sierologica cosmetica.

Abstract

Questo studio descrive un protocollo per la sintesi verde di nanoparticelle a base di magnesio utilizzando estratti di etanolo di Stryphnodendron adstringens, una specie vegetale originaria della savana neotropicale, e la loro incorporazione in formulazioni nanofitocosmetiche. La procedura include la raccolta e la preparazione del materiale vegetale, seguita dall'estrazione con etanolo, in cui i fitochimici agiscono come agenti riducenti e stabilizzanti per gli ioni magnesio. Le nanoparticelle vengono sintetizzate in condizioni controllate utilizzando cloruro di magnesio ed estratti vegetali, consentendo un processo ecologico senza l'uso di agenti tossici riducenti. Le proprietà delle nanoparticelle sono caratterizzate tramite scattering dinamico della luce e microscopia a forza atomica per valutare la distribuzione delle dimensioni, la morfologia e il comportamento colloidale. Il protocollo descrive inoltre l'incorporazione delle nanoparticelle sintetizzate in una formulazione di siero cosmetico. La stabilità viene valutata in condizioni di conservazione controllate monitorando le proprietà organolettiche, il pH e la viscosità. Questo metodo fornisce un approccio riproducibile e sostenibile per la produzione di nanoparticelle di magnesio mediate da piante e per valutare la loro applicazione in formulazioni cosmetiche.

Introduzione

Il dominio fitogeografico del Cerrado, che comprende la più grande formazione di savana neotropicale del Sud America, rappresenta la regione della savana tropicale più biodiversa al mondo. Questo ecosistema ospita migliaia di specie vegetali ricche di metaboliti secondari come flavonoidi, polifenoli, terpeni e acidi fenolici, molti dei quali mostrano attività documentate di antiossidanti, antinfiammatori e fotoprotettivi di interesse per le industrie cosmetiche e ^{farmaceutiche} 1,2,3,4 . Questi fitochimici sono ampiamente incorporati come principi attivi di alto valore nelle formulazioni cosmetiche funzionali. Oltre alla loro attività biologica, i gruppi funzionali idrossile e carbonilico presenti in molti polifenoli e flavonoidi permettono loro di agire come agenti naturali riducenti e stabilizzanti per gli ioni metallici in^{soluzione 5,6}. Questa proprietà chimica è stata sempre più esplorata nella nanotecnologia verde per la sintesi di nanoparticelle metalliche, rappresentando un'opportunità promettente e poco esplorata per sviluppare formulazioni cosmetiche sostenibili derivate dalla biodiversità^neotropicale 2,3,4,5,6.

Tradizionalmente, le nanoparticelle (NP) sono state prodotte tramite approcci top-down, in cui i materiali sfusi vengono scomposti in particelle nanodimensionate utilizzando metodi fisici come l'ablazione laser o lo sputtering, e approcci bottom-up, in cui i NP vengono costruiti da unità più piccole utilizzando vie chimiche^{o biologiche 7}. Sebbene i metodi chimici e fisici siano efficaci, spesso si basano su reagenti tossici, elevato consumo energetico e attrezzature complesse. Questo ha portato all'ascesa di approcci di chimica verde, che enfatizzano la sostenibilità, l'eco-rispettabilità e la sicurezza nella produzione^{di nanomateriali.}

