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Articolo di ricerca
* These authors contributed equally
Questo studio analizza il danno alla mucosa gastrica associato al trattamento con clopidogrel nei ratti e nelle cellule epiteliali gastriche, mettendo in evidenza la sua associazione con cambiamenti molecolari legati allo stress del reticolo endoplasmatico, apoptosi e infiammazione sistemica.
Il clopidogrel è ampiamente utilizzato come agente antiaggregante per la prevenzione e il trattamento delle malattie trombotiche arteriose, ma la sua applicazione clinica può essere limitata da effetti avversi gastrointestinali, inclusi danni alla mucosa gastrica. Poiché la sopravvivenza delle cellule epiteliali è essenziale per mantenere l'integrità della mucosa gastrica, abbiamo ipotizzato che il danno epiteliale gastrico indotto dal clopidogrel fosse accompagnato da alterazioni nei marcatori legati allo stress del reticolo endoplasmatico (ER) e all'apoptosi. Per verificare questa ipotesi, le cellule epiteliali gastriche umane GES-1 sono state trattate con diverse concentrazioni di clopidogrel, valutando la vitalità cellulare, l'apoptosi, la distribuzione del ciclo cellulare e le modifiche molecolari mediante saggio con il kit per il conteggio cellulare (CCK-8), citometria a flusso, reazione a catena della polimerasi quantitativa in tempo reale (qRT-PCR) e immunoblotting. Parallelamente, dei ratti Sprague-Dawley sono stati trattati con clopidogrel per via orale al fine di stabilire un modello in vivo di danno gastrico. Le alterazioni patologiche della mucosa gastrica sono state valutate mediante colorazione con ematossilina ed eosina, mentre i livelli sierici di citochine infiammatorie sono stati misurati con saggio immunoenzimatico (ELISA). Il clopidogrel ha ridotto la vitalità delle cellule GES-1, promosso l'apoptosi e alterato il progresso del ciclo cellulare. Nei ratti, il clopidogrel ha indotto erosione della mucosa gastrica, edema e infiltrazione di cellule infiammatorie, accompagnate da un aumento dei livelli sierici di interleuchina (IL)-1β, IL-6 e fattore di necrosi tumorale-α (TNF-α). Il clopidogrel ha inoltre aumentato l'espressione dei marcatori dello stress del reticolo endoplasmatico, proteina omologa a C/EBP (CHOP) e fattore di trascrizione attivante 5 (ATF5), aumentato l'espressione della proteina Bcl-2 associata a X (Bax), ridotto l'espressione della linfoma cellulare B 2 (Bcl-2) e innalzato il rapporto Bax/Bcl-2 sia nei tessuti gastrici che nelle cellule GES-1. Questi risultati suggeriscono che il danno alla mucosa gastrica indotto dal clopidogrel è associato a un aumento dell'espressione dei marcatori legati allo stress del reticolo endoplasmatico e alla rottura dell'equilibrio Bax/Bcl-2, sebbene in questo studio non sia stata dimostrata una diretta relazione causale tra lo stress del reticolo endoplasmatico e la via mitocondriale dell'apoptosi.
I sistemi immunitari innati e adattativi della mucosa gastrica, costituiti da cellule epiteliali, cellule immunitarie e molecole di segnalazione, collaborano per mantenere l'integrità della mucosa e fungono da barriera fisiologica critica contro fattori dannosi1,2. Questa funzione protettiva è essenziale per l'omeostasi gastrointestinale e la sua alterazione può contribuire allo sviluppo di malattie gastriche, inclusa la gastrite3. Clinicamente, il danno alla mucosa gastrica indotto da farmaci è una complicanza comune, con i farmaci antiinfiammatori non steroidei e gli agenti antiaggreganti tra le cause più frequenti4. L'integrità della mucosa gastrica dipende da un equilibrio dinamico tra proliferazione cellulare e apoptosi5. L'esposizione cronica a fattori ambientali, inclusi i farmaci, può alterare questo equilibrio, favorire l'apoptosi e provocare lesioni alla mucosa6,7. Il reticolo endoplasmatico svolge un ruolo centrale nel mantenimento dell'omeostasi intracellulare. In condizioni di stress cellulare, l'accumulo di proteine mal ripiegate o non ripiegate attiva la risposta alle proteine non ripiegate, comprendente la via di segnalazione PERK/eIF2α/ATF4/CHOP, che può favorire l'apoptosi e modificare l'espressione delle proteine della famiglia della linfoma B-cellula 2 (Bcl-2)8. ATF5 è coinvolto anche nelle risposte allo stress mitocondriale e nella comunicazione crociata tra disfunzione mitocondriale e stress del reticolo endoplasmatico9. Evidenze cliniche recenti indicano che la terapia antiaggregante protratta, inclusa la clopidogrel, è associata a un progressivo danno della mucosa gastrica e intestinale10.
