Questo studio ha coinvolto esclusivamente materiali vegetali e non ha incluso esperimenti su esseri umani o animali. Pertanto, non era richiesta un'approvazione etica. Gli strumenti di ricerca utilizzati in questo protocollo sono elencati nella Tabella dei materiali.
1. Sito sperimentale
L'esperimento è stato condotto durante le stagioni 2023/24 e 2024/25 presso l'Azienda Sperimentale della Stazione di Ricerca Orticola di El-Qassassin, governatorato di Ismailia, Egitto (30°53′ N, 31°56′ E), per valutare la risposta delle piante di finocchio (F. vulgare Mill.) alla fertilizzazione organica e all'applicazione di biostimolanti. Le condizioni climatiche durante il periodo di crescita (novembre–aprile) sono state registrate dalla Stazione Meteorologica di Ismailia. Le temperature medie minime e massime dell'aria sono variate rispettivamente da 12 a 18 °C e da 22 a 30 °C, mentre l'umidità relativa è compresa tra il 50% e il 65%. Non sono stati registrati eventi meteorologici estremi durante i periodi sperimentali (Figura 1).

Figura 1: Rappresentazione schematica del disegno sperimentale a parcelle divise, che mostra i livelli di tè di compost assegnati alle parcelle principali e i trattamenti con biostimolanti distribuiti nelle sottoparcelle su tre repliche. Ct.1, Ct.2 e Ct.3 rappresentano rispettivamente 360, 480 e 600 litri per ettaro (ha) applicati al suolo, mentre F.1, F.2, F.3, F.4 e F.5 indicano applicazioni fogliari di 2 cm³/L di acqua per ciascuno dei seguenti estratti: Controllo, Azolla, Spirulina, Nostoc e Chlorella. Cliccare qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.
2. Materiale vegetale
I semi di finocchio sono stati ottenuti dal Dipartimento di Ricerca sulle Piante Medicinali e Aromatiche, Istituto di Ricerca Orticola, Centro di Ricerca Agricola, Dokki, Giza, Egitto. I semi sono stati seminati in letti di allevamento durante la prima settimana di novembre e le piantine sono state successivamente diradate a una pianta per collinetta dopo l'attecchimento.
3. Campionamento e analisi del suolo
Prima della preparazione del suolo, sono stati prelevati campioni compositi di suolo (profondità 0–30 cm), essiccati all'aria, setacciati attraverso un setaccio da 2 mm e analizzati per determinarne le proprietà fisiche e chimiche utilizzando protocolli standard13,14 (Tabella 1).
| Distribuzione dimensionale delle particelle (%) | Classe tessiturale | O.M. (%) |
| Sabbia grossolana | Sabbia fine | Limo | Argilla | Sandy | 0.48 |
| 80.65 | 14.06 | 3.8 | 1.49 |
| pH | EC dS/m | % SP | Cationi (meq/l) | Anioni (meq/l) |
| Ca++ | Mg++ | Na+ | K+ | HCO3- | Cl- | SO4 |
| 8 | 0.79 | 28 | 4 | 2.68 | 1.79 | 0.61 | 1.4 | 4.38 | 2.98 |
| *M.O. (%): materia organica* |
Tabella 1: Proprietà fisiche e chimiche del suolo sperimentale. Le caratteristiche includono la distribuzione della dimensione delle particelle, la classe tessiturale, il contenuto di materia organica, il pH, la conducibilità elettrica, la percentuale di saturazione e i principali cationi e anioni.
4. Impostazione sperimentale
L'esperimento ha seguito un disegno sperimentale a parcelle divise randomizzato in blocchi completi con tre repliche. I livelli di tè di compost sono stati assegnati alle parcelle principali e i trattamenti con biostimolanti alle sottoparcelle (Figura 2). Ogni parcella misurava 8,4 m2 e conteneva 24 piante disposte in tre file (lunghe 4 m), con 70 cm tra le file e 50 cm tra le piante all'interno delle file.
L'irrigazione a goccia è stata applicata utilizzando emettitori che rilasciano 4 L h⁻1 per collinetta per 1 h ogni due giorni. Per evitare interferenze tra i trattamenti, una cresta tra le parcelle è stata lasciata non piantumata come zona tampone.
Tutti i campioni hanno ricevuto 24 t ha⁻1 di compost durante la preparazione del terreno due settimane prima della semina. I fertilizzanti minerali sono stati applicati al 50% della dose raccomandata (DR): 360 kg ha⁻1 di solfato di ammonio (20,6% N), 240 kg ha⁻1 di superfosfato bicalcico (15,5% P₂O₅) e 120 kg ha⁻1 di solfato di potassio (48% K₂O). I fertilizzanti azotati e potassici sono stati somministrati in tre dosi uguali a intervalli di 15 giorni, mentre il fertilizzante fosforico è stato applicato in un'unica dose basale. Durante il periodo di crescita sono state seguite pratiche agronomiche standard.

