È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo di ricerca
Questo protocollo ha lo scopo di valutare l'efficacia antitumorale della ruscogenina in cellule di carcinoma nasofaringeo. Descrive metodologie complete — inclusi saggi di vitalità, migrazione, apoptosi e ferroptosi — per chiarire in modo sistematico come questo composto induca una morte cellulare duale attraverso il targeting e la downregolazione di KDM1A.
Il carcinoma nasofaringeo (NPC) è una neoplasia altamente aggressiva. Il composto naturale rusco genina (Rus) mostra un potenziale antitumorale. Questo studio chiarisce il meccanismo d'azione specifico della rusco genina nel carcinoma nasofaringeo (NPC), analizzandone gli effetti sulle cellule NPC e sul percorso molecolare sottostante. La linea cellulare umana di carcinoma nasofaringeo (NPC), C666-1, è stata trattata con diverse concentrazioni di Rus. È stata eseguita una serie di saggi in vitro per valutare la vitalità cellulare, la proliferazione, la migrazione, l'invasione, l'apoptosi e la ferroptosi. Il ruolo della lisina-specifica demetilasi 1A (KDM1A) è stato indagato mediante Western blot e docking molecolare, e il suo ruolo mediatore è stato confermato tramite esperimenti di recupero mediante sovraespressione. La rusco genina ha ridotto in modo dose-dipendente le capacità proliferative, clonogeniche, migratorie e invasive delle cellule C666-1. Dal punto di vista meccanicistico, il trattamento con Rus ha indotto sia l'apoptosi, dimostrata dall'attivazione della caspasi esecutrice-3 e da uno spostamento verso una segnalazione pro-apoptotica mediata dall'equilibrio Bax/Bcl-2, sia la ferroptosi, caratterizzata da un aumento della perossidazione lipidica e del ferro intracellulare. Questi effetti antitumorali sono risultati fortemente correlati alla downregolazione di KDM1A. In modo cruciale, la sovraespressione forzata di KDM1A ha attenuato in modo significativo l'apoptosi e la ferroptosi indotte da Rus e ha invertito la soppressione dei fenotipi maligni, confermando il ruolo mediatore essenziale di KDM1A. La rusco genina inibisce la progressione maligna del carcinoma nasofaringeo attraverso la downregolazione di KDM1A, promuovendo così apoptosi e ferroptosi. Questi risultati identificano l'asse Rus-KDM1A come un promettente bersaglio terapeutico per il trattamento del NPC.
Il carcinoma nasofaringeo (NPC) è un tipo di cancro causato dalla cooperazione tra fattori genetici e ambientali1. Sebbene la radioterapia abbia compiuto notevoli progressi nel trattamento, la sopravvivenza complessiva dei pazienti affetti da NPC rimane insoddisfacente. Ciò è probabilmente dovuto al fatto che le cellule del NPC possono proliferare rapidamente e sono altamente predisposte a metastatizzare nei linfonodi regionali e in organi distanti2. Pertanto, è fondamentale esplorare i meccanismi molecolari che promuovono la progressione del NPC. Recentemente, la ferroptosi, una nuova modalità di morte cellulare, regolata in modo dipendente dal ferro da Fe2⁺ e dai perossidi lipidici, è stata identificata come un processo coinvolto in modo critico nel NPC3. Le evidenze attuali hanno dimostrato che la ferroptosi svolge un ruolo importante nel NPC e che la sua induzione può potenziare la radioterapia antitumorale4,5.
Grazie alla tossicità minima e agli effetti collaterali ridotti, le formule erboristiche cinesi vengono utilizzate da migliaia di anni per il trattamento del cancro6,7. Essendo un tipo di medicina multicomponente, a multi-target e con effetto sinergico, le prescrizioni della medicina tradizionale cinese (MTC) sono state impiegate come terapia complementare efficace nella prevenzione e nel trattamento del cancro, inclusivo del carcinoma nasofaringeo (NPC)8,9,10. La Radix ophiopogonis (RO), la radice della pianta erbacea perenne Ophiopogon japonicus, è stata riportata come efficace nell'attenuare il NPC in qualità di terapia adiuvante11,12. La ruscogenina (Rus), il componente principale della RO, è stata descritta come dotata di potenti effetti antitumorali13. In modelli murini di cancro del colon-retto, la Rus è in grado di migliorare i danni alle giunzioni strette e inibire la migrazione tumorale14. In particolare, la Rus può anche ridurre la vitalità delle cellule del cancro del pancreas inducendo ferroptosi. Tuttavia, l'effetto della Rus sul NPC rimane ancora poco chiaro.
