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Articolo metodologico

Un modello di enterocolite accelerata da Piroxicam in topi knockout con interleucina-10 per studiare alterazioni metaboliche indotte dall'infiammazione

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DOI:

10.3791/71448

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11 agosto 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, The University of Texas Southwestern Medical Center, 2Department of Pathology, University of Texas Southwestern Medical Center, 3Department of Internal Medicine, University of Texas Southwestern Medical Center

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo utilizza piroxicam per accelerare lo sviluppo della colite nel modello murino knockout con interleucina (IL-10). Il protocollo garantisce la sincronizzazione della colite, risultando in risultati rigorosi e riproducibili indipendentemente dal sesso, dalla tensione di fondo o dalle condizioni del vivario. Serve come modello utile per studiare le alterazioni metaboliche durante l'infiammazione intestinale.

Abstract

La malattia infiammatoria intestinale (IBD) è un disturbo infiammatorio cronico del tratto digestivo che colpisce oltre 10 milioni di persone in tutto il mondo. Sebbene ricerche sostanziali si siano concentrate sui meccanismi immunologici e sulle conseguenze alla base della IBD, si sa meno su come l'infiammazione mucosa contribuisca alla disregolazione metabolica, inclusa la perdita di peso e la riduzione dell'appetito. Qui, gli autori descrivono un modello murino di enterocolite accelerata da piroxicam in topi con interleucina-10-knockout (IL-10-KO) per studiare la disregolazione metabolica indotta dall'infiammazione. I topi IL-10-KO sono noti per sviluppare enterocolite spontanea e una maggiore suscettibilità all'enterocolite scatenata da infezioni o farmaci. Tuttavia, condizioni di vivario e background di ceppo sono state segnalate come fattori di confusione nello sviluppo della colite in questo modello. Il Piroxicam, un farmaco antinfiammatorio non steroideo (FANS), è stato dimostrato di scatenare o accelerare l'enterocolite nei modelli animali aumentando l'esposizione mucosa ai batteri luminali. In questo protocollo, maschi e femmine di topi IL-10-KO sono stati nutriti con una dieta fortificata con piroxicam al posto di una dieta alimentare regolare. L'apporto alimentare e il peso corporeo sono stati misurati quotidianamente per riflettere alterazioni metaboliche dell'intero corpo, insieme a manifestazioni cliniche di enterocolite come diarrea e sanguinamento rettale. Il protocollo è efficiente e riproducibile, inducendo enterocolite simultaneamente in più topi e consente la valutazione della disregolazione metabolica in un modello di malattia infiammatoria intestinale. Ulteriori studi che utilizzano questo protocollo potrebbero indagare gli effetti dell'enterocolite su altri componenti della disregolazione metabolica, come il dispendio energetico e la composizione corporea, rivelando connessioni più ampie tra la malattia infiammatoria intestinale e il metabolismo dell'ospite.

Introduzione

Il morbo di Crohn e la colite ulcerosa, conosciute collettivamente come malattia infiammatoria intestinale (IBD), sono disturbi autoimmuni cronici del tratto gastrointestinale caratterizzati da infiammazione mucosa con manifestazioni cliniche che includono dolore addominale, perdita di peso, ematochezia e diarrea. La MII colpisce milioni di individui in tutto il mondo, con la più alta prevalenza nelle societàoccidentalizzate 1. Negli Stati Uniti, si stima che oltre 3 milioni di persone sianocolpite 2,3, con un aumento dell'incidenza e della prevalenza, in particolare tra bambini e giovani 4,5.

