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Articolo di ricerca
L'applicazione di vermiculite e Azospirillum brasilense, in particolare in combinazione, migliorò la crescita del grano, la resa dei cereali, il tasso fotosintetico, la conduttanza stomatica e il contenuto di clorofilla, riducendo al contempo la perdita di elettroliti e l'accumulo di Cd nei tessuti vegetali sotto stress di cadmio (Cd).
La contaminazione da cadmio (Cd) nei suoli agricoli rappresenta una seria minaccia per la produttività delle colture e la salute umana. Questo studio ha valutato il potenziale della vermiculite e del batterio promotore della crescita vegetale Azospirillum brasilense per alleviare la tossicità da Cd nel grano (Triticum aestivum L.). È stato condotto un esperimento con marijuana con tre replicazioni e nove trattamenti: T0 (Controllo), T1 (Cd 100 mg/kg), T2 (Cd 100 mg/kg + Vermiculite), T3 (Cd 100 mg/kg + A. brasilense), T4 (Cd 100 mg/kg + Vermiculite + A. brasilense), T5 (Cd 200 mg/kg), T6 (Cd 200 mg/kg + Vermiculite), T7 (Cd 200 mg/kg + A. brasilense), e T8 (Cd 200 mg/kg + Vermiculite + A. brasilense). Livelli più alti di Cd causavano un'inibizione della crescita più grave nel grano. Tuttavia, i trattamenti con vermiculite e A. brasilense migliorarono significativamente la crescita delle piante, ridussero l'accumulo di Cd nei tessuti vegetali e aumentarono le attività enzimatiche antiossidanti (SOD, CAT). In particolare, l'applicazione combinata di vermiculite e A. brasilense (T4 e T8) ha mostrato la mitigazione più efficace dello stress da Cd. Con 100 mg/kg Cd (T4), le piante di grano hanno mostrato un aumento del 10,67% in altezza, una lunghezza dello spicco del 10,21% più lunga e una resa dei cereali superiore del 19,87% rispetto al trattamento solo con Cd. Sotto uno stress Cd (T8) di 200 mg/kg, la stessa combinazione ha portato a un aumento del 44,83% dell'altezza dell'impianto, un miglioramento della lunghezza dello spike del 17,63% e un incremento della resa del 44,83% rispetto alle piante non trattate sottoposte a stress Cd (T5). Questi risultati dimostrano che l'uso sinergico di Vermiculite e Azospirillum brasilense aumenta la tolleranza del grano alla tossicità da Cd. La loro applicazione combinata migliora i parametri di crescita, le caratteristiche fisiologiche e la resa in condizioni di stress da Cd, offrendo un approccio ecologico per la bonifica dei suoli contaminati da CD e il mantenimento della produttività del grano.
Il grano (Triticum aestivum L.) è una coltura alimentare di base fondamentale che fornisce la principale fonte di energia per milioni dipersone. Come principale fonte alimentare, viene coltivata su vaste aree di terreno agricolo, in particolare nelle regioni temperate. La versatilità, il valore nutrizionale e l'adattabilità al vario ambiente del grano lo rendono una pietra angolare della sicurezzaalimentare 2. Tuttavia, il potenziale di resa del grano è spesso compromesso da diversi fattori di stress abiotici e biotici, causando perdite sostanziali di produttività. Una delle sfide urgenti che la produzione di grano deve affrontare oggi è la contaminazione del suolo con metalli pesanti, in particolare il cadmio (Cd)2,3. Il cadmio, un metallo pesante tossico, può essere introdotto nei terreni agricoli attraverso attività industriali, fertilizzanti fosfatici e irrigazione con acqua contaminata. Una volta nel terreno, il Cd viene facilmente assorbito dalle piante di grano, dove si accumula in vari tessuti, causando stress ossidativo, compromissioni delle funzioni fisiologiche e riduzione dellacrescita 3. Gli effetti tossici del Cd sul grano non solo riducono la resa agricola, ma causano anche problemi di salute umana attraverso il consumo di cereali contaminati. La tossicità dei metalli pesanti e altri fattori, come carenze di nutrienti, scarsa struttura del suolo, stress da siccità e pratiche agronomiche subottimali, contribuiscono alla bassa resa delgrano 4. La minaccia costante del cambiamento climatico aggrava queste sfide, rendendo sempre più difficile raggiungere una produzione sostenibiledi grano 5.
