Questo protocollo fornisce un metodo standardizzato per eseguire la vesicostomia cutanea e la gestione postoperatoria della ferita nei ratti, consentendo un drenaggio urinario continuo a bassa pressione per la ricerca preclinica sulle lesioni del midollo spinale.
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Articolo metodologico
Vesicostomia nel modello di ratto per il drenaggio urinario a bassa pressione nella ricerca sulla vescica neurogena
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il ratto è il modello animale principale per la ricerca preclinica sul disordine neurogeno del tratto urinario inferiore (nLUTD) indotto da lesione del midollo spinale (SCI). Grazie alla sua somiglianza anatomica e funzionale con l'uomo, il ratto riproduce in modo fedele le principali conseguenze patologiche della SCI. Tuttavia, permane un'importante lacuna traduttiva: mentre la gestione standard della vescica nell'uomo si basa tipicamente su cateterizzazione continua o intermittente, approcci comparabili non sono realizzabili nei roditori. La pratica comune di esprimere manualmente la vescica genera pressioni intravesicali eccezionalmente elevate, che potrebbero introdurre un bias metodologico promuovendo autonomamente il rimodellamento patologico della vescica dopo la SCI. Questo protocollo descrive la vesicostomia cutanea nei ratti, insieme alla gestione postoperatoria della ferita, al fine di stabilire un drenaggio urinario continuo a bassa pressione per la ricerca preclinica sulla SCI. La vesicostomia cutanea — la creazione chirurgica di uno stomia tra la cupola della vescica e la parete addominale inferiore — permette un drenaggio urinario continuo, mantenendo così una via di drenaggio a bassa resistenza ed escludendo l'uretra. In questo modo, si possono evitare ritenzione urinaria eccessiva e alte pressioni intravesicali, avvicinandosi al concetto clinico di decompressione continua a bassa pressione utilizzato nella fase post-traumatica precoce con derivazione urinaria sovrapubica o transuretrale, pur riconoscendo che i normali meccanismi di stoccaggio e continenza vengono aboliti. Gli effetti terapeutici che altrimenti potrebbero essere oscurati dal ripetuto sovraffillimento e dall'espressione manuale della vescica ad alta pressione possono quindi essere rilevati più facilmente. Inoltre, la vesicostomia offre una strategia concettuale per mitigare i vincoli legati al sesso nella ricerca preclinica sulla SCI. La lunghezza uretrale notevolmente maggiore nei roditori maschi determina una maggiore resistenza al flusso, rendendo l'espressione manuale della vescica sostanzialmente più difficile e limitando di fatto la maggior parte degli studi preclinici ad animali femmina, nonostante la predominanza di pazienti maschi nei casi clinici di SCI. Come strategia alternativa di drenaggio, la vesicostomia ha il potenziale di ampliare i paradigmi sperimentali di gestione della vescica e migliorare la rilevanza traduttiva di futuri studi, mentre la sua fattibilità e i risultati nei ratti maschi dovranno essere stabiliti in lavori successivi dedicati.
Introduzione
Il corretto funzionamento della vescica dipende dalla funzione coordinata del muscolo vescicale e dello sfintere uretrale, realizzata attraverso una rete neuronale complessa che coinvolge il cervello, il sistema nervoso centrale (SNC) e il sistema nervoso periferico (SNP), consentendo il controllo cosciente del tratto urinario inferiore (TUI)1,2. La complessità di questi meccanismi e la loro circuitazione di tipo "interruttore"3 rende la funzione vescicale suscettibile a un'ampia gamma di lesioni e malattie. Di conseguenza, dopo una lesione del midollo spinale (LMS), quasi tutti i pazienti presentano alterazioni della sensibilità e del controllo vescicale4,5. Il termine vescica neurogena comprende un ampio spettro di disfunzioni che interessano l'immagazzinamento e/o lo svuotamento dell'urina, a seconda delle caratteristiche della lesione. In particolare, le lesioni suprasacrali provocano un'iperattività del detrusore associata a iperattività dello sfintere, spesso accompagnata dalla perdita di coordinamento tra i due—definita dissinergia detrusore-sfintere (DDS)—con conseguente ritenzione urinaria eccessiva e alte pressioni intravesicali6,7. Questa condizione può danneggiare gravemente il TUI, mettere a rischio l'integrità del tratto urinario superiore (TUS) e, se non trattata, portare a complicanze potenzialmente letali8. Il drenaggio urinario intermittente o continuo mediante cateterizzazione rappresenta attualmente lo standard di gestione della vescica nell'uomo dopo LMS, prevenendo il sovraffollamento vescicale attraverso una procedura sicura e priva di pressione9,10,11,12.
