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Articolo di ricerca
* These authors contributed equally
β-sitosterolo alleviava la BPCO e potenziava l'efficacia del desametasone, con il recettore dei glucocorticoidi che mediava questo effetto. Inoltre, il β-sitosterolo ha ridotto l'infiammazione, lo stress ossidativo e la senescenza cellulare sia nelle cellule epiteliali bronchiali stimolate dalla CSE sia nei topi BPCO indotti dal fumo di sigaretta.
La broncopneumopatia cronica ostruttiva (BPCO) è un disturbo respiratorio diffuso caratterizzato da infiammazione persistente, stress ossidativo e progressivo declino della funzione polmonare. Il potenziale terapeutico del β-sitosterolo nella BPCO rimane poco chiaro. Questo studio mirava a indagare gli effetti protettivi del β-sitosterolo contro la BPCO e a chiarirne il meccanismo sottostante. Lo screening del database ha identificato il recettore dei glucocorticoidi (GR) come potenziale bersaglio del β-sitosterolo. Sono stati stabiliti un modello murino per BPCO indotto dal fumo di sigaretta e un modello di cellule BEAS-2B stimolato con estratto di fumo di sigaretta (CSE). Funzionalità polmonare, marcatori correlati alle lesioni polmonari, infiammazione, stress ossidativo e senescenza cellulare sono stati valutati utilizzando (RT-qPCR), test fluorescenti DCFH-DA e kit di rilevamento della senescenza. Sono stati inoltre valutati gli effetti del β-sitosterolo da solo o in combinazione con desametasone (DEX). β-sitosterolo ha migliorato significativamente la funzione polmonare, ha normalizzato i marcatori correlati al danno polmonare e ha attenuato infiammazione, stress ossidativo e senescenza cellulare sia nelle cellule BEAS-2B stimolate dalla CSE sia nei topi esposti al fumo di sigaretta. Questi effetti protettivi erano accompagnati da un aumento dell'espressione della GR. Inoltre, il β-sitosterolo ha aumentato la reattività alla DEX e il trattamento combinato con β-sitosterolo e DEX ha prodotto miglioramenti maggiori nella funzione polmonare, nei marcatori di lesione polmonare, nell'infiammazione, nei livelli di specie reattive dell'ossigeno e nella senescenza cellulare rispetto al trattamento DEX da solo. Collettivamente, questi risultati suggeriscono che il β-sitosterolo allevia i cambiamenti patologici associati alla BPCO, almeno in parte, regolando all'aumento l'espressione della GR e aumentando l'efficacia terapeutica della DEX, evidenziandone il potenziale come strategia adiuvante per il trattamento della BPCO.
La broncopneumopatia cronica ostruttiva (BPCO) è una malattia respiratoria progressiva caratterizzata da infiammazione persistente delle vie aeree, danni alveolari e ostruzione irreversibile del flusso d'aria che compromette la funzione respiratoria e riduce la qualitàdella vita 1. La sua prevalenza aumenta significativamente con l'età e il rischio per le persone di sessantacinque anni e oltre è circa cinque volte superiore a quello di chi ha meno diquaranta2 anni. Questa tendenza demografica è associata a un aumento dell'incidenza delle malattie, della mortalità e delladisabilità 3. Le proiezioni epidemiologiche indicano che entro il 2030 la BPCO potrebbe diventare la quarta causa di morte a livello mondiale, rappresentando circa il 5% di tutti idecessi (4,5,6). Attualmente, i fattori di rischio identificati includono suscettibilità genetica, displasia polmonare, esposizione a particelle, bronchite cronica e infezionerespiratoria.
Tra i fattori di rischio, il fumo di sigaretta è il fattore patogeno più importante dellaBPCO 8. Contiene migliaia di sostanze chimiche che possono causare danni epiteliali bronchiali, favorire l'infiltrazione delle cellule infiammatorie e portare a un rimodellamento del tessutopolmonare 9. L'esposizione a lungo termine può indurre lesioni epiteliali persistenti e irreversibili, favorire il rilascio di un gran numero di chemochine pro-infiammatorie, aumentare significativamente la produzione (ROS) e indurre apoptosicellulare 10. Molti studi hanno dimostrato che i livelli aumentati di chemiocine pro-infiammatorie come l'interleucina-8 (IL-8) e il fattore di necrosi tumorale α (TNF-α), insieme a un'eccessiva produzione di ROS e senescenza cellulare, sono strettamente correlati alla gravità dellaBPCO 11,12. Questo evidenzia la necessità di agenti che possano modulare efficacemente e in sicurezza questi fattori patogeni chiave per esercitare effetti protettivi e terapeutici nella BPCO.
