Induzione calibrata a filo di stenosi ureterali segmentali nei ratti tramite laparotomia della linea mediana

Sommario

Questo protocollo descrive un modello di ratto riproducibile per indurre stenosi ureterali segmentali gradate utilizzando la legatura parziale calibrata con filo tramite laparotomia mediana. Una legatura 6-0 attorno all'uretere e un filo metallico di calibrazione generano un lumen residuo definito, consentendo una conferma funzionale immediata della gravità dell'ostruzione.

Abstract

Le stenosi ureterali rimangono una sfida importante nell'urologia ricostruttiva e possono derivare da lesioni iatrogeniche, infiammazione cronica, traumi, anomalie congenite o radiazioni. Queste lesioni spesso portano a uropatia ostruttiva progressiva e perdita della funzione renale. Nonostante i progressi nelle tecniche endoscopiche e chirurgiche, le stenosi ureterali restano difficili da affrontare e i loro effetti di rimodellazione sul parenchima renale restano oggetto di ricerche in corso, sottolineando la necessità di modelli preclinici solidi. Questo studio stabilisce un modello di ratto riproducibile per l'induzione controllata di vari gradi di stenosi ureterali segmentari, utilizzando la legatura parziale calibrata con filo tramite laparotomia mediana. Il protocollo consente la costrizione segmentaria e non transettiva dell'uretere, con l'obiettivo di approssimare il restringimento fibrotico a livello funzionale e anatomico, minimizzando al contempo i danni ischemici evidenti e mantenendo la vitalità del tessuto macroscopico con continuità ureterale. Fornendo una piattaforma sperimentale affidabile con bassa variabilità inter-animale e inter-chirurgo, questo approccio supporta la ricerca traslazionale sui meccanismi biomolecolari, biomateriali, modalità di imaging e tecniche ricostruttive per la stenosi ureterale.

Introduzione

Le stenosi ureterali sono relativamente comuni e rappresentano una sfida significativa in urologia. Sono segnalati fino al 4,9% dei pazienti dopo procedure endoscopiche per la malattia dei calcoli ^1,2,3, con incidenze ancora più elevate tra le popolazioni ad alto rischio, come i riceventi di trapianto di rene, dove fino al 7% potrebbe essere^{colpito 4}. Sebbene molte stenosi siano causate da lesioni chirurgiche o interventi medici, anche le cause non iatrogeniche costituiscono una proporzione importante. Questi includono infiammazione cronica, infezioni delle vie urinarie, traumi fisici, anomalie congenite e radioterapia ^5,6. Ognuna di queste eziologie può in ultima analisi causare ostruzione urinaria, infezioni ricorrenti, dolore, formazione di calcoli e - se non trattata - perdita irreversibile della funzione renale. I pazienti colpiti spesso sperimentano morbilità e riduzione della qualità della vita, come dimostrato sia nelle coorti istituzionali che nelle revisioni ^{sistematiche 5,7,8}. Il peso a lungo termine è notevole; In una coorte multiistituzionale di pazienti con stenosi ureterografiche dopo un intervento di calcoli ureteroscopici, nel 25% dei casi è stata necessaria una nefrectomia del lato interessato, sottolineando la notevole morbilità di questa^{condizione 9}.

Questo carico clinico sottolinea la necessità di modelli preclinici robusti che possano consentire la ricerca sui processi biomolecolari associati e orientare l'ottimizzazione del trattamento. Le modalità di trattamento più comuni sono i metodi endoscopici, come dilatazione o incisione laser, oltre alla posposizione di stent, riservata alla ricostruzione chirurgica ai casi più^{complessi 10}. Nonostante il miglioramento degli esiti precoci, recidiva e restenosi rimangono problematiche. I tassi di recidiva riportati dopo l'intervento variano dall'11% al 40%, e molti pazienti necessitano di più interventi o di stent a lungo termine per un sollievo duraturo e la protezione degli^{organi 11,12}. Il successo del trattamento è influenzato dal sito della stenosa, dalla durata, dall'eziologia e dai dettagli dei trattamenti precedenti; Diverse recensioni recenti e grandi studi di coorte sottolineano la necessità di tecniche migliorate e di una comprensione meccanicistica più^{profonda 4,5,13}.