All'interno di questo contesto, la sintesi verde dei NP ha ricevuto notevole attenzione. La capacità dei fitochimici vegetali di agire simultaneamente come agenti riducenti, stabilizzanti e copri, consentendo la sintesi efficiente di NP di metalli e ossidi metallici, combinata con le limitazioni dei metodi convenzionali, che richiedono attrezzature specializzate, condizioni estreme e generano rifiuti tossici, giustifica lo sviluppo di un protocollo di sintesi verde che operi in condizioni moderate, è scalabile. e non produce sottoprodotti^pericolosi 6,7,8,9. Tra le NP di ossido metallico esplorate con questa strategia, le nanoparticelle di magnesio (MgNP) presentano vantaggi significativi rispetto alle nanoparticelle d'argento (AgNP) e alle nanoparticelle di ossido di zinco (ZnO NP), poiché le MgNP non mostrano tendenza all'accumulo biologico, presentano una citotossicità inferiore nelle cellule umane e sono riconosciute dalla Food and Drug Administration (FDA) degli Stati Uniti come sostanze generalmente sicure per applicazioni^{umane 10. 11}. Inoltre, i MgNP sintetizzati utilizzando estratti vegetali di Cerrado dovrebbero combinare le proprietà antiossidanti e antibatteriche del magnesio con i fitochimici bioattivi presenti nell'estratto, aumentando così il loro valore funzionale cosmetico rispetto ai controparti sintetizzati^{convenzionalmente 10}.

Nell'industria cosmetica, l'applicazione della nanotecnologia ha rivoluzionato lo sviluppo dei prodotti migliorando la somministrazione, la stabilità e l'efficacia degli ingredienti^{attivi 11}. Gli NP possono penetrare più in profondità nella pelle, fornire un rilascio controllato e proteggere i composti sensibili dalla degradazione, rendendoli molto preziosi per formulazioni che mirano all'invecchiamento della pelle, alla pigmentazione, all'acne e alla protezione^solare. Nonostante questi vantaggi documentati, la sintesi verde dei MgNP utilizzando piante autoctone delle savane neotropicali come agenti riducenti per applicazioni cosmetiche rimane in gran parte inesplorata e manca di standardizzazione metodologica, a differenza di quanto ampiamente riportato per piante provenienti da Asia, Africa ed^Europa 11,12,13,14 . La maggior parte degli studi esistenti presta un'attenzione limitata all'incorporazione degli NP nelle formulazioni cosmetiche funzionali e alla loro stabilità in condizioni di conservazione^controllata 11,14,15. L'attuale protocollo aiuta a colmare questa lacuna metodologica integrando, in un'unica metodologia riproducibile, la sintesi verde dei MgNP provenienti dalla flora neotropicale, la loro incorporazione in un siero facciale nanofitocosmetico e la valutazione completa della loro stabilità fisicochimica e funzionale.

L'obiettivo generale di questo protocollo è descrivere una metodologia standardizzata, riproducibile e scalabile per la sintesi verde di MgNP utilizzando Stryphnodendron adstringens, una pianta originaria delle savane neotropicali del Cerrado, sia come agente riducente che stabilizzante, sfruttando così le sue proprietà bioattive intrinseche in una formulazione di siero facciale. Lo sviluppo di MgNP sintetizzati da S. adstringens per applicazioni umane topiche costituisce una nuova nanoformulazione attualmente protetta dalla domanda di brevetto brasiliana (BR 10, 2025 015416 1). Il disegno sperimentale proposto rappresenta un approccio sostenibile e biocompatibile alla produzione di NP, evitando l'uso di agenti tossici riducenti comunemente impiegati nella sintesi convenzionale di NP, facilitando al contempo l'incorporazione di fitochimici con potenziale attività biologica. Questo protocollo è particolarmente adatto ai ricercatori che cercano metodi ecologici per la fabbricazione di nanoparticelle per applicazioni cosmetiche, farmaceutiche o biomediche, soprattutto quando sono disponibili estratti vegetali ricchi di flavonoidi e polifenoli. Poiché questi composti agiscono come agenti naturali riducenti e stabilizzanti, il protocollo può essere facilmente adattato ad altre specie vegetali con profili fitochimici comparabili, permettendone l'applicazione alla flora autoctona di diverse regioni biogeografiche in base alla disponibilità locale di materiale vegetale.