I fitosteroli sono composti bioattivi naturali presenti ubiquitariamente nelle membrane cellulari delle piante. Tra questi, il β-sitosterolo è il più abbondante ed è ampiamente distribuito in alimenti vegetali ricchi di lipidi come verdure, frutta secca, semi e olio d'oliva 13,14,15,16. Gli studi hanno confermato che la somministrazione di β-sitosterolo a dosi fino a 1000 mg/kg in ratti e topi non è associata a citotossicità ogenotossicità 17. Inoltre, la ricerca ha dimostrato che il β-sitosterolo presenta proprietà antiossidanti attraverso i suoi effetti sugli enzimi antiossidanti e sui recettori degli estrogeniumani 18.
β-sitosterolo mostra un ampio spettro di attività farmacologiche, tra cuiantinfiammatori 19, antipiretici20,analgesici 21 e effetti antidiabetici13. Ha inoltre mostrato potenziale terapeutico in vari modelli di patologia, come la colite e l'infiammazioneintestinale 22, e possiede proprietà anti-aterosclerotiche23 eimmunomodulatrici 24. Inoltre, ha un profilo di sicurezza favorevole. Date queste caratteristiche, il β-sitosterolo ha suscitato notevole interesse come potenziale candidato farmaco. Tuttavia, il suo ruolo preciso e i meccanismi sottostanti nella BPCO rimangono in gran parte poco chiari.
Pertanto, il presente studio ha mirato a indagare i potenziali effetti terapeutici e i meccanismi sottostanti del β-sitosterolo nella BPCO. In particolare, è stato utilizzato un modello di lesione delle cellule BEAS-2B indotto da estratto di sigaretta (CSE) per valutare se il β-sitosterolo potesse alleviare efficacemente i danni cellulari mediati dalla CSE, identificando così una nuova molecola candidata per strategie terapeutiche per la BPCO.
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Lo studio è stato condotto in conformità alle linee guida di Farmacologia Clinica e Tossicologia di Base e Clinica per studi sperimentalie clinici 25. Tutti i protocolli sperimentali sugli animali sono stati approvati dal Comitato Etico Animale del Secondo Ospedale Affiliato, Scuola di Medicina dell'Università di Zhejiang (Approvazione n. 20230102), e tutti gli esperimenti sono stati condotti secondo le linee guidatrici del Comitato Etico degli Animali. Lo studio è stato condotto in accordo con le linee guida ARRIVE.
Screening dei componenti chiave e dei target tramite farmacologia di rete
Componenti attivi di Fritillaria cirrhosa D. Don, Lonicera japonica Thunb., Glehnia littoralis F. Schmidt ex Miq., e Adenophora stricta Miq. sono stati recuperati dal Traditional Chinese Chinese Systems Pharmacology Database (TCMSP; consultato il 12 marzo 2024). I composti candidati sono stati selezionati secondo i seguenti criteri ADME: biodisponibilità orale (OB) ≥ 30%, somiglianza farmacologica (DL) ≥ 0,18 e permeabilità al Caco-2 ≥ −0,425. I composti che soddisfacevano tutti e tre i criteri sono stati mantenuti come ingredienti attivi candidati per analisi successive.
La struttura canonica SMILES, il sistema semplificato di input line system (SMILES) del β-sitosterolo, è stata ottenuta da PubChem (consultato il 18 marzo 2024) e importata in SwissTargetPrediction (consultato il 21 marzo 2024) per la previsione dei bersagli. Homo sapiens fu selezionato come specie bersaglio. I potenziali bersagli sono stati previsti sulla base della somiglianza strutturale 2D e 3D tra β-sitosterolo e liganti noti nel database. I bersagli previsti con probabilità superiore a 0 venivano mantenuti e le voci duplicate venivano rimossi.
I geni associati alla BPCO sono stati recuperati dal Therapeutic Target Database (TTD; consultato il 25 marzo 2024) e dal Comparative Toxicogenomics Database (CTD; consultato il 28 marzo 2024) utilizzando la parola chiave "chronic obstructive pulmonary disease". Dopo la rimozione dei geni duplicati, i geni associati alla BPCO sono stati intersecati con i bersagli previsti di β-sitosterolo per identificare i bersagli candidati potenzialmente coinvolti negli effetti terapeutici del β-sitosterolo contro la BPCO.