Il clopidogrel è un agente antiaggregante piastrinico ampiamente prescritto che richiede un'attivazione metabolica prima di legarsi in modo irreversibile ai recettori piastrinici P2Y12, inibendo così l'aggregazione piastrinica mediata dall'adenosina difosfato e producendo effetti antitrombotici11. Questa bioattivazione avviene principalmente attraverso gli enzimi epatici del citocromo P450. Pertanto, l'esposizione diretta di cellule epiteliali gastriche coltivate al composto parentale del clopidogrel non riproduce il contesto metabolico e farmacocinetico completo del trattamento con clopidogrel in vivo. Tuttavia, crescenti evidenze suggeriscono che il trattamento con clopidogrel possa essere associato a ulcere gastriche ricorrenti e a sanguinamenti gastrointestinali, evidenziando l'importanza di bilanciare l'efficacia antitrombotica con la sicurezza gastrointestinale12,13,14. Sebbene questi effetti avversi siano stati riportati, i meccanismi alla base del danno alla mucosa gastrica associato al clopidogrel non sono ancora completamente compresi, limitando lo sviluppo di strategie preventive e terapeutiche mirate. Nel presente studio, abbiamo esaminato gli effetti del clopidogrel sulla mucosa gastrica utilizzando ratti Sprague–Dawley e cellule GES-1. I ratti hanno ricevuto clopidogrel per gavaggio, e sono stati condotti esperimenti complementari in vitro impiegando cellule GES-1. Sono state effettuate analisi istopatologiche, molecolari e cellulari per indagare se il danno alla mucosa gastrica indotto dal clopidogrel sia associato allo stress del reticolo endoplasmatico e all'apoptosi. Di conseguenza, il presente studio si è concentrato sulla caratterizzazione dei cambiamenti molecolari associati al danno gastrico indotto dal clopidogrel, piuttosto che sull'individuazione di una via di segnalazione causale. I nostri risultati forniscono ulteriori informazioni sui cambiamenti molecolari legati al danno alla mucosa gastrica indotto dal clopidogrel e potrebbero contribuire a futuri studi volti a prevenire e gestire questi effetti avversi.
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Tutte le procedure sperimentali sugli animali sono state esaminate e approvate dal Laboratorio di Controllo Etico Sperimentale sugli Animali di Dr. Can Biotechnology (Zhejiang) Co., Ltd. Lo studio è stato condotto in conformità con le linee guida istituzionali per la cura e l'uso degli animali da laboratorio. Il numero di approvazione etica per gli animali era DRK-20251015210.