La vermiculite è un minerale naturale che ha attirato notevole attenzione in agricoltura per le sue proprietà uniche e i benefici come emendamento del suolo. Composta principalmente da silicato di magnesio-alluminio-ferro idratato, la vermiculite è nota per la sua capacità di espandersi quando riscaldata, risultando in un materiale leggero e altamenteporoso 6. Questa forma espansa di vermiculite mostra eccellenti capacità di ritenzione idrica e aerazione, rendendola un mezzo ideale per migliorare la struttura del suolo e favorire la crescita delle piante. Nelle applicazioni agricole, la vermiculite è un componente critico nei mix di suolo, in particolare in aree con scarsa qualità del suolo o in condizioni che richiedono una maggiore gestione dell'acqua edei nutrienti 7. La vermiculite ha la capacità di trattenere l'acqua nel suolo e mantenere l'umidità del suolo sotto stress idrico. È preziosa per prevenire l'allagamento e garantire un apporto costante di umidità alle radici delle piante. Inoltre, l'elevata capacità di scambio cationico (CEC) della vermiculite le consente di fornire i nutrienti, come potassio (K), calcio (Ca) e magnesio (Mg), disponibili per le piante nel tempo 8. Il ruolo della vermiculite nella mitigazione dei fattori di stress ambientale, come la contaminazione da metalli pesanti, è di particolare interesse nell'agricolturasostenibile 6. Grazie alla sua elevata superficie e alla sua affinità per i metalli pesanti, la vermiculite può adsorbere e immobilizzare elementi tossici come il cadmio (Cd) nel suolo, riducendone la biodisponibilità per le piante. Questo non solo protegge le colture dagli effetti negativi negativi della tossicità dei metalli, ma aiuta anche a mantenere la salute del suolo rimuovendo le sostanzenocive 6,9.
Azospirillum brasilense è un noto rizobatterio promotore della crescita delle piante (PGPR) che ha suscitato notevole interesse nella ricerca e nella pratica agricola grazie alla sua capacità di favorire la crescita e la resilienza delle piante in varie condizionidi stress 10. Originariamente isolato dalla rizosfera delle graminacee tropicali, A. brasilense è un batterio libero che colonizza le radici di una vasta gamma di colture, incluso il grano (Triticum aestivum L.), dove stabilisce una relazione benefica con la piantaospite 11. I meccanismi principali con cui A. brasilense favorisce la crescita delle colture sono fissando il N2 atmosferico (azoto), che può facilmente assorbire e utilizzare per le funzioni della pianta. Questa fissazione biologica dell'azoto riduce i requisiti dei fertilizzanti sintetici per la crescita delle piante, contribuendo a pratiche agricole più sostenibili 1,11. A. brasilense è nota per la produzione di acido indolo-3-acetico (IAA), che è un fitormone e può migliorare lo sviluppo radicale; Questo sviluppo radicale può migliorare l'assorbimento dei nutrienti. Oltre ai suoi effetti favorevoli alla crescita, A. brasilense può anche aumentare la tolleranza delle piante alla tossicità dei metallipesanti 12. Nei suoli contaminati, A. brasilense può modulare le risposte fisiologiche e biochimiche della pianta, riducendo l'assorbimento e l'accumulo di metalli come il cadmio (Cd). Il batterio riesce a raggiungere questo attraverso diversi meccanismi, come alterare i modelli di essudazione radicale, aumentare l'attività enzimatica antiossidante e produrre sostanze polimeriche extracellulari in grado di legarsi ai metalli pesanti, riducendone così la disponibilità allepiante 13. Il potenziale di A. brasilense di mitigare la tossicità da Cd nel grano è particolarmente significativo nel contesto dell'agricoltura moderna, dove la contaminazione del suolo con metalli pesanti rappresenta una minaccia crescente per la produttività delle colture e la sicurezza alimentare. Sfruttando le capacità naturali di A. brasilense, gli agricoltori possono migliorare la salute e la resa delle colture di grano anche in ambienti difficili, contribuendo alla sicurezza alimentare e alla sostenibilitàambientale 11,13,14.
