Articolo di ricerca

L'inibizione di LINC00707 attenua l'infiammazione e lo stress ossidativo nei microglia BV2 stimolati con LPS tramite l'asse miR-145-5p/TRAF6 nel danno midollare

77 visualizzazioni

⸱

11 settembre 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Nursing, Zhangjiakou First Hospital, 2Department of Orthopedics, Zhangjiakou First Hospital, 3Department of Pediatrics, Zhangjiakou First Hospital

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

L'espressione plasmatica di LINC00707 è aumentata nella lesione del midollo spinale e promuove l'infiammazione e lo stress ossidativo mediati dai microglia attraverso l'asse di segnalazione miR-145-5p/TRAF6. L'insonorizzazione di LINC00707 attenua queste risposte patologiche, evidenziandone il potenziale come bersaglio terapeutico.

Abstract

La lesione del midollo spinale (SCI) provoca disabilità permanenti, riduce profondamente il benessere e comporta un notevole onere socioeconomico. Questo studio ha indagato il ruolo di LINC00707 nella SCI attraverso la regolazione dell'asse di segnalazione miR-145-5p/TRAF6. Campioni plasmatici di 30 soggetti sani e di 75 pazienti con SCI sono stati analizzati per l'espressione di LINC00707, miR-145-5p e TRAF6 mediante RT-qPCR. Sono state valutate le associazioni tra i livelli plasmatici di LINC00707 e i fattori pro-infiammatori nei pazienti con SCI. Le cellule microgliali BV2 sono state esposte a 100 ng/mL di LPS, e sono stati misurati i fattori correlati all'infiammazione e allo stress ossidativo. Le interazioni molecolari sono state valutate mediante saggio del reporter a doppia luciferasi. L'analisi di regressione logistica è stata utilizzata per identificare i fattori associati all'espressione di LINC00707. I livelli plasmatici di LINC00707 e TRAF6 erano aumentati nei pazienti con SCI, mentre i livelli di miR-145-5p erano ridotti. I livelli plasmatici di LINC00707 erano positivamente correlati ai livelli plasmatici dei fattori infiammatori. LINC00707 agiva da spugna molecolare per miR-145-5p, e TRAF6 era un gene bersaglio di miR-145-5p. L'inibizione di LINC00707 ha ridotto i fattori infiammatori, le sostanze pro-ossidative e i livelli di mRNA di TRAF6 nelle cellule BV2. L'inibizione di miR-145-5p ha prodotto effetti opposti. Questi risultati suggeriscono che un'espressione elevata di LINC00707 è associata alla gravità della SCI e che il silenziamento di LINC00707 potrebbe attenuare l'infiammazione e lo stress ossidativo mediati dalle microglia regolando l'asse di segnalazione miR-145-5p/TRAF6.

Introduzione

La lesione del midollo spinale (SCI) è una condizione traumatica che danneggia il midollo spinale, una componente fondamentale del sistema nervoso centrale. L'SCI interrompe direttamente i percorsi di conduzione neurale tra il midollo spinale e il cervello, causando gravi deficit nelle funzioni motorie, sensoriali e autonomiche1,2. Studi epidemiologici hanno riportato un'incidenza annuale di circa 5 casi ogni 100.000 individui, con una mortalità correlata alla malattia che raggiunge fino al 16,7%3,4. Un'indagine canadese ha stimato che il costo della riabilitazione durante l'intera vita per ogni paziente con SCI possa arrivare fino a 336.000 dollari statunitensi5. L'elevata incidenza, la mortalità e i costi sostanziali associati alla diagnosi, al trattamento e alla riabilitazione rendono l'SCI una sfida clinica importante che richiede strategie terapeutiche migliorate.

La progressione patologica del danno midollare (SCI) comprende due fasi: lesione primaria e lesione secondaria. La lesione primaria deriva da una compressione meccanica traumatica o dalla rottura del tessuto midollare, mentre la lesione secondaria è mediata da processi patologici, tra cui l'infiammazione e lo stress ossidativo6,7. In condizioni fisiologiche, la neuroinfiammazione mediata dai microglia contribuisce all'omeostasi del sistema nervoso centrale8,9,10. Tuttavia, dopo una lesione midollare, i microglia si attivano in modo eccessivo e rilasciano elevate quantità di mediatori pro-infiammatori11,12. Questi mediatori inducono una produzione eccessiva di specie reattive dell'ossigeno (ROS), causando danno neuronale e morte cellulare, e aggravando la lesione midollare secondaria13,14. Pertanto, inibire l'attivazione eccessiva dei microglia e interrompere la cascata infiammatoria rappresentano strategie terapeutiche promettenti per favorire il recupero neurologico e migliorare gli esiti dopo una lesione midollare.

