Questo studio è stato esaminato e approvato dal Comitato Etico della Ricerca Medica dell'Ospedale Popolare di Heyuan (Numero di approvazione: YXYJLL-SFKJ202461; Data di approvazione: 15 maggio 2024). Il certificato etico è stato caricato come file supplementare. Il paziente, il genitore o il tutore di un minore ha firmato una dichiarazione durante la registrazione in cui afferma: "Accetto che i miei campioni e dati biologici clinici saranno utilizzati per la ricerca scientifica, l'innovazione tecnologica e la ricerca clinica approvati dal Medical Research Ethics Committee dopo la rimozione delle informazioni personali identificabili", e questa analisi non comporterà rischi aggiuntivi per il paziente e rispetta le normative pertinenti. Tutti i materiali utilizzati in questo studio sono elencati nella Tabella dei Materiali.
Materie
Un totale di 1.559 pazienti maschi che hanno visitato il reparto ambulatoriale dell'Ospedale Popolare di Heyuan e hanno sottoposto a test per l'HPV tra gennaio 2021 e dicembre 2024 sono stati inclusi nello studio. I soggetti avevano un'età compresa tra 2 e 80 anni (La popolazione dello studio è composta da pazienti maschi con risultati validi del test dell'acido nucleico HPV derivanti da visite ambulatoriali in questa struttura medica tra il 2021 e il 2024; L'obiettivo principale è fornire una panoramica completa dei test e dei modelli di infezione per l'HPV tra i pazienti maschi della regione; Inoltre, le vie di infezione da HPV non includono solo l'attività sessuale, ma anche l'attrito o il contatto con la superficie cutanea e le mucose, oltre alla trasmissione verticale dalla madre al bambino. Pertanto, non furono imposte restrizioni di età, con un'età media di (34,2 ± 10,7) anni.
Metodi
Questo studio ha utilizzato un disegno trasversale retrospettivo per analizzare tutti i pazienti maschi che hanno visitato il reparto ambulatoriale del nostro ospedale e hanno sottoposto a test per l'HPV; Solo i risultati iniziali del campionamento sono stati inclusi per coloro che hanno sottoposto test ripetuti.
Raccolta dei campioni
I campioni di cellule esfoliate sono stati prelevati da clinici formati utilizzando spazzole sterili e specializzate. I siti di raccolta includevano le superfici dorsale e ventrali del pene, i solchi coronali interni ed esterni, il glande del pene, l'uretra distale e eventuali lesioni verruche visibili, con la selezione del sito determinata in base ai singoli risultati del paziente; Dopo la raccolta, le teste di spazzole venivano rotte in una soluzione dedicata per la conservazione del campione. Condizioni di conservazione del campione: Dopo il campionamento, i campioni venivano immediatamente conservati in frigorifero a 2–8 °C, e il test veniva completato entro 3 giorni.
Estrazione del DNA
Dopo ogni oscillazione e miscelazione di ogni campione, 200 μL venivano aggiunti sequenzialmente al reagente di estrazione o purificazione degli acidi nucleici. L'estrazione del DNA è stata eseguita utilizzando la tecnologia delle perle magnetiche con il reagente di estrazione nello strumento di estrazione completamente automatizzato degli acidi nucleici SP96.
Rilevamento HPV
Il test HPV-DNA è stato effettuato utilizzando il kit di rilevamento del genotipaggio del papillomavirus umano (tipo 23), che utilizza una combinazione di amplificazione in vitro basata su PCR e ibridazione reverse dot blot del DNA per la genotipizzazione dell'HPV. Sono stati progettati primer specifici sulla base delle caratteristiche genetiche dell'HPV, e frammenti bersaglio di 23 genotipi HPV sono stati amplificati. I prodotti amplificati sono stati ibridati con le sonde di tipizzazione fissate sulla membrana, inclusi 17 HR-HPV (HPV16,51,52,53,18,58,59,31,33,45,56,66,35,39,68,73,82) e 6 LR-HPV (HPV6,11,42,43,81,83). In base alla presenza o assenza di segnali di ibridazione, è stato determinato lo stato di infezione di questi genotipi HPV. La procedura specifica di laboratorio prevedeva l'uso di una punta di pipetta filtrata per aggiungere 5 μL di DNA estratto alla miscela di reazione PCR, portando il volume totale a 25 μL. Successivamente è stata eseguita un'amplificazione PCR. Dopo l'amplificazione, tutti i prodotti amplificati venivano aggiunti all'ibridatore isotermico contenente strisce di membrana per l'ibridazione colorimetrica. Al termine dello sviluppo del colore, i risultati possono essere interpretati.
Analisi statistica
Il software SPSS 23.0 veniva utilizzato per l'analisi statistica. I dati sul conteggio sono stati espressi come numero di casi (n) e percentuale (%). Il confronto tra i gruppi è stato effettuato tramite il test χ2 . P < 0,05 è stato considerato statisticamente significativo. Tra i 23 genotipi HPV, la positività per un singolo genotipo indica infezione da HPV; la positività per un solo genotipo indica una singola infezione; e la positività per due o più genotipi indica un'infezione multipla. Le infezioni multiple vengono ulteriormente classificate in base al numero di genotipi coesistenti in infezione duale, triplice, quadrupla, pentaplice, esadice e superiori." Il rapporto rispetto alla frequenza totale di rilevamento" è stato calcolato utilizzando il numero totale di rilevazioni di genotipi (1.238) come denominatore, poiché i pazienti con infezioni multiple hanno contribuito con più genotipi.