I meccanismi esatti alla base della patogenesi dell'IBD restano incompletamente compresi, ma si ritiene ampiamente che la malattia derivi da una risposta immunitaria esagerata al microbiota intestinale negli individui geneticamente suscettibili. Le citochine che modulano le risposte infiammatorie svolgono ruoli fondamentali nel mantenimento dell'omeostasi intestinale e nello sviluppo della IBD. Tra queste, l'interleucina-10 (IL-10) è una citochina antinfiammatoria ben studiata che aiuta a mantenere l'omeostasi immunologica nell'uomo regolando sia i bracci innati che adattivi della rispostaimmunitaria 6,7. In particolare, polimorfismi in IL-10 e nel suo recettore (IL-10RA/B) sono stati identificati in neonati con IBD A ESORDIO MOLTO PRECOCE (VEO-IBD), che si manifestano classicamente con malattia perianale nei primi mesi divita. Questa associazione è ulteriormente supportata dal sequenziamento su larga scala dell'esoma di pazienti adulti con morbo di Crohn, che ha identificato l'IL-10RA come un luogo di suscettibilità alla malattia nellaIBD non monogenica 9. Inoltre, è stata descritta in pazienti con VEO-IBD un percorso non genetico che coinvolge anticorpi neutralizzanti IL-10, sottolineando ulteriormente l'importanza di questo percorso nel mantenimento dell'omeostasi immunitariamucosa 10.

Basandosi su studi umani che implicano l'IL-10 nella IBD, sono stati sviluppati topi interleuchina-10-knockout (IL-10-KO) come modello per studiare il ruolo dell'IL-10 nella IBD. I topi IL-10-KO sono noti per sviluppare enterocolite spontanea con una risposta Th1 esagerata di CD4+ agli stimoli, tipicamente a partire dalle 8 alle 12 settimane di11 anni. Tuttavia, lo sviluppo di enterocolite spontanea nei topi IL-10-KO può essere imprevedibile in assenza di un agenteaccelerante 12,13,14, a seconda del ceppo genetico, della composizione microbiota e delle condizioni abitative 15,16. L'uso di un protocollo affidabile per indurre la colite è fondamentale affinché il modello IL-10-KO sia praticamente utile. Studi precedenti hanno utilizzato farmaci antinfiammatori non steroidei (FANS) come il piroxicam per indurre l'enterocolite nei topi IL-10-KO17,18. Tuttavia, questi studi si sono concentrati principalmente sulle alterazioni immunologiche, con relativamente poca attenzione agli effetti dell'enterocolite sul metabolismo o sul ruolo del sesso nella gravità dellacolite 19. Gli autori qui descrivere l'uso di una dieta fortificata con piroxicam per indurre l'enterocolite nei topi IL-10-KO e caratterizzano la disregolazione metabolica e le risposte infiammatorie mucose in questo modello utilizzando sia topi maschi che femmine. Questo protocollo misura il peso corporeo e l'assunzione alimentare per riflettere alterazioni metaboliche dell'intero corpo, così come manifestazioni cliniche della colite e cambiamenti istologici e trascrittomici che riflettono l'infiammazione mucosa. Questo modello efficiente e riproducibile fornisce uno strumento prezioso per indagare la connessione tra IBD e metabolismo dell'ospite.

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Protocollo

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati condotti in conformità con il protocollo approvato dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) presso il University of Texas Southwestern Medical Center, in conformità con la "Guida per la Cura e l'Uso degli Animali da Laboratorio" [Numero di Approvazione: 2017-102011]. L'eutanasia è stata effettuata secondo le linee guida istituzionali. Non è stata necessaria l'anestesia per le procedure eseguite. I dettagli specifici dei materiali sono descritti nella Tabella dei Materiali.

1. Stabilimento del modello di enterocolite accelerata con piroxicam nei topi IL-10-KO

  1. Mantenere topi IL-10-KO in una struttura specifica priva di patogeni (SPF) durante un ciclo di luce di 12 ore con accesso ad libitum a cibo e acqua.
  2. Ospitano singolarmente topi di 7–8 settimane, di età e sesso abbinati, in gabbie microisolatore. Permettere ai topi di abituarsi a un singolo alloggio e alla gestione quotidiana per almeno una settimana prima dell'inizio dell'esperimento.
    NOTA: Assicurati che il peso corporeo sia >20 g per i maschi o >17 g per le femmine, e che i topi siano privi di ferite da combattimento.
  3. Assegnare i topi a un gruppo sperimentale e a un gruppo di controllo. Per il gruppo sperimentale, sostituire il cibo standard con cibo fortificato con piroxicam. Per il gruppo di controllo, fornire cibo standard fresco. Aggiungi 50 g di chow a ogni hopper della gabbia.
    NOTA: Assegna almeno cinque topi per sesso a ciascun gruppo. Il cibo fortificato con piroxicam (200 ppm) è stato preparato da Teklad utilizzando piroxicam fornito dagli investigatori per la produzione di una dieta personalizzata per animali da laboratorio. Per minimizzare la variabilità da lotto a lotto, si raccomanda che tutti gli animali all'interno di un dato esperimento ricevano cibo dallo stesso lotto di produzione. Quando possibile, lo stesso lotto dovrebbe essere utilizzato anche in esperimenti per migliorare la riproducibilità.