Animali e linee cellulari
L'approvazione etica ha coperto l'uso di 20 ratti Sprague–Dawley di grado SPF. Un totale di 12 ratti maschi Sprague–Dawley di grado SPF, di età compresa tra 6 e 8 settimane e del peso di 280–300 g all'inizio dell'esperimento, sono stati inclusi nel presente studio. I ratti sono stati ottenuti dalla Hangzhou Ziyuan Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (Hangzhou, Cina; Licenza di produzione n. SCXK [Zhejiang] 2024-0004) e assegnati casualmente ai gruppi di controllo e a quelli trattati con clopidogrel, con sei ratti per gruppo. I ratti sono stati allevati in un ambiente controllato a circa 22°C, con un ciclo luce/buio di 12 ore, con libera disponibilità di mangime standard e acqua potabile sterilizzata. A tutti i ratti è stato consentito un periodo di acclimatazione di una settimana prima dell'inizio dell'esperimento. L'idrogenosolfato di clopidogrel è stato sospeso in carbossimetilcellulosa sodica (CMC-Na) allo 0,5% a una concentrazione di 0,781 mg/mL. I ratti del gruppo trattato con clopidogrel hanno ricevuto l'idrogenosolfato di clopidogrel per gavaggio orale a 10 mL/kg di peso corporeo (equivalente a 1 mL/100 g di peso corporeo e a una dose di 7,81 mg/kg) una volta al giorno per 3 giorni consecutivi. I ratti del gruppo di controllo hanno ricevuto un volume equivalente di CMC-Na allo 0,5%. La dose e la durata del trattamento di 3 giorni sono state scelte in base a un modello ratto a breve termine precedentemente descritto di somministrazione orale di clopidogrel. Dopo l'ultimo gavaggio al giorno 3, il cibo è stato sospeso per 12 ore, mentre l'acqua è stata fornita ad libitum. I ratti sono stati anestetizzati in una camera di induzione con isoflurano al 3% in ossigeno, e l'anestesia è stata mantenuta con isoflurano al 1,5%–2,0% somministrato attraverso un cono nasale. La profondità anestetica adeguata è stata confermata dall'assenza di riflessi corneale e di ritrazione plantare. Il sangue è stato prelevato mediante puntura cardiaca terminale sotto anestesia profonda. Mentre rimanevano profondamente anestetizzati, i ratti sono stati soppressi mediante esanguinazione seguita da toracotomia bilaterale. La morte è stata confermata dall'assenza di respirazione spontanea e attività cardiaca per almeno 5 minuti, insieme all'assenza di riflessi corneale e di ritrazione plantare. Lo stomaco è stato quindi rapidamente asportato, aperto lungo la grande curvatura e delicatamente risciacquato con soluzione salina fredda.
La linea cellulare di epitelio mucosale gastrico umano GES-1 è stata ottenuta da iCell Bioscience Inc. (Shanghai, Cina; N. Cat. iCell-h062) ed è stata autenticata mediante analisi del profilo di ripetizioni in tandem corte da parte del fornitore. Le cellule sono state coltivate in mezzo RPMI-1640 integrato con il 10% di siero fetale bovino (FBS) e l'1% di penicillina-streptomicina, in un incubatore umidificato a 37°C con 5% di CO₂. Per gli esperimenti sono state utilizzate cellule precoci, comprese tra il passaggio 3 e il passaggio 10. Quando la confluenza cellulare raggiungeva circa l’80%–90%, le cellule venivano suddivise in un rapporto di 1:3. Per i successivi esperimenti sono state impiegate cellule in fase logaritmica di crescita. Per il saggio CCK-8, le cellule sono state seminate in piastre a 96 pozzetti a una densità di 6 × 103 cellule/pozzetto. Per le analisi di apoptosi e del ciclo cellulare, le cellule sono state seminate in piastre a 6 pozzetti a una densità di circa 5 × 105 cellule/pozzetto e lasciate aderire prima del trattamento con clopidogrel.
Prodotti chimici e soluzioni
È stato utilizzato clopidogrel emisolfato (N. Cat. C874834; purezza ≥ 99%) per gli esperimenti sugli animali e sulle cellule. Una soluzione madre di clopidogrel è stata preparata sciogliendo 100 mg di polvere di clopidogrel in dimetilsulfossido (DMSO) per ottenere una soluzione madre 1 M. La soluzione madre è stata ulteriormente diluita alle concentrazioni operative richieste prima dell'uso. La soluzione madre 1 M è stata diluita in serie con DMSO per preparare soluzioni di dosaggio 1000× alle concentrazioni di 10, 100, 200, 400, 600, 800 e 1000 mM. Immediatamente prima del trattamento, ciascuna soluzione di dosaggio 1000× è stata aggiunta al mezzo di coltura completo in un rapporto di 1:1000 (v/v) per ottenere concentrazioni finali di clopidogrel rispettivamente di 0,01, 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 e 1,0 mM. Il gruppo di controllo con veicolo ha ricevuto un volume uguale di DMSO senza clopidogrel. Pertanto, la concentrazione finale di DMSO è stata mantenuta al 0,1% (v/v) in tutti i gruppi. Le cellule GES-1 in coltura non riproducono l'attivazione biochimica epatica del clopidogrel mediata dal citocromo P450. Pertanto, il trattamento diretto con clopidogrel è stato utilizzato come modello esplorativo di esposizione al composto parentale. L'intervallo di concentrazioni è stato scelto per caratterizzare le risposte cellulari dipendenti dalla concentrazione nelle condizioni sperimentali e non deve essere interpretato come equivalente a concentrazioni clinicamente raggiungibili nel plasma o nei tessuti gastrici.
