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Articolo di ricerca
Questo studio esamina come la vitamina C moduli il comportamento cinetico di una reazione di Fenton in condizioni in vitro . Le sonde a coloranti chimici e gli sami batterici mostrano che il dosaggio controllato di vitamina C modifica il comportamento ossidativo della reazione ed è associato a un aumento dell'attività antibatterica contro Helicobacter pylori in un sistema modello semplificato.
L'infezione da Helicobacter pylori rimane un importante onere sanitario globale e la crescente prevalenza della resistenza agli antibiotici sottolinea la necessità di strategie antibatteriche alternative. Questo studio ha esaminato se il dosaggio di vitamina C potesse modulare l'ossidazione di Fenton e potenziare l'attività ossidativa antibatterica contro H. pylori in condizioni acide in vitro definite. L'attività ossidativa è stata valutata utilizzando la decolorazione con Acid Orange 7 come lettura chimica indiretta e un saggio di fluorescenza dell'acido tereftalico come indicatore relativo della formazione di prodotto associato ai radicali idrossile in reazioni ferro-perossido integrate con vitamina C. L'efficacia antibatterica è stata analizzata esposendo H. pylori standardizzato sospensioni in soluzione salina contenente urea al pH 3 fino a perossido di idrogeno e ferro ferroso con o senza integrazione graduale di vitamina C, seguite da unità-numero di unità formanti colonie. L'integrazione di vitamina C ha alterato le letture ossidative ed è stata associata a maggiori riduzioni dei batteri vitali rispetto alla chimica convenzionale di Fenton. Esperimenti di salvataggio con deferoxammina e tiourea hanno attenuato l'attività antibatterica, supportando l'ipotesi che l'attività antibatterica sia associata a processi ossidativi mediati dal ferro e correlati ai radicali. La colorazione a fluorescenza viva/morta e la microscopia elettronica a scansione hanno fornito osservazioni visive qualitative coerenti con i risultati dell'enumerazione dell'unità formatrice di colonie (CFU). Collettivamente, questi risultati indicano che il dosaggio controllato di vitamina C può modulare le reazioni ossidative basate su Fenton e aumentare l'attività antibatterica contro H. pylori in un modello in vitro semplificato e acido.
H. pylori, un batterio Gram-negativo a forma a spirale appartenente al genere Helicobacter, è stato dimostrato tramite studi sulla salute delle popolazioni avere un'elevata prevalenza di infezione in aree geografiche, sesso ed età, con un tasso di prevalenza globale di circa il 50%. L'Agenzia Internazionale per la Ricerca sul Cancro (IARC) ha classificato H. pylori come carcinogeno di Gruppo 1, sottolineando il suo forte legame con il cancro gastrico e il linfoma del tessuto linfoide associato alla mucosa (MALT). Attualmente, la gestione clinica dell'infezione da H. pylori si basa principalmente su regimi farmacologici. Gli agenti più studiati includono gli inibitori della pompa protonica (PPI), che sopprimono la secrezione di acido gastrico; composti di bismuto, che aumentano l'efficacia degli antibiotici; e antibiotici come amoxicillina, claritromicina e metronidazolo. Tuttavia, la monoterapia si è dimostrata insufficiente per l'eradicazione completa, portando all'uso diffuso di regimi combinati, comunemente chiamati tripla terapia. Questo approccio consiste tipicamente in un IPP, claritromicina e amoxicillina o metronidazolo, somministrati per circa due settimane. Con l'aumento della prevalenza di ceppi di H. pylori resistenti agli antibiotici, l'efficacia della tripla terapia è diminuita notevolmente, portando all'adozione della quadrupla terapia che combina un PPI, bismuto e dueantibiotici 3. Tuttavia, questi regimi dipendono ancora fondamentalmente dagli antibiotici, e la resistenza agli antibiotici rimane una sfida importante nella gestioneclinica 4,5. Di conseguenza, l'esplorazione di strategie antibatteriche alternative e indipendenti dagli antibiotici ha suscitato un interesse crescente.
