Principi di Site-Specific ricombinasi (SSR) Tecnologia

Sommario

L'avvento di un determinato sito ricombinasi (SSR), la tecnologia e la Cre / lox sistema ha portato a numerosi progressi nel campo della biologia molecolare, ed ha dimostrato di essere un prezioso strumento per valutare la funzione dei geni negli animali transgenici. Questa intervista discute il meccanismo di ricombinazione site specific di ciclizzazione ricombinasi (Cre) e come l'utilizzo di questo enzima ha portato allo sviluppo di mutagenesi condizionale, che ha vantaggi significativi rispetto bussare tradizionali strategie.

Abstract

Site-specific ricombinasi (SSR), la tecnologia consente la manipolazione della struttura dei geni per esplorare la funzione del gene ed è diventato uno strumento integrante della biologia molecolare. Site-specific ricombinasi sono proteine ​​che si legano a sequenze diverse di DNA bersaglio. Il Cre / lox sistema è stato descritto nel batteriofagi durante il 1980. Cre ricombinasi è una topoisomerasi di tipo I che catalizza site-specific ricombinazione del DNA tra due loxP (locus di X-over P1) siti. Il Cre / lox sistema non richiede alcuna cofattori. Sequenze loxP contenere distinti siti di legame per ricombinasi Cre che circondano una sequenza direzionale centrale, in cui la ricombinazione e riassetto avviene. Quando le cellule contengono siti loxP ed esprimono la ricombinasi Cre, si verifica un evento di ricombinazione. DNA a doppia elica viene tagliata in entrambi i siti loxP dalla ricombinasi Cre, riordinati, e legato ("forbici e colla"). Prodotti della manifestazione ricombinazione dipendono dalla orientazione relativa delle sequenze asimmetriche.

La tecnologia SSR è spesso utilizzata come uno strumento per esplorare la funzione del gene. Ecco il gene di interesse è fiancheggiata da Cre bersaglio siti loxP ("floxed"). Gli animali vengono poi incrociate con gli animali che esprimono la ricombinasi Cre sotto il controllo di un promotore tessuto-specifica. Nei tessuti che esprimono la ricombinasi Cre si lega a sequenze target e accise il gene floxed. Delezione del gene controllato permette l'indagine della funzione del gene nei tessuti specifici e in momenti distinti. Analisi della funzione del gene che impiegano la tecnologia SSR --- mutagenesi condizionale - ha notevoli vantaggi rispetto ai tradizionali knock-out in cui delezione del gene è spesso letale.