Poiché attualmente non esiste alcun trattamento efficace per il trauma midollare (SCI) e la gestione della disfunzione del tratto urinario neurogeno associata (nLUTD) è prevalentemente sintomatica, lo sviluppo di nuove strategie terapeutiche rimane una priorità di ricerca fondamentale. I modelli animali permettono di studiare i meccanismi della malattia a un livello di complessità paragonabile a quello umano, garantendo al contempo un'eccezionale omogeneità all'interno dei gruppi in condizioni sperimentali standardizzate13. Tra questi, il ratto rappresenta il modello preclinico principale, essendo la maggior parte degli studi sul trauma midollare condotta su questa specie14,15. Questa scelta riflette la sua somiglianza anatomica e funzionale con l'uomo, la risposta patologica riproducibile e la disponibilità diffusa. Tuttavia, permane un'importante lacuna traslazionale che potrebbe limitare l'interpretazione e la rilevanza clinica dei risultati riguardanti la vescica ottenuti dai modelli rodentici.
Sebbene i ratti sviluppino una nLUTD dopo lesione midollare (SCI) che presenta caratteristiche chiave osservate negli esseri umani, la gestione della vescica differisce sostanzialmente tra le specie. Poiché la cateterizzazione intermittente e altri approcci di drenaggio urinario permanente in genere non sono fattibili nei ratti, lo svuotamento urinario viene regolarmente ottenuto mediante espressione manuale della vescica16. Questa tecnica, analoga alla manovra di Credé17, generalmente non raccomandata nella pratica clinica, genera pressioni intravesicali marcatamente elevate. Di conseguenza, potrebbe introdurre un bias metodologico promuovendo in modo indipendente il rimodellamento patologico della vescica dopo SCI, riducendo così la rilevanza traslazionale dei risultati sperimentali o mascherando effetti terapeutici reali. Un'ulteriore limitazione deriva dalle differenze anatomiche legate al sesso. La lunghezza considerevolmente maggiore dell'uretra nei roditori maschi determina una resistenza al flusso in uscita più elevata, rendendo l'espressione manuale della vescica notevolmente più difficile e limitando di fatto la maggior parte degli studi preclinici su SCI agli animali femmine14. Considerando che la maggior parte dei casi clinici di SCI si verifica nei maschi18,19, questa discrepanza sottolinea ulteriormente la necessità di strategie alternative di gestione della vescica nei modelli preclinici di SCI nei ratti.
La vesicostomia cutanea prevede la creazione chirurgica di uno stoma tra la vescica e la parete addominale inferiore, avanzando la cupola vescicale fino alla cute e fissandola con punti di sutura. Questo consente un drenaggio urinario continuo mantenendo una via di scarico a bassa pressione e bypassando l'uretra. Utilizzata principalmente nei bambini con patologie complesse o quando le opzioni convenzionali di drenaggio non sono adatte, la vesicostomia cutanea offre una deviazione urinaria affidabile con minimi requisiti di manutenzione e un basso tasso di complicanze20,21,22. Oltre all’applicazione clinica, la vesicostomia è stata eseguita con successo anche in modelli roditori23,24,25,26, sebbene non nel contesto di lesioni del midollo spinale (SCI).
In uno studio recente16, abbiamo affrontato i limiti traduttivi associati all'espressione manuale della vescica nei modelli preclinici di lesione del midollo spinale (SCI) e abbiamo introdotto la vesicostomia nei ratti, insieme a un regime postoperatorio di gestione della ferita che ha permesso un follow-up prolungato. Il confronto diretto tra i due approcci di gestione della vescica ha dimostrato alterazioni strutturali maggiori della vescica dopo l'espressione manuale, mentre gli animali sottoposti a vesicostomia hanno mostrato valori più vicini a quelli dei controlli sani in diversi parametri. In particolare, lo spessore della parete vescicale è aumentato da una media di 768,26 µm (DS 28,05) nei ratti sani a 1181,94 µm (DS 289,56) due mesi dopo la lesione del midollo spinale con espressione manuale della vescica, con alcuni animali che hanno raggiunto valori fino a 1485 µm. Al contrario, i ratti gestiti mediante vesicostomia hanno mostrato uno spessore medio della parete vescicale di 963,08 µm (DS 68,82) e un solo animale ha superato i 1000 µm.