Subcoltura delle cellule
Il mezzo completo è stato preparato aggiungendo al mezzo basale di coltura FBS e penicillina-streptomicina. Quando la confluenza cellulare ha raggiunto circa l'80%, il mezzo di coltura è stato rimosso e le cellule sono state lavate tre volte con soluzione salina fosfato sterile (PBS). Le cellule sono state quindi digerite con soluzione di tripsina-edetato (EDTA) per circa 1–2 min. Dopo il distacco parziale delle cellule, è stato aggiunto mezzo completo per interrompere la digestione. La sospensione cellulare è stata centrifugata a 1.200 × g per 3 min. Dopo la rimozione del soprannatante, il pellet cellulare è stato risospeso in 1–2 mL di mezzo completo e seminato in nuove piastre di coltura in base alle esigenze sperimentali.
Saggio di vitalità cellulare CCK-8
Le cellule GES-1 in fase di crescita logaritmica sono state seminate in piastre a 96 pozzetti a una densità di 6 × 103 cellule/pozzetto e coltivate durante la notte per consentire l'adesione cellulare. Dopo l'adesione, le cellule sono state trattate con diverse concentrazioni di clopidogrel (0, 0,01, 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 e 1,0 mM) per 24 h. Al gruppo di controllo è stata aggiunta la stessa concentrazione finale di veicolo. Dopo il trattamento, è stato aggiunto in ogni pozzetto la soluzione CCK-8 e le piastre sono state incubate a 37°C seguendo le istruzioni del kit. L'assorbanza a 450 nm è stata misurata utilizzando un lettore di micropiastre. La vitalità cellulare è stata calcolata come percentuale rispetto al gruppo di controllo. Sulla base dei risultati della curva concentrazione-risposta, è stato scelto un trattamento con clopidogrel 0,1 mM per 24 h per le successive analisi di apoptosi, ciclo cellulare, qPCR e Western blot.
Analisi di Citometria a Flusso
Le cellule GES-1 sono state seminate in piastre da 6 pozzetti e trattate con 0,1 mM di clopidogrel per 24 h dopo l'attaccamento cellulare. Al termine del trattamento, sono state raccolte sia le cellule in sospensione che quelle aderenti. Le cellule aderenti sono state digerite con tripsina senza EDTA, lavate due volte con PBS freddo e risospese nel binding buffer. La colorazione delle cellule è stata eseguita utilizzando un Kit per l'apoptosi Annexin V-FITC/PI secondo le istruzioni del produttore. Dopo incubazione a temperatura ambiente al buio, le cellule apoptotiche sono state rilevate mediante citometria a flusso utilizzando un citometro RaiseCyte 2L6C. I dati sono stati acquisiti con il software RaiseFlower e analizzati con il software FlowJo (versione 10.8.1). Le popolazioni cellulari apoptotiche precoci, apoptotiche tardive e l'apoptosi totale sono state quantificate utilizzando il software FlowJo.
Analisi citofluorimetrica della distribuzione del ciclo cellulare
Le cellule GES-1 sono state seminate in piastre a 6 pozzetti e trattate con clopidogrel 0,1 mM per 24 h. Dopo il trattamento, le cellule sono state raccolte, lavate con PBS e fissate in etanolo al 70% preraffreddato a 4°C. Le cellule fissate sono state quindi lavate per rimuovere l'etanolo residuo e incubate con soluzione di colorazione di RNAse A e ioduro di propidio al buio, seguendo le istruzioni del produttore. La distribuzione del ciclo cellulare è stata analizzata mediante citometria a flusso. I dati sono stati acquisiti utilizzando il software di acquisizione e analizzati con il software FlowJo. Le distribuzioni del ciclo cellulare sono state adattate utilizzando il modello di Watson e sono state calcolate le percentuali di cellule nelle fasi G0/G1, S e G2/M.