Protocollo

1. Materiale vegetale

1. Selezione e documentazione
   1. Seleziona piante sane di S. adstringens che crescono in aree rappresentative dell'ambiente naturale per la raccolta della corteccia. Annota il luogo del campionamento, la data di raccolta, le coordinate geografiche utilizzando un dispositivo GPS e le condizioni ambientali locali al momento della raccolta.
   2. Effettuare l'identificazione botanica utilizzando letteratura tassonomica specializzata per le specie della savana neotropicale. Conferma l'identificazione consultando un tassonomo^{qualificato 17}.
   3. Raccogliere e separare materiale vegetale rappresentativo per la documentazione dell'erbario, incluse strutture vegetative e riproduttive (ad esempio, foglie, fiori, frutti e piccoli rami).
      NOTA: Raccogli il materiale dell'erbario separatamente dalla corteccia utilizzata per le procedure sperimentali. Pressa e asciuga il materiale vegetale utilizzando le tecniche standard dell'erbario, monta esemplari voucher e depositali in un erbario riconosciuto per garantirne la tracciabilità.
2. Raccolta della corteccia
   1. Raccogliere la corteccia dal tronco dell'albero di S. adstringens agli stadi 31–39 (Biologische Bundesanstalt, Bundessortenamt e Chemische Industrie), corrispondenti alla fase vegetativa di crescita descritta in precedenti studi^{fenologici 16,17}.
      NOTA: Conservare il materiale raccolto in un sacco scuro per prevenire la degradazione dei metaboliti secondari e per prevenire la degradazione dei metaboliti secondari.
3. Determinazione dell'umidità
   1. Pesa i campioni di corteccia usando una bilancia analitica. Dividere il materiale in tre repliche e registrare i pesi iniziali.
   2. Metti i campioni di corteccia in forno a 105 °C. Asciuga i campioni finché non raggiungono un peso costante.
      NOTA: Il peso costante si ottiene quando due misurazioni consecutive differiscono di non più di 1 mg, indicando la rimozione completa dell'umidità.
   3. Rimuovi i campioni dal forno, lasciali raffreddare a temperatura ambiente e registra il peso finale. Calcola il contenuto di umidità e la materia secca utilizzando le seguenti equazioni:
      
      Materia secca (%) = 100 - Umidità (%)
      Dove:
      W1 = peso del contenitore vuoto
      W2 = peso del contenitore + campione prima dell'essiccazione
      W3 = peso del contenitore + campione dopo l'essiccazione

2. Preparazione dell'estratto

NOTA: Tutte le procedure che riguardavano materiali pericolosi sono state condotte in conformità con le linee guida di sicurezza chimica riconosciute^{a livello internazionale 18}.

1. Risciacqua la corteccia appena raccolta con acqua corrente per rimuovere suolo, polvere e impurità superficiali.
2. Metti i campioni di corteccia in forno a 36 °C per 72 ore. Macini la corteccia secca usando un mulino per coltelli per ottenere una polvere fine.
3. Pesa 200 g di corteccia in polvere e trasferiscila in una fiaschetta Erlenmeyer. Aggiungi 1000 mL di etanolo al 98%.
   ATTENZIONE: L'etanolo è altamente infiammabile. Maneggiare lontano dalle fonti di accensione e lavorare in un'area ben ventilata.
4. Sigilla la fiaschetta e lasciala a temperatura ambiente per 72 ore, protetta dalla luce. Agita la miscela una volta ogni 24 ore.
5. Filtra l'estratto prima attraverso una rete metallica e poi attraverso il cotone usando un imbuto per rimuovere i residui residui.