La crescente sfida della contaminazione dal cadmio (Cd) nei suoli agricoli rappresenta una minaccia significativa per la sostenibilità della produzione agricola, in particolare nelle colture di base come ilgrano 3. Il CD è un metallo pesante tossico che non solo ostacola la crescita delle piante, ma può anche accumularsi nelle parti commestibili delle colture. Poiché le pratiche agricole affrontano sempre più le doppie pressioni dell'inquinamento ambientale e della necessità di una maggiore produttività, sono necessarie strategie innovative e sostenibili per mitigare l'impatto dei metalli pesanti come il Cd sulla salute dellecolture 15. L'applicazione combinata di Vermiculite e Azospirillum brasilense offre un approccio promettente per affrontare la tossicità da Cd nelgrano 7,9,14,16. La vermiculite, grazie alla sua elevata capacità di scambio cationico e alle proprietà di ritenzione idrica, migliora la struttura del suolo, aumenta la disponibilità di nutrienti e riduce la mobilità di metalli come il Cd nelsuolo 8. D'altra parte, A. brasilense, un rizobatterio che favorisce la crescita delle piante, aumenta la tolleranza delle piante alla tossicità dei metalli pesanti modulando la fisiologia radicale, produciendo fitormoni e riducendo la biodisponibilità di metalli tossici attraverso vari percorsibiochimici 14. L'integrazione di vermiculite e A. brasilense in un'unica strategia di gestione sfrutta i punti di forza di entrambi i componenti, creando un effetto sinergico più efficace dell'uso di entrambi i componentida soli 17. La capacità della vermiculite di immobilizzare il Cd nel suolo completa il ruolo di A. brasilense nel rafforzare i meccanismi di difesa delle piante contro lo stress da Cd. Inoltre, la vermiculite può creare un ambiente più favorevole alla prosperità di A. brasilense migliorando l'aerazione del suolo e i livelli di umidità, fondamentali per la sopravvivenza e l'attività del batterio nella rizosfera11,14. Tuttavia, l'effetto combinato di vermiculite e A. brasilense sulla crescita del grano e sulle prestazioni fisiologiche sotto stress Cd non è stato studiato in modo sistematico.
La necessità di questa applicazione combinata nasce dai limiti degli approcci convenzionali alla gestione della tossicità da Cd. I metodi tradizionali, come l'uso di modifiche chimiche, spesso offrono solo sollievo temporaneo e possono avere conseguenze ambientali negative. L'uso combinato di vermiculite e A. brasilense può offrire una soluzione più sostenibile che non solo mitiga la tossicità da Cd, ma può anche migliorare la salute generale del suolo e la crescita delle piante, portando a un miglioramento della resa, della fisiologia e della qualità del grano. L'applicazione combinata di vermiculite e A. brasilense sulla crescita del grano e sulle prestazioni fisiologiche sotto stress Cd non è stata sistematicamente studiata. Per colmare questa lacuna di conoscenza, il presente esperimento in vaso ha testato le seguenti ipotesi: (H₁) L'applicazione di vermiculite ridurrà l'accumulo di Cd nei tessuti di grano e migliorerà la crescita e la resa; (H₂) L'inoculazione di A. brasilense migliora le prestazioni fisiologiche (tasso fotosintetico, conduttanza stomatica, contenuto di clorofilla) e l'assorbimento dei nutrienti; e (H₃) L'applicazione combinata produrrà miglioramenti maggiori rispetto a entrambe le modifiche da sole, associate a una maggiore colonizzazione radicolare batterica. Questo studio non pretende di fornire linee guida dirette per l'applicazione sul campo, poiché tali domande richiedono prove sul campo al di fuori dell'ambito di questo esperimento controllato.
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Tutte le linee guida e normative locali, nazionali e internazionali per l'uso delle piante in questo studio sono state rispettate. I reagenti e le attrezzature utilizzate sono elencati nella Tabella dei Materiali.