2. Monitoraggio del peso corporeo e del comportamento alimentare

  1. Utilizzando una bilancia analitica, registra il peso corporeo di ogni topo. Pesa ogni topo singolarmente alla stessa ora ogni giorno, ogni giorno per 7 giorni consecutivi. Riporta il peso corporeo giornaliero come percentuale del peso di base al giorno 0 (impostato al 100%).
    NOTA: Una perdita di peso superiore al 20% indica uno stress eccessivo e un rischio di morte imminente. I topi dovrebbero essere soppressi se questa soglia viene raggiunta.
  2. Utilizzando una bilancia analitica, registra il peso iniziale del cibo fortificato con piroxicam e quello standard in ogni gabbia.
  3. Poi, misura il cibo rimanente in ogni hopper a gabbia alla stessa ora ogni giorno, ogni giorno per 7 giorni consecutivi.
  4. Calcola il consumo giornaliero di chow sottraendo il peso giornaliero del cibo residuo del giorno precedente.
    NOTA: Controlla regolarmente la quantità di cibo e ricarica se è sotto i 10 g. La palatabilità del cibo piroxicam non influenza l'assunzione e dovrebbe assomigliare molto a quella del cibo standard.

3. Monitoraggio dell'attività della malattia

  1. Nei giorni 0 e 7, ispezionare visivamente i pellet fecali di singoli topi e determinare la presenza di sangue nelle feci.
  2. Se non si vede sangue, esegui un test del sangue occulto fecale spalmando un pellet sulla scheda di test, poi aggiungi il reagente di sviluppatore fornito. Risultati del punteggio secondo la Tabella 1.
  3. Nei giorni 0 e 7, ispezionare visivamente i pellet fecali appena evacuati per valutare la consistenza delle feci. Usa le pinze piatte per aiutare a determinare la coerenza. Risultati del punteggio secondo la Tabella 1.
  4. Nei giorni 0 e 7, determinare il grado di prolasso rettale ispezionando la regione perianale. Risultati del punteggio secondo la Tabella 1.
  5. Misura il peso corporeo come descritto sopra. Risultati del punteggio secondo la Tabella 1.
    NOTA: La valutazione dell'indice di attività della malattia (DAI) deve essere eseguita in modo cieco dallo stesso ricercatore durante tutto l'esperimento per garantire coerenza, minimizzare il bias dell'osservatore e migliorare l'affidabilità della valutazione.

4. Prelievo di tessuto colonico

  1. Eutanasiare i topi tramite asfissia da CO 2 e lussazione cervicale come riportatoaltrove 20.
  2. Posiziona il topo in posizione supina e spruzza etanolo al 70% sull'addome ventrale.
  3. Solleva la pelle con le pinze e usa forbici chirurgiche per tagliare lungo la linea mediana. Esponi la cavità peritoneale e localizza il colon.
  4. Esponi il colon e il ceco usando una dissezione contundente. Rimuovere il colon in blocco, inclusi il ceco e il bracciale anale.
  5. Posiziona il colon su una superficie piatta e rimuovi qualsiasi tessuto connettivo.
  6. Misura e registra la lunghezza dei due coloni.
  7. Dopo aver misurato la lunghezza del colon, rimuovere il ceco tagliando alla giunzione ceco-colonica.
  8. Prepara una siringa da 10 mL riempita con soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) con un ago a punta sferica riutilizzabile in acciaio da 22 gauge attaccato. Infila l'ago nel colon e risciacqua il contenuto intestinale.
  9. Inserire il colon sciacquato in una piastra di Petri contenente PBS e risciacquare per rimuovere i residui. Una volta liberato, usalo per i test a valle.