Una ricerca traslazionale efficace richiede modelli sperimentali che replichino fedelmente i meccanismi fibrotici, le caratteristiche istopatologiche, il contesto anatomico e i processi renali a monte della malattia della stenosi ureterale umana. Tra questi, i modelli con roditori sono diventati piattaforme affidabili per studiare la fibrosi ureterale e la perdita funzionale renale e per valutare interventi anti-fibrotici e strategie^{ricostruttive} 6,14,15,16,17. Le basi fisiopatologiche per questi modelli sono state poste da Chevalier et al., che hanno esaminato diverse strategie di ostruzione ureterale, concentrandosi sull'ostruzione ureterale unilaterale (UUO) come modello riproducibile di fibrosi interstiziale renale e nefropatia ostruttiva^{nei ratti 6}.

Partendo da queste fondamenta, i modelli contemporanei hanno perfezionato il livello e il motivo dell'ostruzione. Vroomen et al. hanno introdotto un approccio tecnicamente sicuro utilizzando l'elettroporazione irreversibile per indurre un'occlusione urinaria parziale unilaterale con cicatrici^{renali 14}. Analogamente, Chen et al. hanno promosso un modello UUO reversibile che consente lo studio dinamico della regressione fibrosis in condizioni emodinamiche^{variabili 15}. Nan et al. e Khater et al. hanno ulteriormente chiarito le cascate molecolari che guidano la progressione della fibrosi ureterale e la modulazione terapeutica nell'ostruzione parziale^16,17.

I modelli precedenti che si basavano su legatura ureterale completa, resezione segmentare, incavamento nel muscolo psoas o lesioni termiche spesso portavano a gradi di ostruzione non controllati e non standardizzati, ischemia estesa e necrosi, portando a una grave atrofia parenchimatosa renale piuttosto che a un'ostruzione graduale. Questi approcci, come descritti da Chevalier et al. e Thornhill et al., fornivano preziose intuizioni meccanicistiche sulla nefropatia ostruttiva, ma non riproducevano il restringimento fibrotico localizzato caratteristico della malattia benigna da stenose ureterale^{clinica 6,18}. Rimane una mancanza di modelli semplici e standardizzati di roditori che generino estenosi segmentarie calibrate, non transezioni, con vitalità tissutale preservata e gradi definiti di ostruzione urinaria renale.

Per colmare questa lacuna, questo studio stabilisce un protocollo chirurgico standardizzato per l'induzione controllata di stenosi ureterali parziali nei ratti. Il modello è progettato per essere riproducibile, anatomicamente preciso e versatile per l'uso nella ricerca preclinica che comprende urologia ricostruttiva, valutazione per imaging intraoperatorio e applicazioni di ingegneria tissutale. Minimizzando la variabilità interoperatoria e replicando il restringimento fibrotico clinicamente rilevante, questo modello offre una piattaforma traslazionale per promuovere la comprensione meccanicistica e accelerare lo sviluppo terapeutico per la stenosi ureterale.

Nell'uso pratico, il grado di ostruzione può essere calibrato selezionando il diametro del filo di calibrazione appropriato per corrispondere alla domanda di ricerca. I diametri maggiori (ad esempio, 0,65 mm) si avvicinano a una lieve ostruzione parziale con flusso urinario quasi fisiologico, mentre i diametri più piccoli (0,30–0,20 mm) modellano ostruzioni ad alta qualità con una marcata riduzione del flusso. Inoltre, questo approccio chirurgico può essere applicato sia come modello terminale acuto per studiare cambiamenti emodinamici e funzionali immediati, sia adattato per esperimenti di sopravvivenza per indagare il rimodellamento cronico dei tessuti, la progressione della fibrosi e l'adattamento renale a lungo termine.