Questo studio fornisce un protocollo standardizzato per eseguire la vescicostomia nei ratti, inclusa la cura perioperatoria e la gestione delle ferite postoperatorie, al fine di ottenere un drenaggio urinario continuo a bassa pressione riproducibile nella ricerca preclinica su lesioni del midollo spinale (SCI). Il protocollo è stato concepito per facilitare la riproduzione della tecnica e aiutare i ricercatori a valutarne l'adeguatezza per studi in cui l'espressione manuale della vescica ad alta pressione potrebbe introdurre un bias metodologico o in cui l'inclusione di animali di sesso maschile è auspicabile. L'obiettivo di questo progetto era stabilire un protocollo standardizzato di vescicostomia per ratti con lesione del midollo spinale e valutarne la fattibilità e la sicurezza durante un periodo di follow-up di due mesi. Inoltre, è stato applicato un regime standardizzato di gestione delle ferite postoperatorie per minimizzare le complicanze cutanee e mantenere la pervietà dello stoma mediante calibrazione regolare.
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Protocollo
Sono state utilizzate ratti femmine Lewis di tre mesi di età per questo studio. Sebbene questo protocollo sia stato sviluppato principalmente per evitare l'espressione manuale della vescica dopo lesione midollare spinale (SCI), i dettagli della procedura di SCI da contusione non sono riportati qui, ma sono stati descritti in precedenza. Tutte le procedure sono state approvate dall'Ente giuridico governativo austriaco per la ricerca sugli animali (BMWFW-2022-0.062.928 e BMWFW-2023-0.848.340) e sono state condotte in conformità con le linee guida locali per l'utilizzo degli animali e le linee guida ARRIVE. Nel complesso, la procedura di vesicostomia richiede circa 15 min.
1. Preparazione preoperatoria
- Preparare un'area di lavoro sterile, comprensiva di microscopio o lenti di ingrandimento (ingrandimento 2,5–3,5×), tutti gli strumenti chirurgici necessari e un tappetino riscaldante.
- Riscaldare preventivamente il tappetino a una temperatura di 30°C–35°C (tiepida al tatto) e mantenere questa temperatura per tutta la durata dell'intervento. Sostituire il tappetino riscaldante se la temperatura scende al di sotto di 30°C durante procedure chirurgiche prolungate.
2. Preparazione dell'animale
- Anestesia
- Utilizzare un regime anestetico generale appropriato per l'intervento chirurgico.
- Preparare una miscela anestetica fresca contenente medetomidina (0,15 mg/kg), midazolam (2 mg/kg) e fentanil (0,005 mg/kg) in base alla tabella di calcolo fornita (Tabella 1). Selezionare la dose anestetica e il corrispondente volume finale di iniezione in base al peso corporeo più vicino al peso esatto dell'animale, e somministrare la miscela per via intramuscolare utilizzando una siringa da 1 mL dotata di ago da 27G.
- Preparazione chirurgica
- Una volta anestetizzato il ratto, rasare l'addome inferiore fino alla regione vaginale.
- Sciacquare il campo operatorio due volte con acqua calda e sapone.
- Sciacquare il campo operatorio due volte con acqua calda pulita.
- Disinfettare il campo operatorio due volte con una miscela di iodopovidone al 7,5% e alcol al 70%, includendo la regione vaginale.
- Somministrare 1,5 mg di enrofloxacina e 0,2 mg di meloxicam a lunga durata, sciolti in 0,2 mL di cloruro di sodio (NaCl) 0,9% preriscaldato, per via sottocutanea.
- Somministrare 3 mL di NaCl 0,9% preriscaldato per via sottocutanea per compensare la perdita di liquidi.
- Applicare un unguento oftalmico al dexpanthenolo al 2% su entrambi gli occhi per prevenire la desiccazione corneale.
- Posizionare l'animale in posizione supina sul tappetino riscaldante preriscaldato e regolare il microscopio o gli occhiali di ingrandimento.
- Verificare un adeguato piano anestetico chirurgico eseguendo un test di ritrazione nocicettiva su entrambi gli arti posteriori prima di iniziare l'intervento.