Oltre ai suoi effetti patologici diretti, l'infezione da H. pylori è stata anche associata a alterazioni nell'omeostasi dei micronutrienti gastrici. Studi clinici ed epidemiologici hanno riportato concentrazioni ridotte di vitamina C nel succo gastrico e nel siero degli individuiinfetti 6, che potrebbero essere correlate a infiammazione mucosa, secrezione compromessa o aumento del consumoossidativo 7,8,9. Parallelamente, l'infezione da H. pylori è stata collegata a carenza di ferro attraverso molteplici meccanismi, tra cui una riduzione dell'acidità gastrica, una riduzione dell'assorbimento alimentare del ferro e la competizione batterica per il ferrodisponibile 10. Queste osservazioni evidenziano il complesso ambiente biochimico che accompagna l'infezione da H. pylori e sottolineano la rilevanza dei processi correlati al redox e al ferro nelle condizioni gastriche acide.
Le specie reattive di ossigeno (ROS) hanno acquisito notevole interesse nella ricerca sugli antimicrobici grazie alle proprietà ossidative di queste specie. ROS si riferisce a una classe di molecole chimicamente reattive formate durante la riduzione parziale dell'ossigeno, come l'anione superossido (O₂•⁻), il perossido di idrogeno (H₂O₂), l'ossigeno singoletto (1O₂) e i radicali idrossile (•OH), tra gli altri. Nei sistemi biologici, gli ROS sono ampiamente coinvolti nel metabolismo fisiologico normale e sono essenziali per le diverse attività regolatoriecellulari 11. In particolare, numerosi studi hanno dimostrato che un eccessivo ROS può disturbare le membrane cellulari batteriche tramite la perossidazione lipidica, portando a alterazioni nella struttura e nella funzione della membrana, portando infine all'inattivazionebatterica 12. Di conseguenza, gli approcci antimicrobici basati su ROS hanno suscitato interesse come potenziale via per indagare gli effetti antibatterici non antibiotici contro H. pylori 13,14,15,16. Tra i vari metodi di generazione ROS, la reazione di Fenton ha attirato notevole attenzione per la sua produzione di radicali altamente efficiente. La reazione di Fenton è un processo di ossidazioneavanzato 17 in cui ioni ferrosi (Fe2⁺) reagiscono con H₂O₂ in condizioni acide per produrre radicali idrossilici (•OH), che possiedono un forte potenziale ossidativo e possono ossidare biomolecole intracellulari.
Fe2⁺ +H→Fe3⁺+•OH+OH-
Fe3⁺+ H→Fe2⁺+•OOH+ H⁺
H₂O→OH+•OOH+H2O
In particolare, a un pH di circa 2,8–4,5, H₂O₂ subisce una decomposizione catalitica da parte di Fe2⁺, generando •OH mentre Fe2⁺ viene ossidata in Fe3⁺. Fe3⁺ reagisce quindi con H₂O₂ per rigenerare Fe2⁺, stabilendo un ciclo redox Fe2⁺/Fe3⁺ che sostiene una produzione continua diROS 18. Tuttavia, la riduzione di Fe3⁺ a Fe2⁺ è relativamente lenta, costituendo il passaggio limitante di velocità e riducendo di conseguenza l'efficienza complessiva della reazione di Fenton. Gli studi indicano che introdurre un agente riducente adatto nel sistema di reazione di Fenton può accelerare la riduzione di Fe2⁺ a Fe2⁺, migliorando così la generazione ROS. La vitamina C ha un ruolo redox dipendente dal contesto. Nei sistemi contenenti ferro, può promuovere la riduzione del Fe2⁺ a Fe2⁺ e quindi supportare il ciclo di Fenton, mentre a concentrazioni più elevate o in condizioni di reazione diverse, può anche funzionare come antiossidante o come scavengerdi radicali 19.
Sulla base di questo contesto, il presente studio investiga un sistema di reazione di Fenton assistito dalla vitamina C come approccio chimicamente regolabile per modulare l'attività ossidativa in condizioni acido-vitrodefinite 20,21. La vitamina C è stata utilizzata come agente riducente per facilitare la rigenerazione del Fe2⁺ e così alterare il comportamento ossidativo efficace della reazione di Fenton. Il sistema sperimentale utilizzato qui era un modello semplificato di soluzione salina-urea acida e non era destinato a riprodurre completamente il microambiente gastrico fisiologico, che contiene muco, componenti tamponanti, cellule ospiti, fattori immunitari e diversi substrati organici. All'interno di questo modello controllato, l'attività ossidativa è stata caratterizzata tramite letture chimiche e valutata in parallelo con le risposte fenotipiche batteriche, fornendo una base sperimentale per indagare gli effetti antibatterici associati alla ROS contro H. pylori in vitro.