Disposizione sperimentale e materiale
Un esperimento con la marijuana è stato organizzato sul tetto dell'edificio del dipartimento di ingegneria agricola della Khwaja Fareed University of Engineering and Information Technology, Pakistan (28,42° N, 70,30° E) per indagare il ruolo della vermiculite e dell'Azospirillum brasilense nel mitigare la tossicità del cadmio (Cd) nel raccolto di grano durante la stagione invernale 2023–2024. Per questo esperimento è stato utilizzato un disegno completamente randomizzato (CRD), con tre repliche. Una varietà di grano approvata di "Dilkash-20" è stata ottenuta dalla Fattoria di Ricerca Adottiva Rahim Yar Khan, adatta alla regione locale. È stato utilizzato un vaso di dimensione 1 x 1 x 1 piede (30,48 cm × 30,48 cm × 30,48 cm), con 12 kg di terreno. La sterilizzazione dei semi è stata effettuata prima dell'esperimento nel laboratorio di agronomia con il 70% di etanolo. I semi sono stati piantati il 10novembre 2023. Sono stati messi 8 semi di grano in ogni vaso e 4 piante sono state mantenute nella fase di coltivazione. La vermiculite veniva ottenuta dal mercato locale e applicata durante l'aggiunta del terreno a una quantità di 150 g/kg di terreno. Azospirillum brasilense è stato ottenuto presso il Government College University Lahore (GCUL), Lahore, Pakistan. Azospirillum brasilense è stato applicato con l'inoculazione dei semi nel raccolto di grano secondo la procedura standard riportata da Zaheer et al.17. L'esperimento è stato composto da 9 trattamenti (T0 = Controllo (Nessuna modifica del suolo, nessuna tossicità da Cd), T1 = Tossicità da CD 100 mg/kg di terreno, T2 = Cd 100 mg/kg di terreno + Vermiculite, T3 = Cd 100 mg/kg di terreno + A. brasilense, T4 = Cd 100 mg/kg di terreno + Vermiculite + A. brasilense, T5 = Tossicità Cd 200 mg/kg di terreno, T6 = Cd 200 mg/kg di terreno + Vermiculite, T7 = Cd 200 mg/kg di terreno + A. brasilense, T8 = Cd 200 mg/kg di terreno + Vermiculite + A. brasilense). La temperatura media mensile in °C e l'umidità in % nel sito sperimentale sono mostrate nella Tabella 1. Prima dell'inizio dell'esperimento, è stata effettuata un'analisi del suolo e le proprietà del suolo sono mostrate nella Tabella 2. L'irrigazione è stata applicata secondo le esigenze nelle fasi di lavorazione, stivatura, antesi e riempimento del grano, e i fertilizzanti sono stati applicati uniformemente come raccomandato. L'irrigazione veniva applicata manualmente con l'uso di un barattolo d'acqua e manteneva il 70% dell'umidità del suolo in ogni vaso, senza stress da siccità. I fertilizzanti sono stati applicati secondo le raccomandazioni del dipartimento dell'agricoltura (120-80-60 kg NPK ha-1). I fertilizzanti venivano calcolati in base alla dimensione di ogni vaso. Dosi complete di P e K e mezza dose di N sono state applicate al momento della semina, mentre la restante mezza dose di N è stata applicata alla fase di tillering. Un campionamento distruttivo per le misurazioni della lunghezza delle radici e dei germogli (30 giorni dopo la semina) è stato effettuato su vasi separati destinati al raccolto nelle prime fasi iniziali; Questi vasi non venivano utilizzati per le misurazioni finali della resa, quindi il campionamento distruttivo precoce non influenzava i dati successivi sulla resa. Una timeline schematica dell'esperimento è la seguente: Giorno 0 (preparazione del suolo, spiking del Cd, miscelazione della vermiculite, inoculazione dei semi, semina), Giorno 10–30 (campionamento radicale per qPCR), Giorno 30 (lunghezza della radice e del germoglio), Giorno 85 (antesi: misurazioni fisiologiche) e Giorno 120 (raccolta: parametri di resa). I campioni di piante sono stati raccolti in tre momenti temporali. A 10, 20 e 30 giorni dopo la semina (DAS), le radici venivano raccolte da vasi separati. A 30 DAS, vasi separati venivano raccolti in modo distruttivo per la lunghezza delle radici e dei germogli. A 85 DAS (antesi), i parametri fisiologici sono stati misurati in modo non distruttivo. A 120 DAS, sono stati registrati i parametri finali di resa. I vasi utilizzati per il campionamento distruttivo precoce (10–30 DAS) non venivano utilizzati per le misurazioni della resa.
Il cadmio veniva applicato come cloruro di cadmio (CdCl₂•2,5H₂O, grado analitico, ≥98% di purezza). Le quantità richieste per concentrazioni target di 100 mg Cd kg⁻1 suolo e 200 mg Cd kg⁻1 sono state calcolate in base al peso secco del suolo (12 kg per vaso). Il CdCl₂ è stato sciolto in 500 mL di acqua deionizzata per vaso e mescolato accuratamente con il terreno utilizzando un miscelatore meccanico per 15 minuti per garantire una distribuzione omogenea. Dopo la miscelazione, il terreno puntato veniva posto in vasi rivestiti di plastica e lasciato in equilibrio per 14 giorni a temperatura ambiente (25 ± 2 °C) con miscelazioni periodiche ogni 3 giorni per stabilizzare la speciazione Cd e permettere l'invecchiamento. L'umidità del suolo è stata mantenuta al 70% della capacità del campo durante il periodo di equilibrio. Dopo l'equilibrio, campioni rappresentativi di suolo (10 g per vaso) sono stati raccolti, asciugati all'aria, digeriti con HNO₃/HClO₄ (4:1, v/v) e analizzati per la concentrazione totale di Cd utilizzando uno spettrofotometro di assorbimento atomico per verificare i livelli effettivi di Cd. Le concentrazioni di Cd misurate sono state 98,4 ± 3,2 mg kg⁻1 per il trattamento a 100 mg kg⁻1 e 197,6 ± 5,1 mg kg⁻1 per il trattamento a 200 mg kg⁻1 , confermando che i livelli target erano stati raggiunti. Le proprietà fisicochimiche e il contenuto di metalli pesanti della vermicolite utilizzata in questo studio sono mostrate nella Tabella 3.