- Se il riflesso di ritrazione è ancora presente, attendere 2 minuti e ripetere il test di ritrazione nocicettiva. Continuare questa procedura a intervalli di 2 minuti finché il riflesso non scompare.
| Peso corporeo (g) | Medetomidina (1 mg/mL), mL | Midazolam (5 mg/mL), mL | Fentanil (0,05 mg/mL), mL | Volume totale (mL) |
| 100 | 0.015 | 0.04 | 0.010 | 0.065 |
| 125 | 0.019 | 0.05 | 0.013 | 0.082 |
| 150 | 0.023 | 0.06 | 0.015 | 0.098 |
| 175 | 0.026 | 0.07 | 0.018 | 0.114 |
| 200 | 0.030 | 0.08 | 0.020 | 0.130 |
| 225 | 0.034 | 0.09 | 0.023 | 0.147 |
| 250 | 0.037 | 0.10 | 0.025 | 0.163 |
| 275 | 0.041 | 0.11 | 0.028 | 0.179 |
| 300 | 0.045 | 0.12 | 0.030 | 0.195 |
| 325 | 0.049 | 0.13 | 0.033 | 0.212 |
| 350 | 0.052 | 0.14 | 0.035 | 0.227 |
| 375 | 0.056 | 0.15 | 0.038 | 0.244 |
| 400 | 0.060 | 0.16 | 0.040 | 0.260 |
| 425 | 0.063 | 0.17 | 0.043 | 0.276 |
| 450 | 0.067 | 0.18 | 0.045 | 0.292 |
| 475 | 0.071 | 0.19 | 0.048 | 0.309 |
| 500 | 0.074 | 0.20 | 0.051 | 0.325 |
| 525 | 0.078 | 0.21 | 0.053 | 0.341 |
| 550 | 0.082 | 0.22 | 0.055 | 0.357 |
| 575 | 0.086 | 0.23 | 0.058 | 0.374 |
| 600 | 0.089 | 0.24 | 0.060 | 0.389 |
Tabella 1: Dosaggio dell'anestesia intramuscolare per ratto. Volumi di medetomidina (1 mg/mL), midazolam (5 mg/mL) e fentanil (0,05 mg/mL) necessari per preparare la miscela anestetica intramuscolare per ratti del peso di 100–600 g. Il volume totale da iniettare corrisponde alla somma dei volumi individuali dei farmaci.
3. Preparazione della vescica
- Per consentire una vesicostomia senza tensione, effettuare un'incisione cutanea longitudinale mediana di 3 mm utilizzando una lama di bisturi n. 11, stabilizzando la cute con pinze ad uncino (Adson), a circa due terzi della distanza tra la seconda e la terza coppia di capezzoli (contati da caudale a craniale). Questa incisione corrisponde al livello della cupola vescicale.
- Individuare i muscoli addominali sottocutanei e la linea alba. Incidere la fascia esterna con il bisturi, dissezionare in modo ottuso i diversi strati muscolari addominali utilizzando forbici microchirurgiche, quindi incidere con attenzione il peritoneo e aprire la cavità addominale usando pinze microchirurgiche ad uncino.
- Per identificare la vescica all'interno della cavità addominale, sollevare delicatamente entrambi i lembi degli strati muscolari addominali all'incisione per migliorare la visualizzazione e localizzare la vescica al di sotto del tessuto adiposo. Se non è possibile identificare la vescica, eseguire una cateterizzazione transuretrale e ripetere la localizzazione.
4. Posizionamento del catetere transuretrale
- Riempire la vescica attraverso un catetere transuretrale per facilitare l'identificazione della vescica.
- Applicare del gel lubrificante su un catetere venoso periferico da 24G (senza mandrino) e sull'orifizio uretrale. Sollevare la cute periuretrale con pinze atraumatiche a piccoli denti e inserire il catetere a circa 110° per favorire un posizionamento non traumatico.
- Avanzare il catetere in modo atraumatico attraverso l'uretra fino al livello dell'osso pubico. Abbassare il catetere fino a renderlo parallelo al corpo dell'animale e continuare ad avanzarlo delicatamente all'interno della vescica. Se si incontra resistenza a circa 1 cm all'interno dell'uretra, estrarre completamente il catetere e ripetere l'inserimento. Se il catetere avanza senza difficoltà per almeno 2 cm, procedere con il riempimento della vescica.
- Confermare il corretto posizionamento del catetere infondendo lentamente cloruro di sodio nella vescica senza incontrare resistenza. Se il posizionamento del catetere non ha successo, la siringa si blocca e un leggero ritiro del catetere provoca fuoriuscita di cloruro di sodio dall'uretra.