L'epigenetica è il campo principale di ricerca sulla patogenesi del cancro e fornisce numerosi trattamenti efficaci15. Come una delle modificazioni epigenetiche meglio studiate, la metilazione degli istoni è coinvolta nello sviluppo del cancro ed è anche un importante bersaglio per la progettazione di farmaci16. La modulazione dinamica della metilazione degli istoni è mediata da metiltransferasi e demetilasi17. KDM1A è una lisina demetilasi degli istoni che è stata trovata essere criticamente coinvolta nella carcinogenesi a causa del suo ruolo nella modulazione epigenetica18. Inoltre, si è scoperto che KDM1A è una oncoproteina con elevata espressione in diversi tipi di cancro, come il cancro del polmone e del pancreas19. Guo et al. hanno riportato che l'aumento di KDM1A può sopprimere l'espressione della fosfatasi e omologo della tensina (PTEN) e potenziare la proliferazione e la migrazione delle cellule del carcinoma nasofaringeo, inibendo al contempo l'apoptosi20. Nel frattempo, è stato anche osservato che l'upregolazione di KDM1A può reprimere la ferroptosi nel cancro del polmone21. L'analisi del database Super-PRED ha indicato che KDM1A è un potenziale bersaglio di Rus.
Nonostante il riconosciuto potenziale antitumorale della Rus in altri tipi di cancro, il suo ruolo specifico e i meccanismi molecolari nel carcinoma nasofaringeo rimangono completamente sconosciuti, rappresentando una significativa lacuna nella ricerca. Inoltre, sebbene studi precedenti abbiano collegato separatamente la KDM1A alla proliferazione tumorale e alla resistenza alla ferroptosi, nessuna ricerca ha ancora esplorato se il targeting della KDM1A possa innescare contemporaneamente multipli vie di morte cellulare nel NPC. Pertanto, questo studio fornisce una solida base razionale per ipotizzare che la Rus possa sopprimere la progressione maligna delle cellule del NPC mediante la downregolazione diretta della KDM1A.
Questo studio si è proposto di colmare questa lacuna valutando sistematicamente l'effetto della ruspolina sulla proliferazione, migrazione e invasione delle cellule del carcinoma nasofaringeo (NPC). La principale novità di questa ricerca consiste nell'aver scoperto una strategia a doppio meccanismo. L'attenzione è stata concentrata sulla capacità della ruspolina di indurre contemporaneamente sia l'apoptosi classica sia la ferroptosi dipendente dal ferro. Confermando il nuovo asse di segnalazione ruspolina-KDM1A, questo studio amplia significativamente le conoscenze attuali dimostrando come un singolo composto naturale possa superare la resistenza tumorale attraverso un blocco simultaneo di più vie, offrendo una solida base preclinica per una terapia mirata del carcinoma nasofaringeo.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Cultura cellulare, trattamento e trasfezione
La linea cellulare di carcinoma nasofaringeo umano, C666-1 (RRID: CVCL_M597), e la linea cellulare di epitelio nasofaringeo umano non maligno, NP69 (RRID: CVCL_F755), sono state acquistate da un fornitore commerciale. Entrambe le linee cellulari sono state autenticate mediante analisi del profilo degli Short Tandem Repeat (STR) e sono state confermate prive di contaminazione da micoplasma prima dell'uso. Per la coltura di routine, le cellule C666-1 sono state propagate in mezzo RPMI 1640 integrato con il 10% di siero fetale bovino (FBS) e l'1% di penicillina-streptomicina. Le cellule NP69 sono state coltivate in mezzo privo di siero per cheratinociti, integrato con il 10% di FBS, 10 ng/mL di fattore di crescita epidermico ricombinante e l'1% di penicillina-streptomicina. La ruscogenina (Rus; purezza ≥ 98%) è stata acquistata da un fornitore commerciale. Entrambe le linee cellulari sono state mantenute in un incubatore umidificato a 37 °C con 5% di CO₂. Per i trattamenti, le cellule sono state esposte alla ruscogenina (Rus) a concentrazioni variabili (10, 20, 50 µM) per 24 h22. Per la trasfezione, plasmidi codificanti la lisina-specifica demetilasi 1A per sovraespressione (oe-KDM1A) e un vettore vuoto controllo negativo corrispondente (oe-NC), ottenuti da un fornitore commerciale, sono stati trasfettati nelle cellule C666-1 quando la confluenza cellulare ha raggiunto il 70–80%. In particolare, 2,5 µg di DNA plasmidico e 5 µL di un reagente di trasfezione a base lipidica sono stati ciascuno diluiti in 150 µL di mezzo con ridotto contenuto di siero, mescolati delicatamente, incubati per 20 min a temperatura ambiente e quindi aggiunti a ciascun pozzetto di una piastra a 6 pozzetti secondo il protocollo del produttore. Le cellule sono state incubate per 48 h a 37 °C e l'efficacia della trasfezione è stata successivamente verificata.