In questo modello, l'ostruzione parziale si ottiene legando una legatura 6-0 attorno all'uretere con un filo metallico di calibrazione di diametro definito e successivamente rimuovendo il filo, lasciando un residuo di lumen corrispondente alla dimensione del filo. Questo design consente un restringimento graduale e controllato geometricamente che può essere direttamente correlato con il flusso urinario funzionale renale.

Protocollo

Tutte le attività animali descritte qui sono state svolte in strutture accreditate e approvate dal comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali (IACUC) del Consiglio Regionale del Baden-Württemberg a Karlsruhe, Germania. Gli animali sperimentali sono stati gestiti in conformità con i protocolli istituzionali e in conformità con la legislazione tedesca che regola il benessere animale, nonché con le linee guida stabilite dal Consiglio della Comunità Europea (2010/63/UE) e le linee guida Ricerca sugli Animali: Segnalazione degli Esperimenti In Vivo (ARRIVE). Sono stati utilizzati maschi di ratti Sprague Dawley (peso medio: 400 g) dopo un periodo di acclimatazione di 7 giorni nella struttura animale in condizioni standardizzate. I reagenti e le attrezzature utilizzate sono elencati nella Tabella dei Materiali.

1. Anestesia e analgesia

1. Indurre la sedazione utilizzando isoflurano al 4 vol% somministrato al 100% di ossigeno tramite una camera di induzione a una portata di 5 L/min.
2. Alla perdita del riflesso di raddrizzamento, somministrare un'iniezione sottocutanea di 100 mg/kg di ketamina (soluzione al 10%; circa 0,35 mL) e 4 mg/kg di xilazina (diluizione 1:10 della soluzione al 2%; circa 0,75 mL) per anestesia dissociativa, analgesia e sedazione.
3. Confermare la profondità anestetica assenza di risposta a uno stimolo deciso di pizzicamento al dito del piede usando la pinza.
4. Applica una pomata oftalmica su entrambi gli occhi per prevenire la disidratazione corneale.
5. Ottenere ulteriori analgesi tramite un'iniezione sottocutanea di 5 mg/kg di carprofene (diluizione 1:10 della soluzione al 5%; circa 0,35 mL).
6. Mantenere l'anestesia con un supplementare di isoflurano al 4 vol% tramite una maschera neonatale durante tutta la procedura.
7. Mantieni la temperatura corporea tra 36,5 e 37,5 °C utilizzando un cuscinetto riscaldante termostatico durante tutta la procedura.

2. Preparazione del sito operativo e degli strumenti

1. Prepara il tavolo per la pulizia con tutti gli strumenti necessari, inclusi le pinze di preparazione atraumatica, le pinze smussate per la sovranpolazione, le forbici per la preparazione, le legature monofilamenti 6-0 non riassorbibili, fili di calibrazione metallici (lega con superficie elettrolucidata e estremità sbabarate; diametro 0,65, 0,55, 0,30, 0,20 mm; sterilizzato (autoclavato) prima dell'uso), cotton wool umidificato, garze, siringa da 1 mL con ago integrato da 30 G, blu di metilene (soluzione allo 0,5%, non diluita), soluzione isotonica di cloruro di sodio (0,9% NaCl) e tubi capillari.
2. Montare l'animale sull'apparato di esposizione chirurgica ai roditori come descritto nei rapporti^{precedenti 19,20}.
3. Radere l'area di accesso addominale ed eseguire alternamenti tripli con etanolo al 70% e tamponi antisettici a base di povidone-iodio o clorexidina, disposti in cerchi concentrici dal sito dell'incisione verso l'esterno. Ripeti tre volte.
4. Copri l'animale con tendee sterili, lasciando esposto solo il campo chirurgico.
5. Maneggiare anestetici volatili, pigmenti pungenti e coloranti chimici in conformità con le normative istituzionali sulla biosicurezza, utilizzando sistemi appropriati di raccolta dei gas, dispositivi di protezione e contenitori approvati per lo smaltimento di oggetti pungenti.