5. Analisi istologica

  1. Appoggia il colon piatto su un vetrino di vetro. Usa le pinze per avvolgere il tessuto attorno a sé, partendo dall'estremità distale, per formare un "rotolo svizzero". In questo modo, l'estremità distal/anale rimarrà nel rotolo interno con le regioni più prossimali che si estendono fino al rotolo esterno.
  2. Usando un ago calibro 27, fissa il colon arrotolato per mantenere il rullo e inseriscilo in una cassetta di tessuto a incastramento.
  3. Per fissare i tessuti, immergere le cassette in una soluzione di formalina tamponata al 10% per 16 ore a 4 °C.
    ATTENZIONE: Il 10% di formalina è dannosa se a contatto con la pelle e può causare gravi ustioni cutanee e danni agli occhi. Maneggia con cautela con guanti protettivi e occhiali scientifici. La formalina residua deve essere smaltita correttamente seguendo le linee guida istituzionali.
  4. Dopo la fissazione della formalina, processare i tessuti per l'incassamento in paraffina e sezionarli per il montaggio su vetrine di vetro.
    NOTA: I campioni devono essere inviati a un laboratorio di istologia con le attrezzature necessarie per la lavorazione delle cassette tissutali in paraffina, sezionamento a scorrimento, montaggio di vetrine e colorazione di ematossilina ed eosina.
  5. Lama del tessuto colorato con ematossilina ed eosina (HE), secondo i protocollistabiliti 21.
  6. Utilizzando il sistema di punteggio istologico descritto nella Tabella 2, valuta le seguenti caratteristiche istologiche in ciascuna sezione: danni tissutali dovuti all'enterocolite, infiltrazione di cellule infiammatorie della lamina propria e percentuale di area coinvolta. Combina i punteggi in ogni sezione per generare un punteggio totale (Tabella 2).
    Punteggio totale = Coinvolgimento × caratteristiche (danno tissutale) + Coinvolgimento × caratteristiche (infiltrazione cellulare infiammatoria della lamina propria) (1)
  7. Immagini istopatologiche rappresentative del danno tissutale e dell'infiltrazione cellulare si trovano nella pubblicazione di Erben etal 22.
    NOTA: La valutazione istologica dovrebbe essere effettuata in modo cieco, preferibilmente da un patologo qualificato, per garantire coerenza e affidabilità della valutazione.