5. Posizionamento della vescica
- Riempire la vescica con un massimo di 400 µL di NaCl 0,9% preriscaldato. Assicurarsi che il riempimento avvenga senza un aumento della pressione di infusione. Monitorare visivamente il riempimento della vescica e confermare che questa rimanga centrata all'interno della cavità addominale. Notare che il volume fisiologico della vescica dipende dall'età, dal peso corporeo e dalla linea animale ed è soggetto a variazioni. Per ratti Lewis di 12 settimane (LEW/Crl) del peso di 200–230 g, il volume vescicale fisiologico massimo è di circa 500 µL. Lasciare il catetere transuretrale in sede e riempire nuovamente la vescica se necessario.
- Ispezionare la vescica e identificare il sito previsto per la vesicostomia al di sotto della cupola vescicale, sulla parete ventrale della vescica.
- Posizionare due punti di sutura di sostegno superficiali utilizzando Vicryl rivestito 6-0 alle posizioni alle 3 e alle 9 in corrispondenza dei lati del sito di incisione previsto. Fissare i capi della sutura con delle pinze per mantenere la posizione della vescica.
6. Vesicostomia della vescica
- Afferrare con attenzione la cupola della vescica con pinzette microchirurgiche ad uncino ed eseguire un'incisione longitudinale di 3 mm utilizzando una lama di bisturi n. 11. Assicurarsi che l'incisione attraversi tutti gli strati della parete vescicale per consentire un immediato drenaggio dell'urina.
- Ispezionare l'incisione e, se necessario, allargarla con forbici microchirurgiche fino a circa 3 mm.
- Utilizzare i punti di trattenuta per posizionare la vescica in preparazione alla sutura. Rimuovere il catetere transuretrale.
- Iniziare la sutura con Vicryl rivestito 6-0 nella posizione delle 12, facendo passare il filo dal lato luminale della parete vescicale attraverso la cute, escludendo lo strato muscolare. Posizionare le suture successive alle posizioni delle 6, 8, 10, 2 e 4 fino a quando l'apertura vescicale non è completamente avvicinata alla cute. Rimuovere i punti di trattenuta una volta che la vescica è saldamente fissata.
- Considerare completata la vesicostomia quando la mucosa vescicale è completamente aderente alla cute addominale senza evidenti spazi vuoti e quando l'apertura della vesicostomia di 3–5 mm può essere facilmente intubata con un bastoncino calibratore.
- Posizionare quattro suture in filo d'acciaio inossidabile a una distanza di circa 4–5 mm dal margine dello stoma per scoraggiare l'animale dal leccare o mordere la sede chirurgica. Far passare ciascun filo attraverso la cute utilizzando un ago da 20G, fissarlo con due semplici nodi bloccanti e tagliare le estremità del filo a circa 2 mm.
7. Calibrazione e medicazione della ferita
- Pulire la pelle circostante con acqua pulita, seguito da un'incubazione di 10 min con un agente antisettico compatibile con le mucose, come una soluzione allo 0,2% di ipoclorito di sodio.
- Inserire un'apposita guida sterile di calibrazione di circa 6–11 Charrière (1 Charrière = diametro di circa 0,33 mm) nella vesicostomia per valutare il diametro dello stoma.
- Utilizzare una guida di calibrazione che entri agevolmente, riempiendo completamente il lume dello stoma senza causare invaginazione interna dei margini della ferita.
- Applicare abbondantemente adesivo cutaneo topico sulla pelle rasata dell'addome, sul tessuto circostante la vesicostomia e sull'apertura stomiale.
- Ruotare continuamente la guida di calibrazione all'interno della vesicostomia fino a quando l'adesivo non si sarà asciugato (circa 10 s), preferibilmente con l'aiuto di una seconda persona, per prevenire la chiusura della vesicostomia. Immagini rappresentative della vesicostomia immediatamente dopo l'intervento chirurgico e dopo la guarigione sono mostrate in Figure 1.
Figura 1. Aspetto rappresentativo della vescicostomia immediatamente dopo l'intervento chirurgico e dopo la guarigione. Immagini rappresentative del sito di vescicostomia immediatamente dopo l'intervento chirurgico e la medicazione della ferita al giorno post-lesione (DPI) 0 (a sinistra) e dopo la guarigione al DPI 53, poco prima del termine del periodo di follow-up di 56 giorni (2 mesi) (a destra). L'insetto mostra un'immagine ad ingrandimento maggiore della vescicostomia immediatamente dopo l'intervento chirurgico. Le barre di scala corrispondono a 1 cm (immagini di panoramica) e 2 mm (insetto). Cliccare qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.