3. Accesso chirurgico tramite laparotomia mediana

1. Eseguire un'incisione cutanea mediana addominale di circa 3 cm con forbici sottili.
2. Incisci longitudinalmente la linea alba nella linea mediana per accedere alla cavità peritoneale.
3. Usa ganci di preparazione e impacchi umidi per ritrarre la parete addominale ed esporre il retroperitoneo.

4. Identificazione e mobilitazione dell'uretere sinistro

1. Identificare lo spazio renale e retroperitoneale e mobilitare delicatamente il grasso retroperitoneale circostante usando una dissezione contundente con pinze e cotton fiagna umidificata (Figura 1A).
2. Perforare il bacino renale attraverso il parenchima renale con un ago fine da 30 G (Figura 1B).
3. Iniettare 0,01–0,2 mL di blu di metilene non diluito per facilitare l'identificazione visiva dell'uretere (Figura 1B.5).
4. Osservare la demarcazione progressiva dei coloranti per tracciare visivamente il percorso ureterale dal bacino renale verso la vescica (Figura 1B.6–10).
5. Separare delicatamente il tessuto connettivo e adiposo circostante dall'uretere demarcato dal colorante usando pinze fini e cotton fioc umidificati con un movimento di pizzicare (Figura 1C). Evita la presa diretta, la compressione o la trazione eccessiva della parete ureterale per evitare rotture o fistole. Mobilita l'uretere finché non può essere seguito continuamente dal bacino renale verso la giunzione vesicoureterale (Figura 1D).

Figura 1: Identificazione e mobilizzazione assistite da colorante dell'uretere sinistro. La freccia verde rappresenta il sito dell'iniezione renale. La freccia grigia rappresenta l'uretere ingenuo. La freccia blu raffigura un uretere delimitato da colorante. La scatola nera rappresenta un'area successivamente ingrandita. (A) Esposizione retroperitoneale sinistra dopo laparotomia mediana. (B) Demarcazione dell'uretere assistita da colorante. (C) La dissezione contusa mobilita l'uretere dal tessuto circostante. (D) Uretere sinistro completamente esposto dal bacino renale alla giunzione vesicoureterale. (E) Illustrazione schematica dei passaggi descritti, inclusi siringa e blu di metilene. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

5. Legatura parziale calibrata distale dell'uretere sinistro utilizzando un filo metallico

1. Elevare un segmento mobilitato dell'uretere distale usando una pinza atraumatica senza comprimere l'uretere (Figura 2A.1–2).
2. Passa una sutura monofilamento 6-0 sotto l'uretere usando una pinza smussata (Figura 2A.3).
3. Posizionare un filo metallico di calibrazione del diametro desiderato (0,65, 0,55, 0,30 o 0,20 mm) parallelo all'uretere all'interno dell'anello della legatura (Figura 2B.1–6).
4. Stringi gradualmente la legatura usando un nodo scorrevole con diversi lanci ad anello nella stessa direzione finché la fascia di sutura non si adatta strettamente al complesso uretere-filo senza allentarsi, il che richiede almeno 4 lanci con movimenti lenti delle dita rimbalzanti per permettere la sutura di stabilizzarsi tra un lancio e l'altro.
   NOTA: La tensione di sutura dovrebbe essere appena al di sotto della resistenza alla rottura alla trazione, che è di 5–7 N per una sutura 6-0 non riassorbibile, quindi si raccomanda 3 N. Questo si traduce in un peso di trazione di circa 306 g e può essere misurato con una bilancia a molla oppure è paragonabile alla forza digitale quando si tiene un normale cellulare con due dita in una presa a pinza. L'aspetto essenziale è che la sutura sia completamente chiusa al complesso uretere-filo e che ci siano così tanti lanci ad anello che non si allentano prima che seguano i lanci di bloccaggio. A causa della natura fragile delle suture 6-0, non c'è un "troppo stretto" poiché la sutura si romperà prima di diventare troppo stretta per far degenerare il tessuto dell'uretere. Ora fissa il nodo con 3 scavi ad anello di bloccaggio in senso opposto per prevenire nodi d'aria (Figura 2B.7–10).
5. Ritirare con attenzione il filo di calibrazione in modo lento e dritto per evitare lesioni da taglio alla parete ureterale, lasciando un residuo standardizzato di lumen ureterale corrispondente al diametro del filo (Figura 2C.1–5). La superficie del filo lucidato minimizza l'attrito durante la rimozione e riduce il rischio di danni ai tessuti.