Aggancio molecolare tra β-sitosterolo e GR
La struttura tridimensionale del β-sitosterolo in formato SDF è stata recuperata dal database PubChem (consultato il 2 giugno 2026), mentre la struttura cristallina del recettore dei glucocorticoidi (GR) è stata ottenuta dal Research Collaboratory for Structural Bioinformatics Protein Data Bank (RCSB PDB; consultato il 3 giugno 2026). Dopo la preparazione standard delle strutture del ligando e dei recettori, è stato effettuato l'aggancio molecolare utilizzando la piattaforma online CB-Dock2 (consultato il 3 giugno 2026). I file preparati di ligando e recettore venivano caricati sulla piattaforma e i calcoli di attracco venivano effettuati utilizzando i parametri predefiniti.
Analisi di arricchimento funzionale dell'Ontologia Genica (GO) e Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG)
Tutti i geni target previsti del β-sitosterolo sono stati sottoposti ad analisi di arricchimento funzionale GO e arricchimento delle vie KEGG. Gli esiti di arricchimento, inclusi processi biologici significativamente arricchiti, componenti cellulari, funzioni molecolari e vie di segnalazione, sono stati selezionati e memorizzati nel File Supplementare 1 per un'analisi bioinformatica successiva.
Modellazione e raggruppamento animale
La dimensione del campione è stata fissata a sei animali per gruppo sulla base di uno studio precedente che ha effettuato un'analisi a priori della potenza utilizzando il software G*Power (α = 0,05, potenza = 0,80) e ha dimostrato che n = 6 era sufficiente per rilevare differenze biologicamente rilevanti in condizioni sperimentalicomparabili 26. I maschi C57BL/6 topi di età compresa tra 6 e 8 settimane (20 ± 2 g) sono stati assegnati casualmente a cinque gruppi: gruppo di controllo, gruppo modello BPCO, gruppo BPCO + desametasone (DEX), gruppo BPCO + β-sitosterolo e gruppo BPCO + DEX + β-sitosterolo. I topi sono stati ospitati in condizioni standard di laboratorio (25 °C, 12 ore di ciclo chiaro/buio) con libero accesso a cibo e acqua standard e sono stati lasciati ad acclimatarsi per 1 settimana prima della sperimentazione.
Per la costruzione del modello BPCO, i topi venivano posti in una camera di esposizione al fumo di sigaretta a corpo intero (63 cm × 55 cm × 45 cm) e esposti al fumo di sigaretta tradizionale per 12 settimane. Ogni sigaretta conteneva 10 mg di catrame, 0,9 mg di nicotina e 10 mg di monossido di carbonio. L'esposizione al fumo è stata effettuata due volte al giorno (5 giorni a settimana) alle 9:30 e alle 15:00, con il fumo generato da 18 sigarette consegnate nella camera per 90 minuti per27 sessioni.
Per valutare gli effetti terapeutici degli interventi, la somministrazione di farmaci è stata avviata dopo 8 settimane di esposizione al fumo di sigaretta e proseguita per le restanti 4 settimane. A partire dalla nona settimana, i topi dei rispettivi gruppi di trattamento ricevevano una somministrazione intragastrica giornaliera di DEX (1 mg/kg)28 o β-sitosterolo (50 mg/kg)29,30 1 ora prima dell'esposizione al fumo di sigaretta. Studi farmacocinetici precedenti hanno riportato una biodisponibilità orale di circa il 4% di β-sitosterolo neiroditori 31. Inoltre, diversi studi sui topi hanno impiegato dosi che vanno da 20 a 50 mg/kg 32. Pertanto, è stata selezionata una dose di 50 mg/kg per garantire un'adeguata esposizione sistemica, rimanendo però entro l'intervallo comunemente utilizzato negli studi preclinici.
I topi del gruppo di controllo sono stati esposti all'aria filtrata della stanza, mentre quelli dei gruppi modello e di trattamento hanno ricevuto un volume equivalente di soluzione salina normale come veicolo. Al termine del periodo sperimentale, i topi venivano profondamente anestetizzati con isoflurano fino alla perdita del riflesso pedale e eutanasiati tramite dissanguinazione tramite raccolta di sangue dell'aorta addominale. La cavità toracica fu immediatamente aperta e i tessuti polmonari bilaterali intatti furono accuratamente escossi, sciacquati con soluzione salina fosfatata (PBS) freddo e posato sul ghiaccio. Per la raccolta del liquido di lavaggio broncoalveolare (BALF), la trachea è stata cannulata e lavata con PBS freddo sterile, che è stato delicatamente instillato e ritirato ripetutamente per raccogliere il liquido di lavaggio. I tessuti polmonari e i campioni di BALF venivano mantenuti sul ghiaccio e successivamente processati per analisi a valle.