Saggio con il kit per il conteggio delle cellule-8 (CCK-8)
La vitalità cellulare dopo il trattamento con Rus è stata quantificata utilizzando il saggio CCK-8. Per questa procedura, le cellule sono state innanzitutto seminate in piastre a 96 pozzetti e coltivate durante la notte. Il saggio è stato avviato aggiungendo 10 µL di soluzione CCK-8 e, dopo 2 h di incubazione, la variazione colorimetrica risultante è stata misurata come densità ottica (OD) a 450 nm utilizzando un lettore di piastre.
Saggio di formazione di colonie
Per valutare la sopravvivenza clonogenica, le cellule C666-1 sono state seminate in piastre da 6 pozzetti e coltivate per 14 giorni. Al termine del periodo di incubazione, le colonie risultanti sono state fissate con metanolo al 100% per 10 minuti e successivamente visualizzate con violetto cristallo allo 0,5% per 30 minuti. Il numero di colonie colorate è stato quindi quantificato mediante imaging al microscopio e conteggio.
Western blot
Per l'analisi mediante Western blot, le proteine totali sono state dapprima estratte dalle cellule utilizzando un tampone RIPA, e i lisati ottenuti sono stati centrifugati (12.000 × g) per raccogliere il sopranatante. È stato utilizzato un saggio BCA per quantificare i livelli proteici. Quantità uguali di proteina totale (30 µg per pozzetto) sono state caricate e separate mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide in presenza di dodecilsolfato di sodio al 10% (SDS-PAGE). Dopo la separazione, le proteine sono state trasferite su membrane di fluoruro di polivinilidene (PVDF) a una tensione costante di 100 V per 90 minuti su ghiaccio. Le membrane sono state quindi bloccate con albumina sierica bovina (BSA) al 5% preparata in soluzione salina tamponata al Tris contenente lo 0,1% di Tween 20 (TBST) per 2 ore a temperatura ambiente. Successivamente, le membrane sono state incubate tutta la notte a 4°C con i seguenti anticorpi primari diluiti nel buffer di blocco (tutti in rapporto 1:1000): Ki67, PCNA, MMP2, MMP9, Bcl-2, Bax, KDM1A, SLC7A11, GPX4, ACSL4, TFR1 e β-actina. Infine, dopo un'incubazione di 2 ore con anticorpi secondari coniugati con perossidasi, le bande immunoreattive sono state visualizzate mediante un reagente di rilevamento chemiluminescente migliorato (ECL) e l'analisi densitometrica è stata eseguita utilizzando un software di analisi dell'immagine.
Saggio di riparazione della ferita (wound scratch)
Per il saggio di guarigione della ferita, le cellule C666-1 sono state coltivate fino a una confluenza dell'80% in piastre da 6 pozzetti. Una ferita uniforme è stata creata nel monostrato raschiando con una punta da pipetta da 200 µL. Le cellule staccate sono state rimosse con un lavaggio in PBS, dopodiché il mezzo di coltura è stato sostituito con mezzo privo di siero per un'incubazione di 24 ore. Le immagini dell'area della ferita sono state acquisite a 0 h e a 24 h mediante microscopio ottico per valutare la migrazione cellulare.