Figura 2: Legatura parziale calibrata distale dell'uretere sinistro usando un filo metallico. (A) Uretere distale isolato e elevato con pinze di sovracolto; Sutura 6-0 posizionata sotto. (B) Filo di calibrazione posizionato parallelo all'uretere all'interno della legatura e legatura tramite un nodo scorrevole. (C) Prelievo del filo, lasciando un lumen residuo standardizzato. (D) Illustrazione schematica dei passaggi descritti con l'uretere (blu), il filo di calibrazione (grigio) e la legatura (nera). Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

6. Identificazione e mobilitazione dell'uretere destro

1. Ripeti i passaggi in analogia con il lato controlaterale (Figura 3).

Figura 3: Identificazione e mobilizzazione assistita da colorante dell'uretere destro. (A) Esposizione retroperitoneale destra con demarcazione dell'uretere assistita da colorante. (B) Dissezione contusiva che mobilita l'uretere dal tessuto circostante. (C) Illustrazione schematica dei passaggi descritti. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

7. Legatura completa prossimale dell'uretere destro usando un nodo scorrevole senza filo

1. Sollevare un segmento mobilitato dell'uretere prossimale usando le pinze atraumatiche senza comprimere l'uretere (Figura 4A.1–3).
2. Passa una sutura monofilamento 6-0 non riassorbibile sotto l'uretere usando una pinza smussata (Figura 4A.4,5).
3. Stringi gradualmente la legatura usando un nodo scorrevole con diversi lanci ad anello nella stessa direzione finché la fascia di sutura non lega saldamente l'uretere senza allentarsi, come descritto sopra. Poi, fissare con lanci di blocco in senso contrario per ottenere una chiusura luminale quasi completa (Figura 4B.1–4).

Figura 4: Legatura completa prossimale dell'uretere destro usando un nodo scorrevole senza filo. (A) Uretere prossimale isolato e sollevato con pinze Overholt; Sutura 6-0 posizionata sotto. (B) Legatura completa senza filo usando un nodo scorrevole. (C) Illustrazione schematica dei passaggi descritti. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

8. Validazione funzionale dell'ostruzione ureterale parziale e completa

1. Per la validazione dell'ostruzione parziale sul lato sinistro, iniettare 0,2 mL di blu di metilene non diluito trasparsimetricamente nel bacino renale con una siringa e osservare il riempimento antegrado dell'uretere distale rispetto al sito della legatura (Figura 5A.1–3).
2. Iniettare 1,0 mL di soluzione fisiologica nel bacino renale per eliminare progressivamente il segnale del colorante tramite lavaggio e confermare la continuazione della permeabilità ureterale (Figura 5A.3). Per aumentare ulteriormente la certezza dell'ostruzione ureterale incompleta, si prosegue l'iniezione fino a superare la capacità volumetrica della vescica e si può osservare un visibile fuoriuscita di liquido dall'uretra (Figura 5A.4–5).
3. Per la convalida dell'ostruzione completa sul lato destro, iniettare trasparzialmente 0,2 mL di blu di metilene non diluito nel bacino renale e confermare l'assenza di passaggio distale del colorante (Figura 5B.1,2).
4. Identificare la dilatazione prossimale del calibro ureterale a monte del sito di legatura come indicatore del blocco completo di uscita (Figura 5B.3).
5. Per ulteriori convalide oltre l'usabilità fattibile del modello animale, si trasettano entrambi gli ureteri distalmente e si posizionano le estremità ureterali aperte direttamente adiacenti ai capillari di vetro per le misurazioni della raccolta urinaria (Figura 5C).
6. Per la validazione di questo modello, quantificare la produzione urinaria per rene su un periodo di 30 minuti in condizioni fisiologiche e dopo una legatura parziale utilizzando fili di calibrazione con diametri di 0,65, 0,55, 0,30 e 0,20 mm (Figura 5C.2).