3. Valutazione dell'attività antiossidante

1. Prepara una soluzione di 100 mM DPPH (2,2-difenil-1-picrilidrazile) nel metanolo.
   ATTENZIONE: Il metanolo è tossico e altamente infiammabile. Maneggiare una cappa e indossare l'attrezzatura di protezione individuale adeguata. Il DPPH è irritante e può essere dannoso se inalato o ingerito. Evita il contatto diretto e l'inalazione.
   NOTA: Proteggi la soluzione dalla luce eseguendo il test in condizioni di scarsa illuminazione e con cautela nella gestione di metanolo e DPPH, eseguilo sempre con guanti.
2. Diluire l'estratto di corteccia etanolica di S. adstringens nel metanolo per ottenere concentrazioni che variano dallo 0,1% al 5% (v/v). Prepara soluzioni di vitamina C alle stesse concentrazioni di un controllo positivo.
3. Dispensare 100 μL di soluzione DPPH in ciascun pozzo di una piastra da 96 pozzi.
4. Aggiungi 50 μL di estratto o soluzione di vitamina C in ciascun pozzo.
   NOTA: Usa DPPH + metanolo come controllo negativo e solo metanolo come blank. Esegui tutte le misurazioni in quadruplicata.
5. Incubare il piatto per 30 minuti a temperatura ambiente al buio.
6. Misurare l'assorbanza a 515 nm usando uno spettrofotometro.
7. Calcola l'attività di recupero radicale usando la seguente equazione:
   
   Dove:
   Controllo ABS = assorbenza di DPPH + metanolo
   Campione ABS = assorbenza di DPPH + estratto

4. Analisi della vitalità cellulare

1. Coltivare fibroblasti dermici umani normali (NHDF) in mezzo RPMI-1640 integrato con 10% di siero fetale bovino e 1% di penicillina–estreptomicina. Mantenere le cellule a 37 °C con il 5% di CO₂.
2. Mettere le cellule a seme in piastre da 96 pozzi a 3 × 10⁴ cellule per pozzo e incubare per 24 ore.
3. Sostituire il mezzo con 100 μL di mezzo fresco e aggiungere 50 μL di soluzione estrattiva. Incubare per 24 ore.
4. Rimuovere il mezzo e aggiungere 10 μL di soluzione MTT in ogni pozzo. Incubare per 4 ore per permettere la formazione del formazan.
   ATTENZIONE: Il reagente MTT è tossico e dovrebbe essere maneggiato con guanti e dispositivi protettivi appropriati. Evita il contatto visivo con pelle e viso.
5. Aggiungere 60 μL di soluzione di solubilizzazione (HCl in isopropanolo) per sciogliere i cristalli.
   ATTENZIONE: L'acido cloridrico è corrosivo e può causare gravi ustioni. Maneggiare con l'attrezzatura protettiva adeguata e lavorare in una cappa a fumi. L'isopropanolo è infiammabile e dovrebbe essere maneggiato lontano dalle fonti di accensione in un'area ben ventilata.
6. Misura l'assorbanza a 540 nm usando uno spettrofotometro.
   NOTA: I saggi di vitalità cellulare sono stati condotti con gruppi di controllo trattati e non trattati, con ogni condizione analizzata in pozzi quadruplicati.
7. Calcolare la vitalità delle cellule utilizzando:
   Vitalità cellulare (%) = (Estratto del campione ABS/Controllo delle cellule ABS) x 100
   Dove:
   ABS Cell Control = assorbenza dei pozzi di controllo non trattati contenenti solo cellule e mezzo di coltura.
   ABS Sample Extract = assorbenza dei pozzi contenenti celle trattate con estratto vegetale.