8. Antagonismo
- Antagonizzare l'anestesia generale (non prima di 1 h dopo l'amministrazione dell'anestetico) somministrando sottocutaneamente una miscela di atipamezolo (0,76 mg/kg) e flumazenil (0,2 mg/kg) utilizzando una siringa da 1 mL con ago da 27G secondo la Tabella 2.
- Per consentire un recupero senza stress, posizionare l'animale nella sua gabbia di provenienza prima di somministrare la miscela di farmaci antagonisti. Monitorare l'animale ininterrottamente fino al completo recupero della coscienza. Mantenere la gabbia sotto una lampada riscaldante in una stanza di recupero separata per 3 h.
| Peso corporeo (g) | Atipamezolo (5 mg/mL), mL | Flumazenil (0,1 mg/mL), mL | Volume totale (mL) |
| 100 | 0.015 | 0.20 | 0.215 |
| 125 | 0.019 | 0.25 | 0.269 |
| 150 | 0.023 | 0.30 | 0.323 |
| 175 | 0.026 | 0.35 | 0.376 |
| 200 | 0.030 | 0.40 | 0.430 |
| 225 | 0.034 | 0.45 | 0.484 |
| 250 | 0.037 | 0.50 | 0.537 |
| 275 | 0.041 | 0.55 | 0.591 |
| 300 | 0.045 | 0.60 | 0.645 |
| 325 | 0.049 | 0.65 | 0.699 |
| 350 | 0.052 | 0.70 | 0.752 |
| 375 | 0.056 | 0.75 | 0.806 |
| 400 | 0.060 | 0.80 | 0.860 |
| 425 | 0.063 | 0.85 | 0.913 |
| 450 | 0.067 | 0.90 | 0.967 |
| 475 | 0.071 | 0.95 | 1.021 |
| 500 | 0.074 | 1.00 | 1.074 |
| 525 | 0.078 | 1.05 | 1.128 |
| 550 | 0.082 | 1.10 | 1.182 |
| 575 | 0.086 | 1.15 | 1.236 |
| 600 | 0.089 | 1.20 | 1.289 |
Tabella 2: Dosaggio dell'antagonista anestetico per via sottocutanea per ratto. Volumi di atipamezolo (5 mg/mL) e flumazenil (0,1 mg/mL) necessari per preparare la miscela antagonista anestetica per via sottocutanea per ratti del peso compreso tra 100 e 600 g. Il volume totale di iniezione corrisponde alla somma dei volumi individuali dei farmaci.
9. Smaltimento dei rifiuti
- Smaltire gli oggetti taglienti (ad esempio aghi delle siringhe e residui di filo d'acciaio inossidabile) in un contenitore per materiali taglienti approvato. Smaltire tutti i rifiuti biologici e chirurgici secondo le normative istituzionali di biosicurezza.
10. Gestione Postoperatoria
- Cure postoperatorie
- Somministrare enrofloxacina (1,5 mg, una volta al giorno, per via sottocutanea) e meloxicam a lunga durata (0,2 mg, due volte al giorno, per via sottocutanea) per i primi 5 giorni dopo l'intervento chirurgico. Introdurre supplementi di NaCl 0,9% preriscaldata per via sottocutanea secondo necessità per compensare la perdita di liquidi.
- Continuare con enrofloxacina a basso dosaggio (0,5 mg, una volta al giorno, per via sottocutanea) per tutto il periodo di follow-up.
- Riprendere o intensificare il trattamento antibiotico e/o analgesico se durante gli esami giornalieri si osservano segni di dolore o infezione. In tali casi, somministrare le stesse dosi di antibiotico e analgesico utilizzate durante i primi 5 giorni postoperatori.
- Iniziare un ciclo di antibiotici di 5 giorni alla dose standard se si verificano cambiamenti nelle caratteristiche urinarie (ad esempio ematuria o urine torbide che persistono per 3 giorni) e/o se cambia lo stato della cute circostante la vescicostomia (ad esempio arrossamento cutaneo che persiste per 2 giorni senza miglioramento). Riprendere il trattamento analgesico durante i periodi di ematuria e/o all'insorgenza della formazione di placche cutanee, e proseguire il trattamento finché i sintomi non si risolvono.
- Eseguire la calibrazione della vescicostomia ogni giorno. Iniziare con un bastoncino di calibrazione almeno di una misura più piccola rispetto al diametro stomiale precedentemente registrato e applicare gel lubrificante prima dell'inserimento. Se il bastoncino entra agevolmente, ripetere la procedura con la misura successiva più grande e registrare la misura maggiore che entra agevolmente.