Coltura cellulare BEAS-2B
Le cellule bronchiali epiteliali umane BEAS-2B sono state mantenute nel Modified Eagle Medium/F12 (DMEM/F12) di Dulbecco, contenente il 10% di siero fetale bovino (FBS) e l'1% di penicillina/streptomicina sotto il 5% di CO₂ a 37 °C.
Preparazione del CSE ed esposizione alle cellule BEAS-2B
Le cellule BEAS-2B sono state lavate con soluzione salina tamponata fosfato e seminate in piastre da 24 pozzi in triplicato, a una densità di 5 × 104 cellule per pozzo. Dopo 12 ore di coltura, le cellule hanno raggiunto circa il 60% di confluenza e sono state esposte alla CSE. Il CSE è stato preparato di nuovo come descritto in precedenza, con modificheminori 33. Per un breve periodo, una sigaretta commerciale non filtrata veniva continuamente bruciata, e il fumo principale veniva fatto bollire in 10 mL di mezzo senza siero utilizzando una pompa a vuoto a portata costante di 1,05 L/min (circa −11 kPa a pressione negativa) per circa 5 minuti fino a quando la sigaretta non era completamente bruciata. La soluzione ottenuta veniva prima sottoposta a pre-filtrazione per rimuovere grandi impurità particelle, poi sterilizzata tramite un filtro microporoso sterile di 0,22 μm per eliminare le particelle residue; la soluzione di stock risultante fu definita come 100% CSE. Tutto il CSE appena preparato veniva utilizzato per il trattamento cellulare immediatamente dopo la filtrazione senza conservazione. Le cellule sono state stimolate con un mezzo contenente il 2,5% di CSE. Dopo 24 ore di trattamento CSE, i soprannatanti della coltura sono stati raccolti e conservati a -40 °C per un'analisisuccessiva 34.
Reazione a catena quantitativa della polimerasi in tempo reale (RT-qPCR)
L'RNA totale è stato estratto dalle cellule BEAS-2B utilizzando un kit di estrazione totale di RNA e trascritto inversamente in cDNA tramite un kit di trascrizione inversa secondo le istruzioni dei produttori. Successivamente, l'RT-qPCR è stato eseguito utilizzando un sistema di rilevamento PCR in tempo reale e un master mix qPCR basato su SYBR Green. Tutti gli esperimenti RT-qPCR sono stati condotti con tre repliche biologiche e tre repliche tecniche per campione per garantire l'affidabilità dei dati.
Ogni reazione qPCR è stata eseguita in un volume totale di 20 μL, contenente 10 μL di miscela master SYBR Green qPCR, 0,4 μL di primer diretto, 0,4 μL di primer inverso, 2 μL di modello di cDNA diluito e 7,2 μL di acqua priva di RNasi. Le condizioni di amplificazione erano le seguenti: denaturazione iniziale a 95 °C per 3 minuti, seguita da 40 cicli di denaturazione a 95 °C per 10 secondi e ricottura/estensione a 60 °C per 30 secondi. I livelli relativi di espressione genica sono stati calcolati utilizzando il metodo 2−ΔΔCt, con GAPDH che fungeva da gene di riferimento interno. Le sequenze di primer utilizzate in questo studio sono menzionate nella Tabella Supplementare 1.
Analisi delle specie reattive intracellulari dell'ossigeno (ROS)
La produzione intracellulare di ROS nelle cellule BEAS-2B è stata valutata utilizzando la sonda fluorogenica 2′,7′-diclorodiidrofluoresceina diacetato (DCFH-DA) e analizzata tramite citometria a flusso. Durante l'acquisizione della citometria in flusso, è stata applicata una strategia standard di gating di scatter diretta (FSC) e di dispersione laterale (SSC) per escludere detriti cellulari e selezionare cellule singole intatte. Per ogni campione sono stati acquisiti in totale 10.000 eventi cellulari validi. Le lunghezze d'onda di eccitazione ed emissione erano impostate rispettivamente a 488 nm e 525 nm. I dati citometrici di flusso sono stati successivamente analizzati per quantificare l'intensità di fluorescenza ROS intracellulare.