6. Colorazione immunofluorescente di tessuto fissato in formalina e paraffina

  1. Posiziona i vetri in una griglia per vedute e in un asciugacapelli a 55 °C per 1 ora per fondere la paraffina.
  2. Metti i vetri in una griglieria per la tintura e immergi sequencialmente il portaoggetti per 3 minuti in barattoli di tintura con xilene. Ripeti questo passaggio in 3 occasioni.
  3. Immergi la griglietta per la tintura per 3 minuti in barattoli con etanolo al 100%. Ripeti questo passaggio in 3 occasioni.
  4. Immergi la griglia per la tintura per 3 minuti nel barattolo con etanolo al 95%.
  5. Immergi la griglia per la tintura per 3 minuti nel barattolo con etanolo all'80%.
  6. Immergi la griglieria per 5 minuti in barattoli di tinta con acqua deionizzata (DI).
    NOTA: Tutti i passaggi precedenti devono essere eseguiti in una cappa ventilata a causa dei fumi di xilene. Maneggia con cautela con guanti protettivi e occhiali scientifici. Lo xilene residuo deve essere smaltito correttamente in conformità con le linee guida istituzionali.
  7. Trasferire i vetrini su una griglia per vetri e immergerli in un barattolo di colorazione con una soluzione di recupero citrato a 1×.
  8. Metti il barattolo di tintura nel supporto del piatto di tintura.
  9. Metti il supporto per le tinte nella pentola a pressione.
  10. Cuoci per 15 minuti in una pentola a pressione.
  11. Recupera le lamelle dalla pentola a pressione e lasciale raffreddare alla temperatura ambiente.
  12. Incubare vetri con tampone bloccante da 300 μL (siero di capra al 3,5% diluito in PBS) per 1 ora in una camera umidificata. Assicurati che il tessuto sia completamente coperto dal buffer bloccante.
  13. Esporre i vetri a 300 μL di anticorpo primario diluito in tampone bloccante per 16 ore a 4 °C, all'interno di una camera umidificata. Assicurati che il tessuto sia completamente coperto dall'anticorpo primario. È stato utilizzato il seguente anticorpo primario: Anti-S100A8/S100A9 (1:500).
    NOTA: Le diluizioni degli anticorpi saranno specifiche per il reagente e devono seguire le raccomandazioni del fornitore.
  14. Risciacquare i slide immergendoli in serie in PBS per 5 minuti in 3 occasioni in un barattolo per le macchie.
  15. Esporre i vetrini a 300 μL di un anticorpo secondario fluorescente diluito in un tampone bloccante per 1 ora a temperatura ambiente, in una camera umidificata. Assicurati che il tessuto sia completamente coperto dall'anticorpo secondario. È stato utilizzato il seguente anticorpo secondario fluorescente: anti-Rabbit Alexa Fluor 555 (diluizione 1:150).
    NOTA: Da questo momento in poi, i vetrini dovrebbero essere protetti dalla luce per prevenire il fotosbiancamento dei fluorofori. Le diluizioni degli anticorpi secondari saranno specifiche per reagenti e dovranno seguire le raccomandazioni del fornitore.
  16. Risciacquare i slide immergendoli in serie in PBS per 5 minuti in 3 occasioni in un barattolo per le macchie.
  17. Espone i vetrini alla colorazione nucleare immergendoli in una soluzione Hoechst diluita 1:5000 in PBS per 20 minuti in un barattolo di colorazione.
  18. Risciacquare i slide immergendoli in serie in PBS per 5 minuti in 3 occasioni in un barattolo per le macchie.
  19. Rimuovere con cura qualsiasi PBS dai vetri usando un fazzoletto non abrasivo. Aggiungi 50 μL di mezzo antifade per montaggio e un coperchio.

7. Estrazione di RNA

  1. Congela bruscamente l'intero colon o un frammento nell'azoto liquido e poi conserva a -80 °C. In alternativa, immergi in 1,5 mL di soluzione conservatrice RNALater e conserva secondo le istruzioni del produttore.
  2. Scongelare il colon precedentemente congelato e posizionarlo su una superficie piana. Disturba e omogeneizza il tessuto con un omogeneizzatore portatile.
  3. Isola l'RNA usando il kit, seguendo le istruzioni del produttore.
  4. Misura la concentrazione di RNA usando uno spettrofotometro. RapportiA 260/A 280 > 1,8 eA 260/A 230 di 2,0–2,2 indicano una purezza accettabile dell'RNA.
  5. Procedi con la trascrizione inversa, seguita da qPCR con colorante intercalante verde SYBR.
  6. Analizza i risultati utilizzando la piattaforma di quantificazione o uno strumento simile.

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Risultati

Maschi e femmine di topi IL-10-KO sviluppano enterocolite dopo una breve esposizione a una dieta fortificata con piroxicam (Figura 1A–E). Al secondo giorno, i topi esposti al piroxicam hanno mostrato una perdita di peso statisticamente significativamente maggiore rispetto ai loro controlli abituali alimentati con cibo dello stesso sesso, e una perdita di peso comparabile è stata osservata tra i sessi (Figura 1B)...

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Discussione

La malattia infiammatoria intestinale è un disturbo poligenico complesso in cui i modelli preclinici sono strumenti preziosi per analizzare le vie che contribuiscono alla patogenesi della IBD e sviluppare nuove strategie diagnostiche e terapeutiche. Attualmente, molti modelli preclinici per IBD si basano sull'esposizione chimica, come il dextrano solfato di sodio (DSS), l'oxazolone e l'acido trinitrobenzene solfonico (TNBS), grazie alla loro facilità d'uso. Sono disponibili anche modelli...

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Dichiarazioni

Gli autori dichiarano nessuna divulgazione pertinente.