Saggio Transwell
L'invasione cellulare è stata valutata utilizzando camere a transwell (dimensione dei pori di 8 µm) pre-ricoperte con 50 µL di matrice della membrana basale. La capacità invasiva delle cellule C666-1 è stata analizzata mediante camere a transwell. Negli inserti superiori sono state seminate cellule sospese in mezzo privo di siero, mentre nei pozzetti inferiori è stato aggiunto DMEM contenente il 10% di FBS. Dopo un'incubazione di 24 h, le cellule rimaste sul lato apicale della membrana sono state accuratamente rimosse. Per la quantificazione, le cellule presenti sulla superficie basolaterale sono state fissate in metanolo, colorate con violetto cristallo allo 0,1% e contate a partire da immagini acquisite al microscopio ottico.
Citometria a flusso
L'apoptosi è stata quantificata mediante citometria a flusso. Per preparare i campioni, le cellule C666-1 sono state raccolte, lavate con PBS freddo, quindi risospese in 100 µL di buffer di legame. Le cellule sono state quindi colorate contemporaneamente con Annexina-V-FITC (20 µg/mL) e ioduro di propidio (PI). La colorazione è stata eseguita per 15 minuti sul ghiaccio, al riparo dalla luce. I dati sono stati acquisiti immediatamente mediante citometro a flusso per determinare la percentuale di cellule apoptotiche.
Rilevamento dell'attività della caspasi-3
L'attività della caspasi-3 è stata misurata utilizzando un kit commerciale per saggio secondo le istruzioni del produttore. In breve, le cellule C666-1 sono state lisate e i soprannatanti sono stati raccolti dopo centrifugazione a 14.000 × g. Dopo un'incubazione di 2 h con il reagente fornito, l'assorbanza di ciascun soprannatante è stata quantificata a 405 nm.
RT-qPCR
L'RNA totale è stato purificato da cellule C666-1 utilizzando un reagente commerciale per l'estrazione di RNA. L'RNA ottenuto è stato retrotrascritto in cDNA di prima catena utilizzando un kit commerciale seguendo il protocollo del produttore. Successivamente, è stata eseguita l'analisi dell'espressione genica mediante PCR quantitativa (qPCR) su un sistema di PCR in tempo reale con una miscela master a base di SYBR Green. Per determinare i livelli relativi di trascritto è stato utilizzato il metodo comparativo del Ct (2⁻△△Ct). Le sequenze dei primer utilizzate per l'amplificazione sono state: β-actin (Forward: 5'-CATGTACGTTGCTATCCAGGC-3'; Reverse: 5'-CTCCTTAATGTCACGCACGAT-3') e KDM1A (Forward: 5'-TGACCGGATGACTTCTCAAGA-3'; Reverse: 5'-GTTGGAGAGTAGCCTC AAATGTC-3').
Saggio delle sostanze reattive all'acido tiobarbiturico (TBARS)
Per misurare la perossidazione lipidica, i soprannatanti sono stati prima preparati da cellule C666-1 mediante precipitazione (15% TCA, 500 mM BHA) e centrifugazione per 10 min a 10.000 × g. Questi soprannatanti sono stati quindi fatti reagire con acido tiobarbiturico allo 0,375% e riscaldati a 100 °C per 10 min per generare l'addotto MDA-TBA. Il livello di questo addotto, indicativo della perossidazione lipidica, è stato determinato misurando l'assorbanza a 532 nm con un lettore di micropiastre23.
Rilevamento delle specie reattive dell'ossigeno lipidiche (ROS)
La perossidazione lipidica è stata rilevata utilizzando una sonda fluorescente per la perossidazione lipidica. Le cellule C666-1 sono state seminate in piastre a 6 pozzetti, coltivate durante la notte e successivamente esposte alla sonda fluorescente (2 µM). Questa sonda mostra uno spostamento della fluorescenza dal rosso al verde in seguito all'ossidazione. Il rapporto tra fluorescenza verde e rossa è stato analizzato mediante microscopio confocale a scansione laser e software di analisi delle immagini. Il rapporto di fluorescenza verde/rosso riportato in grafico è stato chiaramente definito e utilizzato come indicatore quantitativo dei livelli di perossidazione lipidica24.
Rilevamento di Fe2+
Il livello intracellulare di ferro ferroso (Fe2⁺) è stato misurato utilizzando una sonda fluorescente per il ferro intracellulare. Le cellule C666-1 sono state incubate con una sonda fluorescente a 10 µM per 10 minuti. Dopo il lavaggio con PBS per rimuovere l'eccesso di sonda, le cellule sono state analizzate mediante microscopia a fluorescenza.