5. Sintesi verde di nanoparticelle di magnesio

1. Aggiungi 9890 μL di acqua distillata in un tubo di reazione sterile.
2. Aggiungi 100 μL di estratto vegetale.
3. Aggiungere 10 μL di 1 M MgCl₂ per ottenere una concentrazione finale di 10 mM.
   ATTENZIONE: Il cloruro di magnesio può causare irritazione. Maneggiare con l'attrezzatura protettiva adeguata ed evitare il contatto con occhi e pelle.
   NOTA: La reazione di base consiste in estratto dell'1% (v/v) + 10 mM di MgCl₂ in un volume totale di 10 mL. Per ottimizzare la formazione di NP, la concentrazione dell'estratto può essere regolata mantenendo il volume finale e la concentrazione di MgCl₂.
4. Mescola accuratamente per omogeneizzare la soluzione.
5. Incubare a 75 °C per 18 ore.
   ATTENZIONE: Temperature elevate possono causare ustioni. Utilizzare dispositivi protettivi appropriati quando si maneggiano campioni riscaldati.
   NOTA: Un cambiamento di colore può indicare la formazione di nanoparticelle.
6. Lascia raffreddare la miscela a temperatura ambiente prima della caratterizzazione.

6. Caratterizzazione delle nanoparticelle

1. Diffusione dinamica della luce (DLS)
   1. Trasferire ~750 μL di sospensione di nanoparticelle in una cella di misura.
   2. Inserire la cella nello strumento ed eseguire misurazioni a 25 °C.
   3. Acquisire dati sulla dimensione delle particelle utilizzando una modalità di rilevamento appropriata.
   4. Analizza ogni campione in triplicata con cinque sotto-esecuzioni per misurazione.
2. Microscopia a forza atomica (AFM)
   1. Deposa 10 μL di sospensione di nanoparticelle sulla mica appena tagliata.
   2. Asciuga il campione in un essiccatore per 2 ore.
   3. Risciacqua delicatamente il foglio di mica tre volte con 20 μL di acqua distillata filtata. Riporta il campione nel disidratatore e lascialo asciugare a temperatura ambiente per altre 2 ore.
      NOTA: Risciacquare elimina l'eccesso di sale e migliora la qualità dell'immagine.
   4. Configurare il microscopio a forza atomica eseguendo la configurazione degli strumenti e l'allineamento laser secondo le istruzioni del produttore. Acquisire immagini superficiali dei NP con un'area di scansione di 500 × 500 nm.
      NOTA: L'AFM viene utilizzata per valutare qualitativamente la rugosità superficiale e visualizzare le caratteristiche morfologiche dei MgNP sintetizzati da S. adstringens, generando immagini superficiali tridimensionali ad alta risoluzione.

7. Formulazione di nano-fitocosmetici

1. Fase riscaldata
   1. Pesa 29,7 g di acqua purificata, 0,50 g di idrossietilcellulosa (HEC) e 3 g di glicerina in contenitori separati.
   2. Metti l'acqua in un agitatore magnetico e riscalda a 70–75 °C con una mescolata delicata.
   3. Aggiungi gradualmente HEC all'acqua riscaldata durante il mescolo per evitare che si agglutmini.
      NOTA: L'idratazione può richiedere 15–30 minuti.
   4. Aggiungi glicerina e mescola fino a rendere omogeneo.
2. Fase di raffreddamento
   1. In becher separati, si pesano 30 g di acqua purificata, 3 g di niacinamide, 33,3 g di MgNP sintetizzati da S. adstringens, 0,3 g di acido ialuronico a basso peso molecolare e 0,2 g di alcol benzilico e acido deidroacetico per formare la fase di raffreddamento.
   2. Sciogli completamente la niacinamide in acqua a temperatura ambiente.
   3. Aggiungi acido ialuronico e mescola fino a renderlo uniforme.
   4. Aggiungi MgNP di S. adstringens e mescola delicatamente.
   5. Aggiungi il conservante e mescola.
3. Mixaggio
   1. Raffredda la fase riscaldata a ~40 °C.
   2. Aggiungi lentamente la fase di raffreddamento alla fase riscaldata mentre mescola.
   3. Misura il pH della formulazione. Per formulazioni sierie contenenti niacinamide, è appropriato un pH bersaglio di 5,0–6,5.
      NOTA: La niacinamide è stabile intorno al pH neutro o leggermente acido. Usa piccole quantità di acido citrico o idrossido di sodio per regolare il pH se necessario.