Ringraziamenti

Desideriamo ringraziare le strutture principali dell'UTSW che hanno contribuito al lavoro qui presentato. Questo lavoro è stato sostenuto dalle seguenti fonti di finanziamento: NIH through K08DK127197 (LS-D), T32DK007745 (JW) e la Southwestern Foundation tramite il premio Docstars (LS-D).

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
10% buffered formalinStatLab28600-11 Galllon
27 G needlesBD305109
Anti-S100A8 + S100A9 antibodyAbcamAB288715
BalanceFisher scientificS94792DFisher Science Education Portable Balances, 300 g
Citrate bufferSigma AldrichC9999-1000mL
DI waterFisher scientificSTLSL301
Dissecting forcepsFisher scientific22-327379
Ethanol, 100% 200 proofFisher scientificNC1675398Pharmco Products ETHYL ALCOHOL 200 PROOF
Ethanol, 190 proof, 95%Fisher scientificAC615110010
Ethanol, 80%Fisher scientificT08204K7
EZ-Quick Slide Staining DishIHC worldIW-2511Staining jar
EZ-Quick Slide Staining RackIHC worldIW-2512Slide rack
Feeding needleFisher scientificNC992498622 gauge, 25 mm
Fine scissorsFisher scientific14060-11
Flat forcepsFisher scientific21-125-109
Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ 555Thermo FisherAB_2535849
Handheld homogenizerFisher scientific15-340-167
HemoCueDanlee Medical Products, Inc.BCK 64151AHemoccult Dev/ Single Slide Test Cards - CLIA Waived
Hoechst 33342Invitrogen62249
IL-10 KO MiceThe Jason LaboratoryStrain #: 002251IL10-KO mice, genotype: B6.129P2-IL-10tm1Cgn/J
IVC mouse cagingAllentownMouse 500
Liquid nitrogenAirgasNI UHP300
Microscope cover glassFisher scientific12541033
NanodropThermo FisherND-ONE-W
Normal Goat serumVector labsS-1000-20
Phosphate buffered saline (PBS)Sigma AldrichD8537
Petri dishesFisher scientificFB0875713
PiroxicamSigma AldrichP0847supply to inotiv for preparation of custom animal diet
Piroxicam-fortified chowInotivCustom200 ppm
Primer: Mouse GAPDH forwardSigma AldrichN/A5' AGGTCGGTGTGAACGGATTTG 3' forward
Primer: Mouse GAPDH reverseSigma AldrichN/A5' TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA 3' reverse
Primer: Mouse IFN-G forwardSigma AldrichN/A5' ACTGGCAAAAGGATGGTGAC 3' forward
Primer: Mouse IFN-G reverseSigma AldrichN/A5' TGAGCTCATTGAATGCTTGG 3' reverse
Primer: Mouse IL-10 forwardSigma AldrichN/A5' CTTGCACTACCAAAGCCACA 3' (common)
Primer: Mouse IL-10 reverseSigma AldrichN/A5' GTTATTGTCTTCCCGGCTGT 3' (Wild type reverse)
Primer: Mouse IL-10 reverse (2)Sigma AldrichN/A5' CCACACGCGTCACCTTAATA 3' (Mutant reverse)
Primer: Mouse IL-1B forwardSigma AldrichN/A5' GCTGAAAGCTCTCCACCTCA 3' forward
Primer: Mouse IL-1B reverseSigma AldrichN/A5' AGGCCACAGGTATTTTGTCG 3' reverse
Primer: Mouse IL-6 forwardSigma AldrichN/A5' GTTCTCTGGGAAATCGTGGA 3' forward
Primer: Mouse IL-6 reverseSigma AldrichN/A5' TTTCTGCAAGTGCATCATCG 3' reverse
Primer: Mouse TNF forwardSigma AldrichN/A5' GCAGGTTCTGTCCCTTTCAC 3' forward
Primer: Mouse TNF reverseSigma AldrichN/A5' AGTGCCTCTTCTGCCAGTTC 3' reverse
QuantStudio 7 ProThermo FisherA43183
RNAlater solutionInvitrogenAM7020RNA Stabilization Solution, 100 mL
Rneasy mini kitQiagen74104
SHURDry SD-II Slide DryerGeneral dataSD-ll-120
Simport Scientific EasyDip Slide Staining RackFisher scientific22-038-494Staining rack
SlowFade Gold antifade reagentInvitrogenS36936
Staining dish supportBioSBBSB7086
Staintray IHC slide staining systemIHC worldM918-1Humidified chamber for IHC
SuperScript VILOInvitrogen11755050
SYBR Green Master mixApplied BiosystemsA46109
Tintoretriever pressure cookerBioSBBSB7008
Tissue cassettesFisher scientific 50-197-8152Research Products International Corp Tissue Processing Cassette, Pink, 500 per Case
XylenePharmco3990000001 Gallon