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Dichiarazione etica
Questo studio era uno studio batterico in vitro e non coinvolgeva partecipanti umani, soggetti animali o materiali derivati dal paziente. Pertanto, non era richiesta l'approvazione del comitato di revisione istituzionale e l'approvazione dell'etica animale.
Valutazione della degradazione di AO7 nel sistema Fenton assistito dalla vitamina C
Per valutare l'effetto della vitamina C sul comportamento ossidativo osservabile della reazione di Fenton, è stata utilizzata la degradazione dell'Acid Orange 7 (AO7) come lettura chimica indiretta dell'attività ossidativa. Questo saggio non quantifica specificamente le singole specie reattive di ossigeno. Ho preparato 100 mL di soluzione AO7 a 5 mg/L e ho regolato la soluzione a pH 3. Hanno aggiunto H₂O₂ e FeSO₄ alle concentrazioni finali rispettivamente di 2,2 mM e 0,055 mM. Vitamina C aggiunta sia come bolo singolo all'inizio della reazione sia con uno schema di dosaggio in tre fasi. Per l'esperimento dose-risposta, sono stati utilizzati rapporti molari Vc:Fe 2⁺ rispettivamente di 0, 0,12, 0,24, 0,48, 2, 4, 6 e 8, corrispondenti alle concentrazioni finali di vitamina C di 0, 0,0066, 0,0132, 0,0264, 0,110, 0,220, 0,330 e 0,440 mM, quando si usa FeSO₄ a 0,055 mM. Per la condizione di aggiunta in tre fasi, si ha diviso la quantità totale di vitamina C in tre aliquote uguali e si ha aggiunto un'aliquota a 3, 5 e 7 minuti dopo l'inizio della reazione. Ad esempio, con un rapportoVc:Fe 2⁺ di 0,48, si aggiungeva vitamina C a 0,0088 mM per aliquota, ottenendo una concentrazione totale finale di 0,0264 mM.
Ho mescolato la soluzione di reazione continuamente al buio per 10 minuti, mantenendo la temperatura sotto i 30 °C. Ho raccolto 2 mL di campioni prima e dopo la reazione. Ho misurato l'assorbenza a 483 nm usando uno spettrofotometro UV-Vis e calcolato il tasso di degrado di AO7 usando l'Equazione 1:
Tasso di degrado (%) = [(A₀ − A₁) / A₀] × 100% (1)
Qui, A₀ rappresenta l'assorbenza del campione prima della reazione, mentre A₁ rappresenta l'assorbanza del campione dopo la reazione.
Valutazione del segnale di fluorescenza •OH associato utilizzando una sonda TA
Per valutare i segnali di fluorescenza associati ai radicali idrossi nelle stesse condizioni acido-vitro utilizzate negli esperimenti antibatterici, è stato stabilito un sistema chimico senza cellule utilizzando tereftalato disodio (TA, 1 mM) come sonda di fluorescenza. Questo saggio è stato utilizzato come indicatore relativo della formazione del prodotto associato al •OH e non è stato interpretato come una quantificazione assoluta della generazione di radicali idrossili. Erano inclusi sette gruppi: (1) blank (1 mM TA solo nel buffer di reazione), (2) solo H₂O₂, (3) solo Fe2⁺, (4) solo Vc (aggiunta a gradi), (5) Fenton convenzionale (Fe2⁺ + H₂O₂), (6) Fenton assistito con vitamina C con aggiunta di bolus Vc (Fe2⁺ + H₂O₂ + Vc, bolus), e (7) Fenton assistito da Vc con aggiunta a passi di TVC (Fe2⁺ + H₂O₂ + Vc, a gradi). Nella condizione di addizione a passi, il Vc veniva introdotto a 3, 5 e 7 minuti dopo l'inizio della reazione in aliquote uguali, mentre la condizione del bolo riceveva la stessa quantità totale di Vc come singola aggiunta.