Determinazione del livello di malondialdeide (MDA)
Il contenuto intracellulare di MDA è stato misurato utilizzando un kit di analisi per perossidazione lipidica secondo le istruzioni del produttore. Per un breve periodo, le cellule BEAS-2B trattate venivano prelevate e lisate, quindi centrifugate a bassa temperatura per raccogliere il soprantantante. Successivamente è stata eseguita la reazione colorimetrica dell'acido tiobarbiturico (TBA) e l'assorbanza è stata misurata a 532 nm utilizzando un lettore di micropiastre. I livelli relativi di MDA sono stati calcolati secondo la curva standard.
Valutazione della senescenza cellulare
La senescenza cellulare è stata valutata utilizzando un saggio di rilevamento della senescenza basato sull'attività di β-galactosidasi (SA-β-gal) associata alla senescenza. Le cellule SA-β-gal-positive sono state quantificate tramite citometria a flusso. Parallelamente, i livelli di espressione dell'mRNA dei marcatori associati alla senescenza p53 e p21 sono stati determinati tramite RT-qPCR.
Saggio di proliferazione cellulare
La proliferazione cellulare è stata valutata utilizzando un kit di analisi di vitalità cellulare colorimetrica. L'assorbanza è stata misurata a 450 nm utilizzando un lettore di microplacche.
Analisi di knockdown della GR
La trasfezione cellulare è stata eseguita utilizzando un reagente di trasfezione a base di lipidi. Sono stati trasfettati i seguenti oligonucleotidi: RNA interferente piccolo (si-GR) che mira al recettore dei glucocorticoidi e RNA interferente piccolo controllo negativo (si-NC). Le sequenze siRNA candidate mirate alla GR sono state progettate utilizzando la piattaforma online di bioinformatica siDirect 2.0. Dopo la trasfezione, le cellule sono state coltivate per 48 ore e tutti i siRNA sono stati utilizzati a una concentrazione finale di 50 nM. L'efficienza del knockdown è stata verificata misurando l'espressione dell'mRNA della GR tramite RT-qPCR.
I gruppi di controllo dei veicoli sono stati inclusi sia negli esperimenti di trattamento con β-sitosterolo sia negli esperimenti di trasfezione. Per l'intervento β-sitosterolo, le cellule trattate con solvente del veicolo servivano come gruppo di controllo del veicolo (indicato come CSE+0). L'analisi statistica ha confermato che non sono state osservate differenze significative tra i gruppi di controllo del veicolo e quello del blocco vuoto.
Analisi statistica
Tutti i risultati quantitativi sono stati espressi come deviazione media ± standard da tre esperimenti in vitro biologicamente indipendenti. Le analisi statistiche sono state effettuate utilizzando software di analisi statistica. Il test di Shapiro–Wilk è stato utilizzato per esaminare la normalità della distribuzione del dataset prima dei test statistici; È stata adottata la correzione post-hoc di Bonferroni per adeguare i valori P per confronti multipli dopo l'analisi della varianza (ANOVA). I confronti tra due gruppi sono stati valutati tramite un test Student non accoppiato, mentre per confronti multi-gruppi è stato impiegato ANOVA unidirezionale o bidirezionale. Un p-valore ≤ 0,05 è stato considerato statisticamente significativo.
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β-sitosterolo era un potenziale prodotto naturale per il trattamento della BPCO
A causa degli effetti curativi riportati di Fritillaria cirrhosa D. Don, fiore secco di Lonicera japonica Thunb., radice secca di Glehnia littoralis F. Schmidt ex Miq., e Adenophora stricta Miq. nel trattamento delle malattiepolmonari 35,36,37,38, questo studio ha utilizzato il database TCMSP per identific...
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La BPCO impone un notevole carico globale di malattie e rimane una grande sfida per la salutemondiale 1. La gestione attuale della BPCO comprende sia interventi farmacologici che nonfarmacologici 42. Tra i trattamenti farmacologici, i glucocorticosteroidi (GC) sono ampiamente utilizzati nei disturbi infiammatori cronici. Agiscono legandosi alla GR e reclutando la deacetilasi dell'istone 2 nei complessi trascrizionali per invertire l'acetila...
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L'autore o gli autori dichiarano che non vi è conflitto di interessi.
Gli autori non hanno alcun riconoscimento.