PCR Quantitativa in Tempo Reale (qPCR)
L'RNA totale è stato estratto da cellule GES-1 e campioni di tessuto gastrico di ratto utilizzando un kit di estrazione dell'RNA seguendo le istruzioni del produttore. Per i campioni di tessuto, i tessuti della mucosa gastrica sono stati raccolti rapidamente, omogeneizzati in condizioni di bassa temperatura e sottoposti all'estrazione dell'RNA. La concentrazione e la purezza dell'RNA sono state determinate misurando l'assorbanza a 260 e 280 nm. Quantità uguali di RNA sono state retrotrascritte in DNA complementare (cDNA) utilizzando un kit di retrotrascrizione con rimozione del DNA genomico. È stata eseguita una PCR quantitativa in tempo reale utilizzando una miscela master per PCR a base di SYBR Green. Ogni reazione è stata effettuata in un volume totale di 20 µL contenente 10 µL di miscela master 2×, 1 µL di cDNA, 0,4 µL di primer diretto, 0,4 µL di primer inverso e 8,2 µL di acqua deionizzata priva di RNasi (ddH₂O). Le condizioni del termociclatore sono state le seguenti: denaturazione iniziale a 95°C per 10 min, seguita da 40 cicli di denaturazione a 95°C per 10 s, appaiamento a 60°C per 30 s ed estensione a 72°C per 30 s. Sono stati determinati i livelli di espressione di CHOP, ATF5, Bcl-2 e Bax. Il gene GAPDH è stato utilizzato come gene di riferimento interno. L'espressione genica relativa è stata calcolata con il metodo 2−ΔΔCt. Le sequenze dei primer sono elencate nella Tabella Supplementare 1.
Western Blot
Le proteine totali sono state estratte da cellule GES-1 e da campioni di tessuto gastrico di ratto. Per i campioni cellulari, le cellule GES-1 trattate sono state lavate con PBS freddo e lisate utilizzando un buffer di lisi RIPA (radioimmunoprecipitation assay) contenente un inibitore delle proteasi. Per i campioni di tessuto, i tessuti della mucosa gastrica sono stati omogeneizzati nel buffer RIPA in condizioni di bassa temperatura e successivamente centrifugati per raccogliere il sopranatante. Le concentrazioni proteiche sono state determinate mediante un saggio proteico BCA. Un totale di 20 µg di proteina per corsia è stato separato mediante elettroforesi su gel di poliacrilamide in presenza di dodecilsolfato di sodio (SDS-PAGE) e trasferito su membrane di difluoruro di polivinilidene (PVDF). Dopo il blocco con albumina sierica bovina (BSA), le membrane sono state incubate tutta la notte a 4°C con anticorpi primari contro CHOP (1:1000), ATF5 (1:1000), Bcl-2 (1:1000), Bax (1:1000) e β-actina (1:5000). Dopo i lavaggi, le membrane sono state incubate con gli anticorpi secondari marcati con perossidasi di rafano (1:10000). Le bande proteiche sono state visualizzate utilizzando un reagente di chemiluminescenza migliorata e acquisite con un sistema di imaging chemiluminescente. Le intensità delle bande sono state quantificate mediante software di analisi delle immagini e normalizzate rispetto a β-actina.
Valutazione istopatologica
Campioni di tessuto gastrico sono stati prelevati da ratti Sprague–Dawley dopo il trattamento con clopidogrel e fissati in formalina neutra tamponata al 10%. I campioni sono stati disidratati, chiarificati, inclusi in paraffina e sezionati con uno spessore di 4 µm. Le sezioni in paraffina sono state colorate con ematossilina ed eosina. I cambiamenti istopatologici sono stati valutati qualitativamente al microscopio ottico in base alla morfologia della mucosa, all'integrità epiteliale, all'edema e all'infiltrazione di cellule infiammatorie. Sono state acquisite immagini rappresentative. Non è stato applicato alcun sistema di punteggio istologico.