8. Valutazione della stabilità estetica

1. Stabilità preliminare (12 giorni)
   1. Prepara quattro campioni replicati del siero cosmetico in contenitori sigillati.
   2. Sottoporre i campioni a sei cicli consecutivi di congelamento-disgelo. Conservare i campioni a 50 °C per 24 ore e poi a −5 °C per 24 ore, completando un ciclo completo ogni 48 ore.
   3. Dopo ogni ciclo, registra le caratteristiche organolettiche ispezionando visivamente la formulazione per variazioni nell'aspetto, nel colore, nell'odore e nella separazione delle fasi.
   4. Misura il pH dei quattro campioni a temperatura ambiente, utilizzando un misuratore di pH digitale calibrato. Determina la viscosità utilizzando un viscosimetro rotazionale secondo le istruzioni del produttore dell'apparecchiatura.
      NOTA: Variazioni ≤10% sono accettabili. Cambiamenti che superano questa soglia possono indicare instabilità della formulazione e dovrebbero essere ulteriormente indagati. Se la formulazione supera lo studio preliminare, si effettua un saggio accelerato di stabilità.
2. Stabilità accelerata (90 giorni)
   1. Prepara otto campioni della formulazione cosmetica. Conservare quattro campioni a 50 °C e quattro campioni a 4 °C.
   2. Valuta a 0, 1, 7, 15, 30, 60 e 90 giorni.
   3. Valutare e registrare le caratteristiche organolettiche ispezionando visivamente la formulazione per variazioni di aspetto, colore, odore e separazione di fase.
   4. Misura il pH dei campioni a temperatura ambiente, utilizzando un misuratore di pH digitale calibrato. Determina la viscosità utilizzando un viscosimetro rotazionale secondo le istruzioni del produttore dell'apparecchiatura.
      NOTA: La valutazione della stabilità è stata condotta in conformità con le linee guida stabilite dall'Agenzia Brasiliana di Sorveglianza^{Sanitaria 19}. Negli Stati Uniti, i test di stabilità seguono le raccomandazioni della^{FDA 20}. Nell'Unione Europea, la valutazione della stabilità è conforme al Regolamento (CE) n. 1223/2009²¹, che impone l'inclusione di un Rapporto sulla Sicurezza dei Prodotti Cosmetici (CPSR). L'Allegato I di questo regolamento richiede dati di stabilità documentati per supportare la sicurezza e la durata di conservazione della formulazione cosmetica, con test generalmente condotti in conformità con la linea guida armonizzata ISO/TR 18811:2018²², "Linee guida per il test di stabilità dei prodotti cosmetici".

Risultati

Il processo di essiccazione della corteccia vegetale è un passaggio cruciale per preservare i composti bioattivi e garantirne l'applicabilità nelle industrie alimentare, farmaceutica e cosmeceutica. Al contrario, un'essiccazione inadeguata può portare a un eccessivo scurimento dell'arma, perdita di aroma, contaminazione microbica e degradazione di composti bioattivi, compromettendo così la qualità della corteccia grezza. La Tabella 1 riassume i criteri utilizzati per dis...