Le aliquote venivano raccolte durante un periodo di reazione di 10 minuti, immediatamente alcalinizzate con NaOH per smorzare ulteriori reazioni radicali e stabilizzare la fluorescenza, e conservate a 4 °C prima della misurazione. L'intensità di fluorescenza del prodotto derivato da TA è stata misurata utilizzando un lettore di micropiastre (Ex/Em: 315/425 nm). La generazione di radicali è stata espressa come intensità di fluorescenza dopo sottrazione di blank ed è stata utilizzata come indicatore relativo della generazione di radicali. Sono stati condotti almeno tre esperimenti indipendenti, e i dati sono stati presentati come profili temporali e confronti degli endpoint a 10 minuti.
Valutazione delle prestazioni antibatteriche tramite conteggio delle colonie
I ceppi di H. pylori sono stati conservati a −80 °C in un brodo di infusione cerebrale (BHI) contenente il 25% di glicerolo. La principale varietà utilizzata per il saggio principale di conteggio delle colonie, il saggio di salvataggio, il saggio di interferenza matriciale, la colorazione a fluorescenza viva/morta e l'analisi con microscopia elettronica a scansione era H. pylori G27. Prima di ogni esperimento, i batteri venivano infilati sulle placche di agar sanguigno Columbia e incubati per 3 giorni a 37 °C in condizioni microaerofile composte dal 5% di O₂, 10% di CO₂ e 85% di N₂22.
Conteggio della colonia nel ceppo primario
Ha utilizzato l'enumerazione delle unità formanti di colonie (CFU) per valutare l'attività antibatterica in diverse condizioni di trattamento. Inclusi i seguenti gruppi: controllo non trattato, H₂O₂ da solo, vitamina C da solo, reazione di Fenton convenzionale e reazione di Fenton assistita dalla vitamina C. Se un gruppo Fe2⁺-alone non è stato incluso nell'esperimento originale, si evita di interpretare il saggio primario come una separa completa degli effetti solo ferro-ferro dagli effetti ossidativi mediati dalla reazione di Fenton. Prelevato H. pylori in coltura e sospende i batteri nella soluzione fisiologica salina. Ha regolato la densità ottica a 600 nm (OD₆₀₀) a 0,5, e ha trasferito la sospensione in una soluzione fisiologica fisiologica contenente 3 mM di urea regolata a pH 3. Aggiunto H₂O₂, FeSO₄ e vitamina C in base al gruppo di trattamento assegnato. Sono state utilizzate concentrazioni finali di 2,2 mM H₂O₂ e 0,055 mM di FeSO₄. Per il trattamento Fenton assistito dalla vitamina C, si aggiungeva vitamina C in tre aliquote uguali a 3, 5 e 7 minuti, con una concentrazione totale finale di 0,0264 mM.
Dopo 10 minuti di trattamento, ogni campione è stato immediatamente diluito 100 volte in soluzione salina tamponata con fosfato (PBS, pH 7,4) per neutralizzare la sospensione acida e ridurre il trasferimento di ossidanti residui e ferro nella fase di placcaggio. Placcata la sospensione batterica diluita su piastre di agar di sangue Columbia e incubata a 37 °C per 3 giorni in condizioni microaerofile di 5% O₂, 10% CO₂ e 85% N₂. Conteggiato le CFU e calcolato l'attività antibatterica come log₁₀ riduzione delle CFU rispetto al controllo non trattato usando l'Equazione 2:
log10 riduzione della CFU = log10(controllo CFU) − log10 (CFU trattata) (2)
Analisi di salvataggio
Per verificare se l'attività antibatterica del sistema Fenton assistito dalla vitamina C fosse associata alla disponibilità di ferro e a processi correlati ai radicali, sono stati condotti esperimenti di salvataggio utilizzando la deferoxamine (DFO) come chelante del ferro e la tiourea come scavenger di radicali idrossilici. La DFO o tiourea è stata aggiunta alla sospensione batterica 5 minuti prima dell'aggiunta di FeSO₄ e H₂O₂. DFO e tiourea sono stati utilizzati a concentrazioni finali rispettivamente di 100 μM e 5 mM.