- Ridurre la frequenza della calibrazione a ogni due giorni non prima di 3 settimane dall'intervento e solo se la misura di calibrazione è rimasta stabile per almeno 3 giorni consecutivi.
- Quando l'adesivo cutaneo inizia a staccarsi (tipicamente 3–5 giorni dopo l'intervento), pulire la cute circostante ogni giorno con un agente antisettico compatibile con la mucosa, come soluzione di ipoclorito di sodio allo 0,04%, seguito dall'applicazione di un film protettivo idratante a base oleosa. Valutare la guarigione della ferita in base al sistema di punteggio per le ferite e all'aspetto rappresentativo delle ferite mostrato in Figura 2A,B.
- Rimuovere i fili di acciaio inossidabile 7 giorni dopo l'intervento chirurgico.
- Monitoraggio postoperatorio
- Monitorare attentamente tutti gli animali per tutto il periodo postoperatorio.
- Esaminare ogni animale almeno due volte al giorno per rilevare segni di dolore o disagio secondo la scala Rat Grimace Scale27, gonfiore anomalo, sanguinamento, altri cambiamenti nel sito chirurgico e secrezione eccessiva di porfirina. Valutare la vescicostomia utilizzando il sistema di punteggio per le ferite mostrato in Figura 2A,B e registrare la misura di calibrazione come mostrato in Figura 2C.
- Tenere registrazioni dettagliate per ogni animale e documentare regolarmente i seguenti parametri:
- Peso corporeo (rispetto al valore preoperatorio)
- Condizione generale (pelo, occhi, baffi, orecchie e respirazione)
- Comportamento durante la deambulazione (ad esempio andatura rigida o instabile)
- Caratteristiche urinarie (ad esempio discolorazione o odore forte)
- Misura di calibrazione della vescicostomia
- Condizione della cute circostante la vescicostomia
Figura 2. Guarigione postoperatoria della ferita e calibrazione della vescicostomia durante il follow-up. (A) Punteggio della ferita del sito di vescicostomia durante il periodo di follow-up di 7 settimane. (B) Immagini rappresentative dei punteggi di ferita da 1 a 4, che illustrano l'evoluzione dall'aspetto normale della ferita alla formazione di ulcere. Gli animali con lesioni cutanee aperte sono stati esclusi secondo i criteri predefiniti dello studio. Le barre della scala = 5 mm. (C) Dimensione della calibrazione della vescicostomia misurata in Charrière durante il periodo di follow-up. I dati nei pannelli A e C sono riportati come media ± deviazione standard (DS). Cliccare qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.
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Risultati
Un totale di 18 ratti sono stati sottoposti a vesicostomia. Per stabilire la tecnica, l'intervento è stato inizialmente eseguito su sei animali senza lesione del midollo spinale (SCI) per verificarne la sicurezza e fattibilità di base e per valutare la gestione postoperatoria in animali sani. Successivamente, la vesicostomia è stata eseguita in combinazione con una lesione midollare contusiva toracica al livello vertebrale T8/T9 su 12 animali. Di questi, sei animali sono stati utilizzati per perfezionare ulteriormente il...
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Discussione
Questo protocollo fornisce la prima descrizione dettagliata della vesicostomia nei roditori come metodo per il drenaggio urinario continuo a bassa pressione dopo lesione midollare (SCI). Oltre alla descrizione della tecnica operatoria, forniamo un protocollo completo di gestione postoperatoria delle ferite, fondamentale per ottenere un follow-up prolungato e con successo. Poiché il ratto è un modello animale di piccole dimensioni e l'obiettivo è creare un'apertura vescicale minima per limitare influenze confondenti e fav...
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Dichiarazioni
Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interessi.