Analisi di docking molecolare
Il docking molecolare è un metodo computazionale fondamentale che facilita la progettazione di nuovi farmaci prevedendo l'affinità di legame e l'interazione tra un ligando e la sua proteina bersaglio attraverso la valutazione delle loro modalità di legame25. A partire dalla pagina web RCSB PDB (https://www.rcsb.org/), è stata ottenuta la struttura tridimensionale della KDM1A (ID PDB: 6NQU). Per la preparazione della struttura proteica della KDM1A, è stata rimossa l'acqua e sono stati eliminati i ligandi piccoli non rilevanti. La simulazione di docking molecolare è stata eseguita mediante software di docking molecolare utilizzando l'algoritmo genetico Lamarckiano, e la visualizzazione è stata effettuata impiegando software di visualizzazione molecolare26.
Analisi statistica
Tutti gli esperimenti sono stati eseguiti utilizzando almeno tre replicati biologici indipendenti e i risultati sono presentati come media ± deviazione standard (SD). L'analisi statistica è stata condotta mediante software di analisi statistica. Le differenze tra più gruppi sono state valutate mediante analisi della varianza unidirezionale (ANOVA) seguita dal test post-hoc di Tukey per confronti multipli. Un valore di P inferiore a 0,05 è stato considerato indicativo di una differenza statisticamente significativa.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
La ruscogenina inibisce selettivamente la vitalità e la proliferazione delle cellule del carcinoma nasofaringeo
Lo studio ha innanzitutto analizzato l'effetto della ruscogenina (Rus) sulla vitalità sia delle cellule epiteliali nasofaringee normali (NP69) che delle cellule di carcinoma nasofaringeo (NPC) (C666-1). Secondo i risultati del saggio CCK-8, il trattamento con Rus a concentrazioni di 10, 20 e 50 µM non ha mostrato tossicità significativa sulle cellule normali NP69. Al...
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Il carcinoma nasofaringeo (NPC) è una neoplasia grave caratterizzata da un'elevata prevalenza di metastasi, il che spiega l'urgente necessità di interventi più efficaci27. In questo studio si dimostra che la Ruscogenina (Rus), un prodotto naturale derivato dalla Radix ophiopogonis, esercita forti effetti antitumorali sulle cellule del NPC. Si conclude inoltre che la Rus impedisce la progressione del NPC inibendo la desmetilasi istonica KDM1A, con conseguente induzione di due diversi tipi ...
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in conflitto. Gli autori dichiarano che nessuno strumento di intelligenza artificiale generativa è stato utilizzato nella concezione dello studio, nella raccolta dei dati, nell'analisi dei dati o nella generazione delle figure. Le tecnologie assistite da intelligenza artificiale sono state utilizzate esclusivamente per piccole modifiche linguistiche e correzioni grammaticali durante la stesura del presente manoscritto. Gli autori si assumono piena responsabilità per il contenuto e l'integrità del lavoro pubblicato.