Figura 2: Rendimento di olio per ettaro (kg ha⁻¹) e relativo aumento rispetto al trattamento di controllo (T1: Ct1 × F1) durante la prima (S1) e la seconda (S2) stagione. Ct1 rappresenta il livello più basso di tè di compost (360 L ha⁻¹), mentre F1 rappresenta il controllo non spruzzato. I trattamenti sono definiti come segue: T1 (Ct1 × F1), T2 (Ct1 × F2), T3 (Ct1 × F3), T4 (Ct1 × F4), T5 (Ct1 × F5), T6 (Ct2 × F1), T7 (Ct2 × F2), T8 (Ct2 × F3), T9 (Ct2 × F4), T10 (Ct2 × F5), T11 (Ct3 × F1), T12 (Ct3 × F2), T13 (Ct3 × F3), T14 (Ct3 × F4) e T15 (Ct3 × F5). Le barre di errore rappresentano gli errori standard della media (SEM). Cliccare qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.
5. Trattamenti con tè di compost
Il compost maturo a base vegetale è stato estratto in modo aerobico in acqua dolce per 24–48 h. Il tè di compost risultante aveva una conducibilità elettrica di 1.2–1.6 dS m⁻1 e un pH leggermente alcalino (7.5–8.0). Il tè di compost è stato applicato tramite irrigazione a goccia a dosaggi di 360, 480 o 600 L ha⁻1 nell'arco di 16 settimane, a partire da un mese dopo la semina.
6. Preparazione e applicazione del biostimolante
La biomassa fresca di Azolla caroliniana, Spirulina platensis, Nostoc muscorum e Chlorella vulgaris è stata omogeneizzata in acqua distillata in un rapporto di 1:10 (p/v), filtrata e diluita fino a una concentrazione finale di 2 cm3 L⁻1 (circa 1200 L ha⁻1). Gli estratti sono stati preparati al momento prima dell'applicazione e somministrati come trattamenti fogliari tre volte durante il periodo di crescita (a 30, 60 e 90 giorni dalla semina) utilizzando un irroratore manuale fino al deflusso.
7. Dati registrati
Parametri della crescita vegetativa
Sei piante selezionate casualmente da ogni unità sperimentale sono state raccolte 65 giorni dopo la semina. L'altezza della pianta (cm) è stata misurata dalla base alla punta del fusto principale. Sono stati registrati il peso fresco totale dell'erbaccia (g) e il peso secco (g), con il peso secco determinato dopo essiccazione in stufa a 70 °C per 48 h fino a peso costante. Il numero di rami per pianta è stato calcolato come numero medio ottenuto dalle piante campionate.
Estrazione dell'olio essenziale (EO)
L'olio essenziale è stato estratto da 40 g di frutti raccolti mediante idrodistillazione per 3 h, seguendo il metodo descritto da Miller15. L'olio estratto è stato lasciato riposare senza disturbarlo per garantire una separazione completa16.
Determinazione del contenuto e della resa dell'olio essenziale
Il contenuto di olio essenziale (% p/p) è stato calcolato come:

Dove:
WEO = peso dell'olio essenziale estratto (g)
Wcampion = peso secco del campione vegetale sottoposto a idrodistillazione (g)
La resa di olio essenziale per pianta è stata calcolata come:

Dove:
DWplant = peso secco dell'intera pianta per singola pianta (g)
EO content = percentuale di olio essenziale calcolata sul peso secco (% p/p)
Nota: Si è assunto che la densità dell'olio essenziale fosse approssimativamente di 1 g cm⁻3, consentendo la conversione da grammi a centimetri cubi.
La resa di olio essenziale per ettaro è stata calcolata come segue:

Dove:
Resa di OEper pianta - 1 = resa di olio essenziale per pianta (cm3)
Npiante = numero di piante per ettaro
1000 = fattore di conversione da cm3 a L
Nota: Tutti i calcoli del rendimento dell'olio sono stati basati sulla materia secca per evitare variabilità associate al contenuto di umidità della pianta.
Attributo di resa
Il numero di ombrelle per pianta è stato registrato alla fase di maturazione del frutto contando tutte le ombrelle su ciascuna pianta.
8. Analisi statistica
Per ogni carattere e stagione, le osservazioni a livello di replica sono state sottoposte a test di normalità mediante il test di Shapiro-Wilk. Poiché non sono state osservate deviazioni significative dalla normalità (p > 0,05), è stata applicata un'analisi parametrica. I dati sono stati analizzati mediante analisi della varianza (ANOVA) per un disegno sperimentale a parcelle divise con Statistix 8.1 (Analytical Software, 2008), e le medie dei trattamenti sono state confrontate utilizzando il test della differenza minima significativa (LSD)17.
L'analisi delle componenti principali (PCA) è stata condotta come strumento multivariato per riassumere le relazioni tra i tratti misurati. Gli autovalori sono stati utilizzati per determinare il contributo relativo di ciascuna componente, e la visualizzazione tramite biplot è stata impiegata per confrontare i trattamenti e le associazioni tra tratti18.