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano la specialista in medicina delle ferite Gerlinde Wiesinger per il prezioso contributo all'ottimizzazione del protocollo di gestione delle ferite.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Cloruro di sodio 0,9% | Fresenius Kabi, Graz, Austria | — | Soluzione salina sterile |
| Ago ipodermico 20G | Servoprax, Wesel, Germania | REF L1 0201 | Utilizzato per il posizionamento del filo di acciaio inossidabile |
| Catetere venoso periferico 24G | B. Braun, Sempach, Svizzera | REF 4254074B | Utilizzato come catetere transuretrale (senza stiletto) |
| Ago ipodermico 27G | B. Braun, Melsungen, Germania | REF 4657705 | Utilizzato per iniezioni |
| Chirurgica riassorbibile 6-0 Vicryl rivestita | Ethicon, Porto Rico, USA | REF V134H | Utilizzata per la fissazione della vescica |
| Soluzione irrigante per ferite Actimaris forte | ActiMaris, Appenzell, Svizzera | REF 30350 | Soluzione di ipoclorito di sodio allo 0,2% |
| Soluzione irrigante per ferite Actimaris sensitive | ActiMaris, Appenzell, Svizzera | REF 30300 | Soluzione di ipoclorito di sodio allo 0,04% |
| Atipamezolo (Antisedan 5 mg/mL) | Orion Pharma, Espoo, Finlandia | Nessun numero di catalogo disponibile | Antagonista anestetico |
| Aste di calibrazione della vescica (6–11 Charrière) | Nessun produttore disponibile | Nessun numero di catalogo disponibile | Utilizzate per la calibrazione della vesicostomia |
| Lama di bisturi in acciaio al carbonio n. 11 | Aesculap, Tuttlingen, Germania | REF BB511 | Lama di bisturi |
| Unghento oftalmico di dexpanthenolo (2%) | Fresenius Kabi, Graz, Austria | REF RA4302436 | Unghento oculare |
| Enrofloxacina (Baytril 25 mg/mL) | Elanco, Monheim, Germania | Nessun numero di catalogo disponibile | Antibiotico |
| Ratte femmine Lewis (12 settimane di età) | Charles River Laboratories, Sulzfeld, Germania | — | Animali sperimentali |
| Fentanil (50 µg/mL) | hameln pharma, Hameln, Germania | Nessun numero di catalogo disponibile | Anestetico |
| Flumazenil (0,1 mg/mL) | Fresenius Kabi, Graz, Austria | Nessun numero di catalogo disponibile | Antagonista anestetico |
| Pad riscaldante | Lenric, Littlehampton, Regno Unito | Nessun numero di catalogo disponibile | Utilizzato per mantenere la temperatura corporea |
| Pinze ad uncino (Adson) | Fine Science Tools, Heidelberg, Germania | 11019-12 | Manipolazione dei tessuti |
| Pinze microchirurgiche ad uncino | Medicon, Tuttlingen, Germania | 13.71.62 | Pinze microchirurgiche |
| Meloxicam a lunga durata (Metacam 5 mg/mL) | Boehringer Ingelheim, Ingelheim am Rhein, Germania | Nessun numero di catalogo disponibile | Analgesico |
| Gel lubrificante (Cathejell C) | Montavit, Absam, Austria | Nessun numero di catalogo disponibile | Utilizzato per la cateterizzazione transuretrale e la calibrazione della vesicostomia |
| Medetomidina (Sedator 1 mg/mL) | Dechra, Aulendorf, Germania | Nessun numero di catalogo disponibile | Anestetico |
| Microscopio o occhiali chirurgici di ingrandimento (2,5–3,5×) | Evident Europe GmbH, Vienna, Austria | Olympus SZ61 | Utilizzato durante la microchirurgia |
| Forbici microchirurgiche (forbici di Bonn) | Fine Science Tools, Heidelberg, Germania | 14084-08 | Forbici microchirurgiche |
| Emostato tipo zanzara | Fine Science Tools, Heidelberg, Germania | 13009-12 | Utilizzato per fissare i punti di trattenuta |
| Film protettivo idrorepellente a base di olio | Panin, Rovigo, Italia | Nessun numero di catalogo disponibile | Protezione cutanea postoperatoria |
| Soluzione di iodopovidone (7,5%) | B. Braun, Melsungen, Germania | Nessun numero di catalogo disponibile | Disinfettante cutaneo |
| Manico di bisturi n. 3 | Fine Science Tools, Heidelberg, Germania | 10003-12 | Compatibile con lama di bisturi n. 11 |
| Pinze a denti piccole | Fine Science Tools, Heidelberg, Germania | 11050-10 | Utilizzate per la manipolazione della cute periuretrale |
| Filo di acciaio inossidabile | Vömel, Kronberg, Germania | Nessun numero di catalogo disponibile | Utilizzato per punti di protezione con filo metallico |
| Siringa da 1 mL | Becton Dickinson, Vienna, Austria | REF 303172 | Utilizzata per la somministrazione di anestetici e antagonisti |
| Adesivo cutaneo topico | Ethicon, Porto Rico, USA | REF AHVM12 | Adesivo cutaneo |
Riferimenti
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