Discussione

Il protocollo qui presentato descrive un flusso di lavoro riproducibile per la sintesi verde di MgNP utilizzando estratto di S. adstringens e la loro incorporazione in una formulazione di siero nanofitocosmetico. Sono fondamentali diversi passaggi per garantire risultati affidabili. Innanzitutto, la raccolta e la documentazione del materiale vegetale devono essere accuratamente standardizzate, inclusa la registrazione accurata delle coordinate geografiche, delle condizioni ambie...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Placche a 96 pozzi	Sigma-Aldrich	M0812	Saghi a celle
Alcool benzilico e Acido deidroacetico	Sigma-Aldrich	1,09,626	Conservante
Tubi centrifughe (15 mL / 50 mL)	Falcon (Corning)	430766	Gestione dei campioni
Acido citrico	Sigma-Aldrich	C0759	Regolazione del pH
Incubatore CO2	ThermoFisher Scientific	3110	Incubatore CO2 utilizzato per la coltura cellulare
Materiale filtrante di cotone	Fornitore locale	LH R/260	Filtrazione
Essiccatore	merck	BAF424002141	Essiccazione
DPPH (2,2-difenil-1-picrilidrazile)	Sigma-Aldrich	D9132	Saggio antiossidante
Forno di essiccazione	NovaÉ tica	400/5NDR	Forno per l'essiccazione del materiale vegetale
Forno facile	SolidSteel	SSE-85L	Forno utilizzato per saghi di stabilità estetica
Fiaschette Erlenmeyer 1000 mL	VIDROLABOR	76200B01000	Estrazione
Etanolo (98%)	Dinamica-Quimica contemporanea	P.10.0051.015.36	Solvente per estrazione
Siero fetale bovino (FBS)	Gibco (Thermo Fisher)	ES-009-C	Supplemento
Freezer	Gelopar	GTPC-575	Congelatore utilizzato per saghi di stabilità
Glicerina	Bottica botanika	TBV084.003904.086	Humectant
Acido ialuronico (basso peso molecolare)	Bottica botanika	J201220136	Agente idratante
Acido cloridrico (HCl)	Sigma-Aldrich	1,00,317	Solubilizzazione MTT
Idrossietilcellulosa (HEC)	Bottica botanika	AH230641697	Addensante
Isopropanolo	Sigma-Aldrich	100995	Solubilizzazione MTT
Mulino per coltelli	7LAB	920Willye 4 volte; 4 lame	Macinazione di foglie, radici, semi e tuberi
Cloruro di magnesio (MgCl2)	Sigma-Aldrich	1,01,872	Sintesi di nanoparticelle
Agitatore magnetico e dash; Piastra riscaldante	IKA	5030000	Mixaggio
Metanolo	Sigma-Aldrich	900641	Saggio DPPH
Fogli di mica	ThermoFisher Scientific	NC9655733	Preparazione AFM
Lettore di microplacche	ThermoFisher Scientific	Multiskan GO 1510-03581	Lettore di microplacche
Reagente MTT	Sigma-Aldrich	CT01-5	Saggio di viabilità cellulare
Cellule NHDF	BCRJ	0089	Fibroblasti dermici umani
Niacinamide	Bottica botanika	211847	Principio attivo
Forno	Termo Scientific	PR305225M	Essiccazione
Penicillina e dash; Streptomicina	Gibco (Thermo Fisher)	15140122	Antibiotico
Metro	Digimed	DM-220	Utilizzato per il monotoring del pH negli sami di stabilità
Pipette e punte	Eppendorf	30078551	Gestione dei liquidi
Acqua purificata / distillata	Merck (Milli-Q)	ZIX7010T0C	Uso generale
Frigorifero	Metalfrio	VB40W	Frigorifero utilizzato per sami di stabilità
Viscosimetro rotante	Novotest	VISC-5SA	Utilizzato per misurare la visosità negli saghi di stabilità
RPMI-1640 media	Gibco (Thermo Fisher)	11875093	Coltura cellulare
Scala	Ingegneria BEL	HPBG-2285	Bilancia per la pesatura dei materiali
Microscopio a sonda a scansione	SHIMADZU	SPM-9700HT	AFM, microscopio a sonda a scansione
Idrossido di sodio (NaOH)	Dinamica-Quimica contemporanea	P.10.0594.024.00	Regolazione del pH
Spettrofotometro	ThermoFisher Scientific	A51119700C	Assorbenza
Vitamina C (acido ascorbico)	Sigma-Aldrich	PHR1008	Controllo positivo
Zetasizer Pro	Malvern Panalytical	Zetasizer Pro	Per la diffusione dinamica della luce e la dimensione zeta