Riferimenti

  1. Hracs L, Windsor JW, Gorospe J, et al. Global evolution of inflammatory bowel disease across epidemiologic stages. Nature. 2025;642(8067):458-466.
  2. Dahlhamer JM, Zammitti EP, Ward BW, Wheaton AG, Croft JB. Prevalence of Inflammatory Bowel Disease Among Adults Aged ≥18 Years - United States, 2015. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2016;65(42):1166-1169.
  3. Ng SC, Shi HY, Hamidi N, et al. Worldwide incidence and prevalence of inflammatory bowel disease in the 21st century: a systematic review of population-based studies. Lancet. 2017;390(10114):2769-2778.
  4. Caron B, Honap S, Peyrin-Biroulet L. Epidemiology of Inflammatory Bowel Disease across the Ages in the Era of Advanced Therapies. J Crohns Colitis. 2024;18(Supplement_2):ii3-ii15.
  5. Ye Y, Manne S, Treem WR, Bennett D. Prevalence of Inflammatory Bowel Disease in Pediatric and Adult Populations: Recent Estimates From Large National Databases in the United States, 2007-2016. Inflamm Bowel Dis. 2020;26(4):619-625.
  6. Rubtsov YP, Rasmussen JP, Chi EY, et al. Regulatory T cell-derived interleukin-10 limits inflammation at environmental interfaces. Immunity. 2008;28(4):546-558.
  7. Shouval DS, Biswas A, Goettel JA, et al. Interleukin-10 receptor signaling in innate immune cells regulates mucosal immune tolerance and anti-inflammatory macrophage function. Immunity. 2014;40(5):706-719.
  8. Glocker EO, Kotlarz D, Boztug K, et al. Inflammatory bowel disease and mutations affecting the interleukin-10 receptor. N Engl J Med. 2009;361(21):2033-2045.
  9. Sazonovs A, Stevens CR, Venkataraman GR, et al. Large-scale sequencing identifies multiple genes and rare variants associated with Crohn’s disease susceptibility. Nat Genet. 2022;54(9):1275-1283.
  10. Griffin H, Ceron-Gutierrez L, Gharahdaghi N, et al. Neutralizing Autoantibodies against Interleukin-10 in Inflammatory Bowel Disease. N Engl J Med. 2024;391(5):434-441.
  11. Kühn R, Löhler J, Rennick D, Rajewsky K, Müller W. Interleukin-10-deficient mice develop chronic enterocolitis. Cell. 1993;75(2):263-274.
  12. Berg DJ, Davidson N, Kühn R, et al. Enterocolitis and colon cancer in interleukin-10-deficient mice are associated with aberrant cytokine production and CD4(+) TH1-like responses. J Clin Invest. 1996;98(4):1010-1020.
  13. Mizoguchi A. Animal models of inflammatory bowel disease. Prog Mol Biol Transl Sci. 2012;105:263-320.
  14. Hart ML, Ericsson AC, Franklin CL. Differing Complex Microbiota Alter Disease Severity of the IL-10-/- Mouse Model of Inflammatory Bowel Disease. Front Microbiol. 2017;8:792.
  15. Keubler LM, Buettner M, Häger C, Bleich A. A Multihit Model: Colitis Lessons from the Interleukin-10-deficient Mouse. Inflamm Bowel Dis. 2015;21(8):1967-1975.
  16. Büchler G, Wos-Oxley ML, Smoczek A, et al. Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions. Inflamm Bowel Dis. 2012;18(5):943-954.
  17. Berg DJ, Zhang J, Weinstock JV, et al. Rapid development of colitis in NSAID-treated IL-10-deficient mice. Gastroenterology. 2002;123(5):1527-1542.
  18. Hale LP, Gottfried MR, Swidsinski A. Piroxicam treatment of IL-10-deficient mice enhances colonic epithelial apoptosis and mucosal exposure to intestinal bacteria. Inflamm Bowel Dis. 2005;11(12):1060-1069.