| Mese | Temperatura (°C) | Umidità (%) |
| Novembre 2023 | 28 | 56 |
| Dicembre 2023 | 18 | 62 |
| Gennaio 2024 | 17 | 63 |
| Febbraio 2024 | 18 | 32 |
| Marzo 2024 | 21 | 25 |
| Aprile 2024 | 24 | 20 |
Tabella 1: Temperatura media e umidità del sito sperimentale durante il periodo 2023–2024.
| Parametri | Valori (2023-24) |
| Materia organica | 0.56% |
| pH | 7.42 |
| EC | 227 μS/cm |
| T.S.S. | 0.54% |
| Available-P | 5,21 ppm |
| Disponibili-K | 119 ppm |
| Percentuale di saturazione | 34 |
| Separazioni del suolo: Sabbia, limo, argilla (%) | 36%, 40 %, 24 % |
Tabella 2: Proprietà del suolo utilizzato per l'esperimento prima della semina della coltura.
| Proprietà | Valore | Metallo | Concentrazione (mg kg⁻¹) |
| Grado | Grado orticolo | Cadmio (Cd) | < 0,01 (sotto il limite di rilevamento) |
| Dimensione delle particelle | 2-4 mm | Lead (PB) | 2.1 |
| pH (1:5 in H₂O) | 7.2 | Rame (Cu) | 1.8 |
| Capacità di scambio cationico (CEC) | 85,4 cmolc kg⁻¹ | Zinco (Zn) | 5.3 |
| Capacità di ritenzione dell'acqua (WHC) | 450% (a settimana) | - | - |
| Densità globale | 0,12 g cm-3 | - | - |
| Tasso di candidatura | 150 g kg⁻¹ di terreno (15% p/w) | - | - |
| Quantità per vaso (12 kg di terreno) | 1,8 kg | - | - |
Tabella 3: Proprietà fisicochimiche e contenuto di metalli pesanti della vermicolite utilizzata in questo studio.
Tratti studiati
Tutti i parametri relativi alla crescita delle piante, come altezza della pianta, lunghezza della spina, numero di spiche per punta, grani per spina, peso di 1000 grani e resa per pianta, venivano registrati manualmente con l'uso di una barra di misura e un bilancio di peso tramite una procedura standard. Analisi biochimiche (determinazione delle attività enzimatiche antiossidanti) e analisi fisiologiche (tasso fotosintetico, conduttanza stomatica, contenuto di clorofilla, perdita di elettroliti (EL), velocità di crescita delle colture (CGR) e indice dell'area fogliare (LAI)) sono state effettuate allo stadio dell'antesi dopo 85 giorni di semina. La lunghezza delle radici e dei germogli è stata nota dopo 30 giorni di crescita delle piante di grano, quando le piante sono state rimosse per mantenere 4 piante nel vaso dopo 20 giorni di semina. Un analizzatore di gas a infrarossi (Cl-340) e un misuratore di clorofilla (CL-1) sono stati utilizzati per osservare rispettivamente la velocità fotosintetica, la conduttanza stomatica e il contenuto di clorofilla. La perdita di elettroliti (EL) è stata misurata con l'equazione riportata da Mussell eStaples 18 secondo la procedura standard riportata da Zaheer et al.14. EL è stato calcolato come: EL (%) = (EC iniziale / EC finale) × 100, dove l'EC iniziale è la conducibilità elettrica misurata dopo 24 ore di incubazione a 25 °C, e la CE finale è la conducibilità misurata dopo l'autoclav dei campioni a 121 °C per 20 minuti.