Figura 5: Validazione funzionale dell'ostruzione ureterale parziale e completa. (A) Ostruzione parziale: la colorazione del colorante e il lavaggio salino mostrano riempimento distale dell'uretere e uscita uretrale, indicando una permeabilità residua. (B) Ostruzione quasi completa: assenza di colorante distale, con un uretere prossimale gonfiato a monte della legatura. (C) La raccolta capillare del volume urinario unilaterale per 30 minuti per rene mostra una riduzione graduale dell'output urinario da condizioni fisiologiche a occlusione completa. (D) Misure microscopiche di (1) diametro della legatura, (2) diametro dell'uretere esterno, (3) diametro dell'uretere interno e (4) spessore della parete dell'uretere. Gli asterischi indicano livelli di significatività esplorativa. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

9. Passaggi terminali e considerazioni

1. Chiudere la parete addominale in più strati in condizioni sterili come descritto nei rapporti^precedenti 19,20,21.
2. Dopo l'intervento, osserva ogni animale in modo continuo finché non recupera la reclinazione sternale e la mobilità spontanea. Rialloggiare gli animali solo dopo che sono completamente vigili e capaci di muoversi in modo coordinato. Somministrare analgesia postoperatoria con carprofene sottocutaneo a 5 mg/kg due volte al giorno per 48 ore e garantire che il personale veterinario conduca valutazioni cliniche quotidiane per monitorare il recupero e individuare potenziali complicanze.
3. Documenta il benessere animale utilizzando sistemi di punteggio standardizzati come la Rat Grimace Scale²² e il Body Condition Score²³. Gli endpoint umani includono un Rat Grimace Score ≥ 6 o un Body Condition Score di 1 nonostante un'adeguata analgesia. Eliminare immediatamente gli animali che presentano questi risultati, così come quelli che presentano infezioni postoperatorie della ferita o deiscenza della parete addominale, immediatamente secondo gli standard di cura istituzionale.
4. Per esperimenti non di sopravvivenza o per l'interruzione dopo il controllo, si sopporta l'eutanasia con una cardiectomia acuta sotto anestesia profonda o con lussazione cervicale (seguendo i protocolli approvati dall'istituzione). Opzionalmente, si rezionano sia i reni che gli ureteri in blocco per successive ispezioni anatomiche, analisi biomolecolari o imaging istopatologico.
5. Smaltire le carcasse animali, i tessuti resezionati, i taglienti e le soluzioni chimiche residue secondo le linee guida istituzionali per le strutture animali e la biosicurezza.

Risultati

La tecnica di legatura calibrata ha prodotto una riduzione dipendente dal diametro del flusso urinario in tutti i gruppi sperimentali. Il flusso urinoso è stato valutato in un totale di 14 ratti utilizzando entrambi i reni, ottenendo misurazioni da 5 organi per livello di ostruzione parziale (0,65, 0,55, 0,30 e 0,20 mm di diametro). Inoltre, sono stati inclusi 4 animali che hanno ricevuto il trattamento Sham da un lato (l'uretere è stato mobilitato e una legatura a nodo d'aria non costri...