Sono stati inclusi sei gruppi sperimentali: controllo non trattato, Fenton assistito dalla vitamina C, Fenton assistito dalla vitamina C con DFO, Fenton assistito dalla vitamina C con tiourea, DFO solo e solo tiourea. Tutti gli altri parametri sperimentali, inclusi pH, fondo salino/urea, concentrazione di H₂O₂, concentrazione di FeSO₄, schema di dosaggio di vitamina C, durata del trattamento, diluizione/neutralizzazione prima della placcatura e condizioni di incubazione, erano identici a quelli utilizzati nel test primario di conteggio delle colonie. L'attività antibatterica è stata quantificata tramite l'enumerazione della CFU ed espressa come riduzione log₁₀ della CFU rispetto al controllo non trattato.
Validazione multistrain
Per fornire un supporto limitato per la ceppa incrociata all'effetto antibatterico osservato nel ceppo primario, il test di conteggio delle colonie è stato ulteriormente applicato a due ceppi aggiuntivi di riferimento di H. pylori , ATCC 43504 e ATCC 26695. Per ogni ceppo sono stati inclusi tre gruppi sperimentali: controllo non trattato, reazione di Fenton convenzionale e reazione di Fenton assistita dalla vitamina C con aggiunta graduale di vitamina C. Le condizioni e le procedure sperimentali erano identiche a quelle utilizzate nel saggio primario di conteggio delle colonie. L'attività antibatterica è stata espressa come riduzione log₁₀ della CFU rispetto al controllo non trattato per ciascun ceppo. Ogni esperimento è stato condotto con n = 3 repliche biologiche indipendenti, e i dati sono stati presentati come singoli punti con media ± deviazione standard.
Saggio di interferenza matriciale
Per valutare se i componenti della matrice organica potessero attenuare l'attività antibatterica del sistema Fenton assistito dalla vitamina C, è stato stabilito un modello di interferenza proteica utilizzando albumina sierica bovina (BSA). La BSA è stata inclusa a concentrazioni finali di 0, 1 e 3 g· L⁻1. Ad ogni concentrazione di BSA sono stati inclusi tre gruppi sperimentali: (1) controllo non trattato, (2) Fenton convenzionale (Fe2⁺ + H₂O₂) e (3) Fenton assistito dalla vitamina C con aggiunta graduale di vitamina C. Il test è stato condotto utilizzando il ceppo primario secondo lo stesso protocollo descritto nel test di conteggio delle colonie primarie, con condizioni di pH identiche, fondo di soluzione salina/urea, concentrazioni di reagenti, durata del trattamento (10 min) e procedure di impiccatura identiche. L'attività antibatterica è stata espressa come riduzione log₁₀ della CFU rispetto al controllo non trattato a ciascuna concentrazione di BSA. Ogni esperimento è stato eseguito almeno tre volte in modo indipendente. Il confronto principale si è concentrato sul fatto che la condizione di Fenton potenziata rimanesse superiore, o almeno non più debole, rispetto alla condizione convenzionale di Fenton in condizioni contenenti proteine.
Colorazione batterica viva/morta a fluorescenza
Dopo il trattamento, la sospensione batterica è stata diluita 100 volte in PBS come descritto sopra per ridurre il residuo di acidità e ossidazione. Centrifugò la sospensione a 1.800 × g per 10 minuti a temperatura ambiente e scartò il soprandante. Ha risospeso il pellet batterico in 200 μL di soluzione fisiologica. Aggiunto SYTO9 e ioduro di propidio (PI) a concentrazioni finali rispettivamente di 6 μM e 30 μM. Ho incubato la sospensione al buio per 20 minuti a temperatura ambiente. Ho posizionato 5–10 μL della sospensione batterica colorata su un vetrino di vetro pulito e l'ho coperto con un copertore. Acquisite immagini di fluorescenza utilizzando un microscopio a fluorescenza con canali di fluorescenza verdi e rossi sotto impostazioni di esposizione identiche per tutti i gruppi di trattamento. Ha catturato almeno tre campi selezionati casualmente per ogni gruppo. Ha utilizzato le immagini come prova visiva qualitativa di modelli di colorazione vivi/morti piuttosto che come misura quantitativa della vitalità batterica.