Immunoeistochimica
Le sezioni di tessuto gastrico in paraffina sono state disparaffinate in xilene e reidratate mediante una serie alcolica a concentrazione decrescente. Il recupero dell'antigene indotto dal calore è stato eseguito in tampone citrato. L'attività della perossidasi endogena è stata bloccata con perossido di idrogeno al 3% per 10 minuti e il legame non specifico è stato bloccato con siero di capra normale per 30 minuti a temperatura ambiente. Le sezioni sono state quindi incubate tutta la notte a 4°C con anticorpi primari contro CHOP, ATF5, Bcl-2 e Bax. Dopo il lavaggio con PBS, le sezioni sono state incubate con l'anticorpo secondario corrispondente coniugato alla perossidasi di rafano. I segnali immunoreattivi sono stati visualizzati utilizzando una soluzione cromogenica DAB, seguita da una controstain con ematossilina. Le sezioni sono state disidratate, chiarificate, montate ed esaminate al microscopio ottico. Sono state acquisite immagini rappresentative e l'area di colorazione positiva è stata quantificata mediante software di analisi delle immagini.
Colorazione mediante immunofluorescenza
Le sezioni di tessuto gastrico in paraffina sono state disparaffinate, reidratate e sottoposte a recupero dell'antigene indotto da calore in tampone citrato. Dopo il blocco con siero di capra normale per 30 minuti, le sezioni sono state incubate tutta la notte a 4°C con anticorpi primari contro CHOP (1:50), ATF5 (1:100), Bcl-2 (1:50) e Bax (1:200). Dopo il lavaggio con PBS, le sezioni sono state incubate con gli anticorpi secondari fluorescenti corrispondenti (1:500) per 1 ora a temperatura ambiente al buio e quindi controstainate con DAPI. Le immagini sono state acquisite mediante microscopio a fluorescenza con un ingrandimento di ×200. Sono stati analizzati tre campi scelti casualmente e non sovrapposti per ogni animale utilizzando il software Image-Pro Plus 6.0, e l'intensità della fluorescenza è stata espressa come IOD/Area. Nell'analisi sono stati inclusi tre animali per gruppo.
Saggio immunoenzimatico (ELISA)
I campioni di sangue sono stati prelevati da ratti Sprague–Dawley dopo il trattamento e lasciati coagulare a temperatura ambiente. Il siero è stato separato mediante centrifugazione e conservato a −80°C fino all'analisi. I livelli sierici di IL-1β, IL-6 e TNF-α sono stati misurati utilizzando kit ELISA seguendo le istruzioni del produttore. L'assorbanza è stata misurata con un lettore di microtiterplate e le concentrazioni delle citochine sono state calcolate in base alle curve standard.
Analisi statistica
Le analisi statistiche sono state eseguite utilizzando un software di analisi statistica. I dati sono espressi come media ± DS. La normalità e l'omogeneità della varianza sono state valutate rispettivamente mediante il test di Shapiro–Wilk e il test di Levene. Il confronto tra due gruppi è stato effettuato utilizzando il test t di Student. I confronti tra più gruppi sono stati effettuati mediante analisi della varianza ad un solo fattore (ANOVA), seguita dal test post hoc di Dunnett. Un valore di P < 0,05 è stato considerato statisticamente significativo. Tutti gli esperimenti sulle cellule sono stati eseguiti con almeno tre replicati biologici indipendenti.
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Il clopidogrel riduce la vitalità delle cellule GES-1 e aumenta l'apoptosi In Vitro
Abbiamo innanzitutto indagato se il clopidogrel influisca sulla vitalità cellulare e sull'apoptosi delle cellule GES-1. Saggi CCK-8 hanno mostrato che il trattamento con clopidogrel riduceva significativamente la vitalità delle cellule GES-1 (Figura 1A,B), indicando una riduzione della vitalità cellulare. Sulla base della riduzione comples...
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Il clopidogrel è ampiamente utilizzato per la prevenzione e il trattamento delle malattie cardiovascolari; tuttavia, il suo utilizzo clinico è associato a rischi di sanguinamento e complicanze gastrointestinali, inclusi ulcere peptiche, emorragie e perforazioni19. Pertanto, comprendere i cambiamenti molecolari associati al danno gastrico indotto dal clopidogrel è importante per migliorare la prevenzione e la gestione di questi effetti avversi. Nello studio attuale, abbiamo esaminato gli effetti de...
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Conflitto di interessi:
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti noti o relazioni personali che potrebbero aver influenzato il lavoro descritto in questo studio.
Questo lavoro è stato sostenuto dal progetto „Ricerca fondamentale sul percorso di segnalazione CHOP/ATF5/Bcl-2 nell'apoptosi delle cellule epiteliali della mucosa gastrica indotta da clopidogrel” (Numero progetto 2023BWKY009).