  19. Holgersen K, Kvist PH, Markholst H, Hansen AK, Holm TL. Characterization of enterocolitis in the piroxicam-accelerated interleukin-10 knock-out mouse--a model mimicking inflammatory bowel disease. J Crohns Colitis. 2014;8(2):147-160.
  20. B C, K B, V B, et al. Recommendations for euthanasia of experimental animals: Part 2. DGXT of the European Commission. Laboratory animals. 1997;31(1).
  21. Ellis JL, Yin C. Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish. J Vis Exp. 2017;(123):55630.
  22. Erben U, Loddenkemper C, Doerfel K, et al. A guide to histomorphological evaluation of intestinal inflammation in mouse models. Int J Clin Exp Pathol. 2014;7(8):4557-4576.
  23. Holgersen K, Kutlu B, Fox B, et al. High-resolution gene expression profiling using RNA sequencing in patients with inflammatory bowel disease and in mouse models of colitis. J Crohns Colitis. 2015;9(6):492-506.
  24. Ananthakrishnan AN, Adler J, Chachu KA, et al. AGA Clinical Practice Guideline on the Role of Biomarkers for the Management of Crohn’s Disease. Gastroenterology. 2023;165(6):1367-1399.
  25. Singh S, Ananthakrishnan AN, Nguyen NH, et al. AGA Clinical Practice Guideline on the Role of Biomarkers for the Management of Ulcerative Colitis. Gastroenterology. 2023;164(3):344-372.
  26. Sifuentes-Dominguez LF, Li H, Llano E, et al. SCGN deficiency results in colitis susceptibility. eLife. 2019;8:e49910.
  27. Sellon RK, Tonkonogy S, Schultz M, et al. Resident enteric bacteria are necessary for development of spontaneous colitis and immune system activation in interleukin-10-deficient mice. Infect Immun. 1998;66(11):5224-5231.
  28. Bábíčková J, Tóthová Ľ, Lengyelová E, et al. Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens. Inflammation. 2015;38(5):1996-2006.
  29. Wagnerova A, Babickova J, Liptak R, Vlkova B, Celec P, Gardlik R. Sex Differences in the Effect of Resveratrol on DSS-Induced Colitis in Mice. Gastroenterol Res Pract. 2017;2017:8051870.
  30. Maite CB, Roy M, Emilie V. The Effect of Sex-Specific Differences on IL-10-/- Mouse Colitis Phenotype and Microbiota. Int J Mol Sci. 2023;24(12):10364.
  31. Dokoshi T, Seidman JS, Cavagnero KJ, et al. Skin inflammation activates intestinal stromal fibroblasts and promotes colitis. J Clin Invest. 2021;131(21):e147614.
  32. Dokoshi T, Chen Y, Cavagnero KJ, et al. Dermal injury drives a skin-to-gut axis that disrupts the intestinal microbiome and intestinal immune homeostasis in mice. Nat Commun. 2024;15(1):3009.
  33. Allard C, Zizzari P, Quarta C, Cota D. Food intake and body weight in rodent studies: the devil is in the details. Nat Metab. 2022;4(11):1424-1426.
  34. M W, R L, S S, et al. Combination therapy using intestinal organoids and their extracellular vesicles for inflammatory bowel disease complicated with osteoporosis. Journal of Orthopedic Translation. 2025;53.
  35. Y G, H Z, Y Y, et al. Injectable body temperature-responsive hydrogel for encephalitis treatment via sustained release of nano-anti-inflammatory agents. Biomaterials translational. 2024;5(3).

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