Discussione

Questo studio stabilisce un metodo chirurgico riproducibile per indurre stenosi ureterali unilaterali nei ratti tramite laparotomia mediana e legatura parziale calibrata, con conseguente restringimento ureterale segmentale con vitalità macroscopica preservata che funzionalmente e anatomicamente ricorda le stenosi ureterali umane benigne.

Clinicamente, la stenosi ureterale rimane un contributo importante all'ostruzione del tratto superiore e alla morbilità rena...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Force di preparazione atraumatiche	Esculap	FB395R	DE BAKEY ATRAUMATA Pinza atraumatica, dritta
Morsetti smussati per il sovrappolto	Esculap	BJ012R	Preparazione BABY-MIXTER e pinza per legatura, piegata, 180 mm
cannula	BD (Beckton, Dickinson)	301300	BD Microlance 3 cannula 20 G
Tubi capillari	Sigma Aldrich	P1174	Tubo microcapillare, calibrato 100 & micro; L
Carprofene	CP Pharma	115	carprofene 0,5% (5% con 50 mg/mL diluito 1:10) (Carprosol®)
Scambi di cotone whool	Amazon	ASIN: B0FPDB8ZGS	Cotton Whool swaps non sterili (autoclave per esperimenti di sopravvivenza)
Aste di fissazione	legefirm	‎ 500343896	Diapasoni usati come aste di fissaggio metalliche a forma di Y
Sostituzioni di garze	Medrull	ASIN: B09164D1JG	Sostituzioni di garze sterili
Cuscina riscaldante	Giardino Reale	IP67	Tasca riscaldante Royal Gardineer Dimensione S, 20 Watt
isoflurano	Piramal Critical Care	PZN / EAN 09714675 / 4150097146757	100% isoflurano 250 mL
Vaporizzatore a isoflurano	UNO ROESTVASTSTAAL BV	180000002	Vaporizzatore a isoflurano
Soluzione isotonica di cloruro di sodio	B. Braun	ASIN: B007PZJOQ4	Soluzione di cloruro di sodio allo 0,9%
Ketamina	CP Pharma	1202	ketamina 10% (100 mg/mL)
Filo di calibrazione metallico (diametro 0,20 mm)	QUARKZMAN	ASIN: B0DCZBT4LW	Filo metallico Cr20Ni80-Nichrom (diametro 0,20 mm)
Filo di calibrazione metallico (diametro 0,30 mm)	Rayher	4006166052859	Filo metallico Cr20Ni80-Nichrom (diametro 0,30 mm)
Filo di calibrazione metallico (diametro 0,55 mm)	SKYPRO	UPC: 792138793816	Filo metallico Cr20Ni80-Nichrom (diametro 0,55 mm)
Filo di calibrazione metallico (diametro 0,65 mm)	twipp	ASIN: B07WFWNNRM	Filo metallico Cr20Ni80-Nichrom (diametro 0,65 mm)
Blu di metilene 0,5%	Provepharm	PZN / EAN 10179678 / 4150101796787	METHYLTHIONINIUMCHLORID Proveblue 5 mg/mL in fiale da 10 ml
Legature monofilamenti 6-0 non riassorbibili	COVIDIEN	VP-889-X	sutura chirurgica monofilamento da polipropilene non riassorbibile; l'ago può essere rimosso
Unguento oftalmico	Bayer Vital GmbH	1578681	5% di dexpanthenolo
Tubo di perfusore in plastica	M. Schilling GmbH	S702NC150	tubo di collegamento COEX 150 cm
Forbici di preparazione	Esculap	BC177R	Forbici di preparazione JAMESON, piegati, modello fine, smussato e smussato 150 mm (6")
Piastra d'acciaio	Maschinenbau Feld GmbH	C010206	Piastra zincata, 40 x 50 cm, spessore 4,0 mm
siringa con ago integrato	BLPRKOT	BL2509L3yici08	Siringa da 1 ml con ago integrato da 30 G
xilazina	CP Pharma	1206	xilazina 0,2% (2% con 20 mg/mL diluito 1:10) (Xylavet)