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Kit di rilevamento dell'apoptosi Annexina V-FITC/PI | Elabscience | E-CK-A211 | Kit per il rilevamento dell'apoptosi |
| Anticorpo anti-ATF5 | Proteintech | 67066-1-AP | Anticorpo primario |
| Kit per saggio proteine BCA | Solarbio | PC0020 | Saggio per concentrazione proteica |
| Anticorpo anti-Bax | Proteintech | 50599-1-AP | Anticorpo primario |
| Anticorpo anti-Bcl-2 | Proteintech | 26593-1-AP | Anticorpo primario |
| β-actina, anticorpo | Proteintech | 66009-1-Ig | Anticorpo primario |
| Buffer bloccante | Beyotime | P0252 | Soluzione per bloccaggio nel Western blot |
| Kit per conteggio cellulare CCK-8 | KeyGen Biotech | KGA317 | Saggio di vitalità cellulare |
| Kit per sintesi di cDNA | TransGen Biotech | AU341 | Kit per sintesi del primo filamento di cDNA con rimozione del DNA genomico |
| Kit di rilevamento del ciclo cellulare | Lianke Biotechnology | CCS012 | Kit per analisi del ciclo cellulare |
| Anticorpo anti-CHOP | Proteintech | 15204-1-AP | Anticorpo primario |
| Clopidogrel idrogenosolfato (purezza ≥99%) | Macklin | C874834 | Farmaco sperimentale |
| Kit cromogeno DAB | Beyotime | P0201M | Substrato per immunohistochimica |
| Dietilsolfossido (DMSO) | MedChemExpress | HY-Y0320C | Solvente |
| Reagente di chemiluminescenza migliorata (ECL) | Meilunbio | MA0186 | Substrato chemiluminescente |
| Siero fetale bovino (FBS) | Gibco | 10099-141 | Integratore per colture cellulari |
| Linea cellulare epiteliale gastrica umana GES-1 | iCell Bioscience | iCell-h062 | Linea cellulare epiteliale gastrica umana |
| Kit di colorazione ematossilina ed eosina (H&E) | Beyotime | C0105S | Colorazione istologica |
| Anticorpo secondario coniugato con perossidasi di rafano (HRP) | Proteintech | RGAM001/RGAR001 | Anticorpo secondario |
| Soluzione di perossido di idrogeno | Absin | ABS9333-100mL | Reagente per bloccaggio della perossidasi endogena |
| Kit ELISA per IL-1β | MEIMIAN | MM-0047R2 | Saggio citochina sierica |
| Kit ELISA per IL-6 | MEIMIAN | MM-0190R2 | Saggio citochina sierica |
| Lettore di micropiastre | Beijing Liuyi Biotechnology | WD-2102B | Misurazione dell'assorbanza |
| Soluzione di penicillina-streptomicina | Solarbio | P1400 | Soluzione antibiotica |
| Soluzione salina tamponata al fosfato (PBS) | Servicebio | G4202-500ML | PBS 1× |
| Membrana in difluoruro di polivinilidene (PVDF) | Millipore | IPVH00010 | Membrana per Western blot |
| Diluente per anticorpi primari | Beyotime | P0023A | Diluente per anticorpi |
| Marcatore proteico per peso molecolare | Yeasen | WJ103 | Scala proteica precolorata |
| Master mix per PCR quantitativa in tempo reale (SYBR Green) | CWBio | CW3008 | Reagente per qPCR |
| Buffer di lisi RIPA (Radioimmunoprecipitation Assay) | Solarbio | R0010 | Buffer per estrazione proteica |
| RNAasi A | Lianke Biotechnology | CCS012 | Reagente per analisi del ciclo cellulare |
| Mezzo RPMI-1640 | Servicebio | G4535-500ML | Mezzo basale per colture cellulari |
| Ratti Sprague-Dawley | Hangzhou Ziyuan Laboratory Animal Technology Co., Ltd. | N/A | Grado SPF |
| Kit ELISA per TNF-α | MEIMIAN | MM-0180R2 | Saggio citochina sierica |
| Kit per estrazione di RNA totale | TransGen Biotech | ER501-01 | Kit per estrazione di RNA |
| Soluzione tripsina-EDTA | Solarbio | T1300 | Reagente per dissociazione cellulare |
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