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| BEAS-2B human bronchial epithelial cells | SunnCell, China | SC-0218 | Lignaggio di cellule epiteliali bronchiali umane per lo studio in vitro |
| C57BL/6 mice | Vital River Laboratories, China | 213 | Modello animale per esperimento in vivo di BPCO |
| CB-DOCK2 | Cina | https://cadd.labshare.cn/cb-dock2/php/index.php | per la simulazione di docking molecolare tra ligando e proteina recettore |
| Cell Counting Kit-8 (CCK-8) | Beyotime Biotechnology, China | C0038 | Rilevamento della vitalità e proliferazione cellulare |
| CellEvent™ Senescence Green Detection Kit | Thermo Fisher, USA | C10851 | Rilevamento della senescenza cellulare |
| Sigarette | Hongta, Cina | Non fornito | Sigaretta utilizzata per l'esposizione al fumo e la preparazione del CSE |
| CTD | USA | https://ctdbase.org/ | per il recupero dei geni associati alla BPCO |
| Sonda fluorescente DCFH-DA | Sigma-Aldrich, USA | D6883-50MG | Rilevamento del livello di ROS intracellulare |
| Desametasone (DEX) | Yeasen, Cina | 40323ES03 | Glucocorticoide per l'intervento combinato |
| Mezzo DMEM/F12 | Gibco, USA | 11330032 | Mezzo di base per la coltura cellulare BEAS-2B |
| Siero fetale bovino (FBS) | Gibco, USA | 10270106 | Supplemento per il mezzo di coltura cellulare |
| GraphPad Prism | GraphPad Software, USA | 9.3.1 | Analisi statistica dei dati e disegno dei grafici |
| Isoflurano | RWD Life Science, Cina | R510-22-10 | Anestetico inalatorio per l'eutanasia degli animali |
| Kit di dosaggio per la perossidazione lipidica MDA | Beyotime Biotechnology, China | S0131S | Rilevamento del contenuto di malondialdeide (MDA) intracellulare |
| Lipofectamine 2000 | Thermo Fisher, USA | 11668030 | Reagente di trasfezione per la consegna di siRNA |
| Lettore multimode per piastre | Thermo Fisher, USA | VL0000D0 | Rilevamento dell'assorbanza e del valore di fluorescenza |
| Citometro a flusso Navios EX | Beckman Coulter, USA | B80912 | Analisi di ROS e cellule senescenti |
| Penicillina/streptomicina | HyClone, USA | SV30010 | Antibiotici per prevenire la contaminazione batterica |
| Power SYBR™ Green Master Mix | Thermo Fisher, USA | 4367659 | Amplificazione qPCR quantitativa fluorescente |
| Kit reagente PrimeScript™ RT | Takara, Giappone | RR037Q | Trascrittazione inversa per la sintesi di cDNA |
| Database PubChem | USA | https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/ | per l'acquisizione della sequenza SMILES canonica e il download delle informazioni strutturali 3D SDF del beta-sitosterolo |
| Strumento di PCR RT-qPCR QuantStudio Dx | Thermo Fisher, USA | 4479889 | Rilevamento RT-qPCR in tempo reale |
| RCSB PDB | USA | https://www.rcsb.org/ | per ottenere il file di struttura 3D del cristallo GR |
| Kit di isolamento RNA/Proteina | Beyotime Biotechnology, China | R0018S | Estrae l'RNA totale da cellule e tessuto polmonare |
| si-GR | Progettato in silico tramite siDirect 2.1 | Sintesi personalizzata | Guida: 5′-UUUUGAAUGGGUGUAGCAA-3′; Passeggero: 5′-GCUUUCACCCAUUCAAAAGG-3′, knockdown per GR |
| si-NC | Thermo Fisher, USA | 4390843 | utilizzato come controllo di trasfezione negativa per saggi cellulari e in vivo |
| Database SwissTargetPrediction | Svizzera | http://swisstargetprediction.ch/ | per la previsione in silico di potenziali bersagli proteici correlati ai farmaci |
| Database TCMSP | Cina | https://www.tcmsp-e.com/ | per lo screening degli ingredienti erboristici e la previsione dei bersagli |
| TTD | Singapore | https://db.idrblab.net/ttd/ | per la raccolta di geni associati alla BPCO con validazione |
| Camera di esposizione al fumo dell'intero corpo | Teague Enterprise, USA | TE-2 | Stabilimento di modello di BPCO indotto dal fumo di sigaretta |
| β-sitosterolo | ChemicalBook, Cina | 83-46-5 | Fitosterolo attivo per il trattamento farmacologico |
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