L'azoto organico disciolto (DOC), il carbonio organico disciolto (DOC) e il carbonio organico del suolo (SOC) sono stati misurati con la procedurastandard 19. LAI e CGR sono stati rilevati secondo la procedura20. È stata notata l'acquisizione di N, P e K da parte dell'impianto di grano, come riportato nella procedura descritta dal precedenterapporto 21.
Analisi statistica
Tutti i dati per questa ricerca sono stati raccolti da tre repliche, compilati e mediati. I dati sono stati analizzati statisticamente con l'uso di Statistic 8.1 e Microsoft Excel 2010. I dati sono stati analizzati utilizzando ANOVA unidirezionale seguita dal test di Fisher per la Differenza Minima Significativa (LSD) a p ≤ 0,05 per la separazione media. Diverse lettere che mostrano i dati/risultati mostrano la differenza statistica tra ogni trattamento.
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L'altezza della pianta (PH) è stata significativamente influenzata dalle modifiche del suolo in tutti i trattamenti studiati (Tabella 4). Il pH più alto è stato osservato in T0 (199,44 cm), quando non c'era emendamento del suolo né tossicità da Cd, seguito da T4 (98,44 cm) quando la tossicità da Cd era di 100 mg/kg di terreno con l'applicazione di vermiculite e A. brasilense. Il pH più basso (82,37 cm) è stato riscontrato nel T5 quando c'erano 200 mg/kg di tossi...
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La tossicità da CD ridusse significativamente tutti i parametri misurati di crescita e resa nelgrano 22. Questa soppressione della crescita può essere attribuita allo stress ossidativo indotto dal Cd, che interrompe la divisione e l'allungamento cellulare, compromette l'assorbimento dei nutrienti e riduce l'efficienza fotosintetica. Analogamente, il numero di spigole per picca, i cereali per picca, il peso dei grani e la resa per pianta sono diminuiti significativ...
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Gli autori dichiarano di non avere interessi in competizione. Durante la preparazione di questo manoscritto, l'autore o gli autori hanno utilizzato ChatGPT e Grammarly per migliorare la lingua tecnica e inglese dell'articolo. Dopo aver utilizzato questo strumento/servizio, l'autore o gli autori hanno revisionato e modificato il contenuto secondo necessità e si assumono la piena responsabilità per il contenuto della pubblicazione.
Gli autori riconoscono il sostegno finanziario fornito dal Decanship of Scientific Research, Vice Presidency for Graduate Studies and Scientific Research della King Faisal University, Arabia Saudita, per questa ricerca (Grant n. KFU263053).
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Spectrofotometro ad assorbimento atomico (AAS) | PerkinElmer, USA | AAnalyst 800 | Verifica della concentrazione di Cd nel suolo |
| Azospirillum brasilense | Government College University Lahore (GCUL), Pakistan | Ceppi disponibili dalla collezione di colture GCUL | Inoculazione dei semi |
| Cloruro di cadmio (CdCl2·2.5H2O) | Merck, Germania | CAS No. 7790-78-5 | Induzione dello stress da Cd |
| Fotometro per clorofilla | Non specificato | CL-1 | Misurazione del contenuto di clorofilla |
| DNeasy PowerSoil Kit | QIAGEN, Hilden, Germania | N. cat. 12888-100 | Estrazione del DNA dalle radici |
| Excel 2010 | Microsoft, USA | Versione 14.0 | Compilazione dati e statistiche di base |
| Analizzatore di gas a infrarossi (IRGA) | Non specificato | CI-340 | Tasso fotosintetico e conduzione stomatica |
| Primers specifici per nifH | Sintesi personalizzata | Sequenze fornite nel testo | Amplificazione qPCR |
| Ninidrina | Sigma-Aldrich, USA | CAS No. 485-47-2 | Determinazione del contenuto di prolina |
| Sistema QuantStudio 5 Real-Time PCR | Applied Biosystems, USA | QuantStudio 5 | Analisi qPCR |
| Spettrofotometro | Non specificato | Non specificato | Misurazione del contenuto di prolina |
| Statistik 8.1 | Analytical Software, USA | Versione 8.1 | Analisi statistica (ANOVA, LSD) |
| SYBR Green Master Mix | Applied Biosystems, USA | N. cat. 4309155 | Rilevamento qPCR |
| Vermiculite (grado orticolo) | Mercato locale, Rahim Yar Khan, Pakistan | Non applicabile | Modifica del suolo |
| Varietà di grano "Dilkash-20" | Adaptive Research Farm, Rahim Yar Khan, Pakistan | Varietà locale approvata | Materiale vegetale |