Non applicabile.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Sistema 7500 Fast Real-Time PCR | Applied Biosystems | 4351106 | Analisi di RT-qPCR |
| Kit per l'apoptosi Annexina-V-FITC/PI | BD Biosciences | 556547 | Rilevamento dell'apoptosi mediante citometria a flusso |
| Anticorpo anti-ACSL4 | Abcam | ab155282 | Anticorpo primario per Western blot |
| Anticorpo anti-Bax | Cell Signaling Technology (CST) | 5023 | Anticorpo primario per Western blot |
| Anticorpo anti-Bcl-2 | Cell Signaling Technology (CST) | 15071 | Anticorpo primario per Western blot |
| Anticorpi | |||
| Anticorpo anti-GPX4 | Abcam | ab125066 | Anticorpo primario per Western blot |
| Anticorpo anti-KDM1A (LSD1) | Cell Signaling Technology (CST) | 2139 | Anticorpo primario per Western blot |
| Anticorpo anti-Ki67 | Abcam | ab16667 | Anticorpo primario per Western blot |
| Anticorpo anti-MMP2 | Abcam | ab92536 | Anticorpo primario per Western blot |
| Anticorpo anti-MMP9 | Abcam | ab76003 | Anticorpo primario per Western blot |
| Anticorpo anti-PCNA | Cell Signaling Technology (CST) | 13110 | Anticorpo primario per Western blot |
| Anti-IgG coniugata con HRP, da coniglio | Cell Signaling Technology (CST) | 7074 | Anticorpo secondario |
| Anticorpo anti-SLC7A11 (xCT) | Abcam | ab175186 | Anticorpo primario per Western blot |
| Anticorpo anti-TFR1 | Abcam | ab84036 | Anticorpo primario per Western blot |
| Anti-βanticorpo anti-actina | Cell Signaling Technology (CST) | 4970 | Anticorpo primario di controllo del caricamento |
| Kit per saggi | |||
| Autodock 4.2 | Scripps Research Institute | N/A | Simulazione di docking molecolare |
| Kit per saggio proteico BCA | Beyotime Biotechnology | P0012 | Quantificazione delle proteine |
| sonda BODIPY 581/591 C11 | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) | D3861 | Rilevamento delle ROS lipidiche (2 μM) |
| linea cellulare C666-1 | iCell Bioscience Inc. | iCell-h378 | Linea cellulare di carcinoma nasofaringeo umano |
| Kit per il saggio dell'attività della caspasi-3 | Beyotime Biotechnology | C1115 | Valutazione dell'apoptosi |
| kit per saggio CCK-8 | Dojindo Molecular Technologies | CK04 | Misurazione della vitalità cellulare |
| Prodotti chimici & Reagenti | |||
| Citometro a flusso CytoFLEX | Beckman Coulter | CytoFLEX | Analisi dell'apoptosi |
| Reagente di rilevamento ECL | MilliporeSigma | WBKLS0500 | Visualizzazione tramite Western blot (Immobilon) |
| Attrezzatura | |||
| Siero fetale bovino (FBS) | Gibco (Thermo Fisher Scientific) | 10099141 | Integratore per coltura cellulare |
| GraphPad Prism 8.0 | GraphPad Software | N/A | Analisi statistica e rappresentazione grafica |
| software ImageJ | NIH | N/A | Analisi di densitometria delle immagini |
| Mezzo privo di siero per cheratinociti | iCell Bioscience Inc. | iCell-019 | Per la coltura cellulare di NP69 |
| Microscopio confocale a scansione laser | Carl Zeiss | LSM 880 | Imaging della fluorescenza con BODIPY C11 |
| Microscopio a luce / fluorescenza | Olympus | IX73 | Graffio del tessuto, Transwell & Imaging del Fe2+ |
| LightCycler 480 SYBR Green I Master | Roche Diagnostics | 4887352001 | PCR quantitativa in tempo reale |
| reagente Lipofectamine 2000 | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) | 11668019 | Reagente per la trasfezione cellulare |
| Matrigel | Corning | 356234 | Matrice della membrana basale per saggio di invasione |
| Lettore di micropiastre | Molecular Devices | SpectraMax M5 | Misurazione dell'assorbanza (405, 450, 532 nm) |
| linea cellulare NP69 | iCell Bioscience Inc. | iCell-h431 | Linea cellulare epiteliale nasofaringea umana normale |
| oe-KDM1A & plasmidi oe-NC | Shanghai GenePharma Co., Ltd. | Sintesi su misura | Plasmidi per la sovraespressione di KDM1A |
| sonda Phen Green SK (PGSK) | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) | P14312 | Rilevamento del Fe2+ intracellulare (10 μM) |
| Pymol 3.0 | Schrödinger | N/A | Visualizzazione del docking molecolare |
| kit di trascrizione inversa | Roche Diagnostics | 4379012001 | Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit |
| buffer di lisi RIPA | Solarbio (Pechino, Cina) | R0010 | Estrazione totale delle proteine |
| mezzo RPMI 1640 | iCell Bioscience Inc. | iCell-0002 | Per la coltura cellulare di C666-1 |
| Ruscogenina (Rus) | MedChemExpress (MCE) | HY-N0193 | Trattamento farmacologico, purezza ≥ 98% |
| Software | |||
| Kit per saggio TBARS | Cayman Chemical | 10009055 | Misurazione della perossidazione lipidica |
| Reagente TRizol | Invitrogen (Thermo Fisher Scientific)* | 15596026 | Estrazione dell'RNA totale |
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.