Analisi della morfologia batterica tramite microscopia elettronica a scansione
Dopo il trattamento, i campioni batterici sono stati raccolti e fissati nel glutaraldeide al 2,5% preparato in 0,1 M fosfato tampone (pH 7,4) a 4 °C per 12 ore. Dopo la fissazione, i campioni venivano lavati con tampone fosfatico per rimuovere il fissativo residuo. I campioni sono stati poi disidratati in sequenza in soluzioni di etanolo gradate del 50%, 70%, 90% e 100%. Dopo la disidratazione, veniva eseguito l'asciugatura a punto critico. I campioni essiccati venivano montati su stonchi di SEM e rivestiti a sputter con uno strato sottile d'oro di circa 10 nm. La morfologia batterica è stata esaminata tramite microscopia elettronica a scansione a una tensione di accelerazione di 5 kV. Immagini rappresentative sono state acquisite a basso e alto ingrandimento per ciascun gruppo di trattamento. Le immagini SEM sono state utilizzate come osservazioni morfologiche qualitative piuttosto che come prove quantitative di un meccanismo di danno definito.
Analisi statistica
Le analisi statistiche sono state effettuate utilizzando GraphPad Prism versione 10.0. Tutti gli esperimenti quantitativi sono stati condotti con n = 3 repliche biologiche indipendenti, e i dati sono presentati come media ± deviazione standard (SD). Per i saggi di fluorescenza TA, sono stati effettuati confronti statistici tra gruppi di trattamento multipli utilizzando l'analisi unidirezionale della varianza (ANOVA), seguita dal test di confronto multiplo di Tukey. Per i saggi di conteggio delle colonie nel ceppo primario che coinvolgeva condizioni di trattamento multiple, sono stati effettuati confronti statistici utilizzando ANOVA unidirezionale seguiti dal test di confronti multipli di Tukey. Per i saghi di salvataggio, sono stati effettuati confronti tra gruppi utilizzando ANOVA unidirezionale seguiti dal test di confronti multipli di Dunnett, con il gruppo di Fenton assistito dalla vitamina C come riferimento. Per esperimenti limitati di validazione incrociata di ceppo, le riduzioni log₁₀ di CFU sono state confrontate tra i gruppi convenzionali di Fenton e quelli assistiti dalla vitamina C all'interno di ciascun ceppo, utilizzando un test t a due code non abbinato. Per i saggi di interferenza matriciale, è stata eseguita ANOVA bidirezionale con trattamento e concentrazione di BSA come fattori, incluso il termine di interazione. Confronti a coppie tra i trattamenti a ciascuna concentrazione di BSA sono stati effettuati utilizzando il test di confronti multipli di Šídák. La significatività statistica è stata definita come P < 0,05. I livelli di significatività sono indicati come *p < 0,05, ** P < 0,01, ***P < 0,001 e ****p < 0,0001.
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Valutazione della degradazione di AO7 nel sistema Fenton assistito dalla vitamina C
La degradazione di AO7 è stata utilizzata come sonda chimica per esaminare come la vitamina C influenzi il comportamento ossidativo osservabile della reazione di Fenton in condizioni acide. In assenza di vitamina C, il sistema convenzionale Fenton ha causato una degradazione parziale di AO7 nel periodo di reazione di 10 minuti. Quando è stata introdotta la vitamina C, l'entità della de...
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Il presente studio ha esaminato se il dosaggio di vitamina C potesse modulare il comportamento ossidativo e le letture antibatteriche di un sistema a base di Fenton in condizioni acido-vitro definite. Attraverso i saghi chimici e microbiologici, l'integrazione graduale di vitamina C ha modificato il comportamento reazionale osservabile ed è stata associata a una maggiore attività antibatterica contro H. pylori rispetto alla reazione convenzionale di Fenton nelle condizi...
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Gli autori non hanno divulgazioni.
Questo lavoro è stato sostenuto dalla Natural Science Foundation della provincia del Sichuan (n. 2023NSFSC0570) e dal progetto del Programma Nazionale Chiave di R&S della Cina (n. 2022YFB3804500)
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Acid Orange 7 (AO7) | Aladdin Reagent (Shanghai) Co., Ltd. | O113230 | Utilizzato come colorante modello per il saggio di degradazione AO7. |
| Bovine serum albumin (BSA) | Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd. | B885114 | Utilizzato per il saggio di interferenza matriciale. |
| Brain Heart Infusion (BHI) broth powder | Sichuan Hapyear Bio-engineering Co., Ltd. | N/A | Utilizzato per la coltura batterica e la criossorazione. |
| Columbia blood agar plates (5% sheep blood) | Changde Bkmam Biotechnology Co., Ltd. | 110701028.0 | Utilizzato per la coltura batterica e l'enumerazione CFU. |
| Critical point dryer (EM CPD300) | Leica Microsystems | EM CPD300 | Utilizzato per la preparazione del campione SEM dopo la disidratazione con etanolo graduato. |
| Deferoxamine (DFO) | Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd. | D873692 | Utilizzato come chelante del ferro nel saggio di salvataggio. |
| Disodium terephthalate | Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd. | D835937 | Utilizzato come sonda di fluorescenza TA per il rilevamento del segnale associato a •OH. |
| Ethanol, absolute | Sigma-Aldrich | E7023 | Utilizzato per preparare la serie di etanolo graduato per la disidratazione del campione SEM. |
| Fluorescence microscope (DMi8) | Leica Microsystems | DMi8 | Utilizzato per l'imaging a fluorescenza live/dead. |
| Glutaraldehyde solution | Sigma-Aldrich | G5882 | Utilizzato per la fissazione dei campioni batterici prima della SEM. |
| Glycerol | Sigma-Aldrich | G5516 | Utilizzato per la criossorazione batterica nel brodo BHI. |
| GraphPad Prism 10 | GraphPad Software, LLC | Prism 10 | Utilizzato per l'analisi statistica e la creazione di grafici. |
| Helicobacter pylori strain ATCC 26695 | American Type Culture Collection (ATCC) | 700392 | Cepo di riferimento aggiuntivo utilizzato per la validazione incrociata limitata tra ceppi. |
| Helicobacter pylori strain ATCC 43504 | American Type Culture Collection (ATCC) | 43504 | Cepo di riferimento aggiuntivo utilizzato per la validazione incrociata limitata tra ceppi. |
| Helicobacter pylori strain G27 | Center of Infectious Diseases, West China Hospital, Sichuan University | N/A | Cepo principale utilizzato per il conteggio delle colonie, il saggio di salvataggio, il saggio di interferenza matriciale, la colorazione live/dead e la SEM. |
| Hydrogen peroxide solution | Sigma-Aldrich | H1009 | Utilizzato come substrato per perossido negli saggi di reazione di Fenton. |
| Iron(II) sulfate monohydrate (FeSO4·H2O) | Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd. | F904376 | Utilizzato come fonte di ioni ferrosi nella reazione di Fenton. |
| Microplate reader (Synergy H1) | Agilent BioTek | Synergy H1 | Utilizzato per misurare la fluorescenza derivata da TA (Ex/Em = 315/425 nm). |
| Phosphate-buffered saline (PBS), pH 7.4 | Sigma-Aldrich | P4417 | Utilizzato per la diluizione/neutralizzazione post-trattamento prima della placcatura e del lavaggio del campione. |
| Physiological saline (0.9% sodium chloride solution) | Millipore | 567442 | Utilizzato per la sospensione batterica e la preparazione del modello di soluzione salina-urea acida. |
| Scanning electron microscope (INSPECT F) | FEI Company | INSPECT F | Utilizzato per l'analisi della morfologia batterica. |
| Sodium hydroxide | Sigma-Aldrich | S5881 | Utilizzato per alcalinizzare gli aliquoti del saggio TA e stabilizzare la fluorescenza. |
| Sputter coater (EM ACE200) | Leica Microsystems | EM ACE200 | Utilizzato per applicare il sottile rivestimento d'oro prima dell'imaging SEM. |
| SYTO 9/PI Live/Dead Bacterial Double Stain Kit | Shanghai Maokang Biotechnology Co., Ltd. | MX4234 | Utilizzato per la colorazione batterica live/dead basata sulla fluorescenza. |
| Thiourea | Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd. | T81602 | Utilizzato come scavenger di radicali nel saggio di salvataggio. |
| Urea | Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd. | U820349 | Utilizzato per preparare il modello di soluzione salina-urea acida. |
| UV-Vis spectrophotometer (UV-2600i Plus) | Shimadzu Corporation | UV-2600i Plus | Utilizzato per misurare l'assorbanza AO7 a 483 nm. |
| Vitamin C (L-ascorbic acid) | Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd. | A800295 | Utilizzato come riducente nel sistema Fenton assistito dalla vitamina C. |