Gli RNA non codificanti lunghi (lncRNA) sono una classe di RNA non codificanti più lunghi di 200 nucleotidi che non possiedono potenziale di codifica proteica15. Inizialmente considerati un "rumore" trascrizionale, gli lncRNA sono ora riconosciuti come importanti regolatori di diversi processi fisiologici e patologici16. Studi recenti hanno dimostrato che gli lncRNA svolgono ruoli fondamentali nel danno neuronale. L'RNA non codificante lungo intergenico 707 (LINC00707) si è affermato come un importante regolatore dei disturbi del sistema nervoso. Studi precedenti hanno riportato che LINC00707 aggrava la lesione cerebrale traumatica potenziando l'infiammazione mediata dai microglia17. Inoltre, Zhu et al. hanno dimostrato che l'abbattimento di LINC00707 attenuava significativamente l'infiammazione e l'apoptosi indotte dal lipopolisaccaride (LPS) nelle cellule PC1218. Questi risultati forniscono una base teorica preliminare per esplorare il coinvolgimento di LINC00707 nella lesione del midollo spinale (SCI). Tuttavia, non è ancora chiaro se LINC00707 regoli l'infiammazione mediata dai microglia durante la SCI.

Gli lncRNA agiscono come spugne molecolari attraverso il meccanismo dell'RNA endogeno competitivo (ceRNA), sequestrando i microRNA (miRNA) e regolando l'espressione dei geni bersaglio a valle19. Questo schema regolatorio è ampiamente coinvolto nella patogenesi di numerose malattie. In particolare, miR-145-5p risulta significativamente ridotto nei tessuti di lesione midollare (SCI)20 e durante il danno indotto da LPS21, e la sua sovraespressione attenua efficacemente le risposte infiammatorie e da stress ossidativo nei microglia22. Anche il fattore associato al recettore del fattore di necrosi tumorale 6 (TRAF6) svolge un ruolo fondamentale nella patologia della SCI23,24,25. Tuttavia, non è ancora chiaro se LINC00707, miR-145-5p e TRAF6 esercitino funzioni regolatorie coordinate nella SCI.

Nel presente studio, l'espressione di LINC00707 è risultata significativamente aumentata nelle cellule microgliali stimolate con LPS. Pertanto, abbiamo ipotizzato che LINC00707 possa agire come un regolatore pro-infiammatorio nella microglia e che il suo silenziamento possa attenuare la risposta neuroinfiammatoria, migliorando così la progressione patologica del danno al midollo spinale (SCI). Questo studio ha indagato se LINC00707 regola le risposte infiammatorie della microglia e contribuisce alla patogenesi della SCI.

Protocollo

Lo studio è stato approvato dal Comitato Etico dell'Ospedale Zhangjiakou First (numero di approvazione 2024-KY-18). A tutti i partecipanti sono stati illustrati gli obiettivi dello studio e i potenziali rischi, e hanno fornito consenso informato scritto prima dell'arruolamento. Campioni di sangue venoso sono stati raccolti da soggetti sani durante esami fisici di routine e da pazienti con lesione del midollo spinale immediatamente dopo il ricovero in ospedale. Le analisi di laboratorio sono state eseguite dal laboratorio clinico dell'ospedale. Gli strumenti di ricerca utilizzati in questo protocollo sono elencati nella Tabella dei Materiali.

1. Soggetti
Un totale di 75 pazienti con lesione del midollo spinale (SCI) sono stati reclutati presso l'Ospedale di Zhangjiakou tra gennaio 2023 e gennaio 2025. I criteri di inclusione erano una lesione del midollo spinale confermata mediante tomografia computerizzata (TC) o risonanza magnetica (RM) e un intervallo di tempo tra il trauma e il ricovero ospedaliero ≤ 12 h. I criteri di esclusione comprendevano anamnesi di trauma o intervento chirurgico al midollo spinale o al cervello nei precedenti 6 mesi; malattia cardiovascolare grave, inclusi infarto miocardico o aritmia; gravidanza o allattamento; e tumori maligni, alterata funzionalità epatica o renale, grave malattia cerebrovascolare o malattie infettive.

Secondo gli standard di classificazione neurologica dell'American Spinal Injury Association (ASIA)26, 75 pazienti con lesione midollare sono stati classificati in base alla funzione neurologica normale (n = 21), lesione midollare incompleta (n = 36) e lesione midollare completa (n = 18). La distribuzione dei siti di lesione è stata la seguente: cervicale, 36,0%; toracica, 30,7%; e lombare, 33,3%. Sono stati reclutati in modo casuale 30 individui sani, abbinati alla popolazione in studio, per costituire il gruppo di controllo. Per tutti i partecipanti è stata raccolta l'informazione clinica di base. I criteri di inclusione per gli individui sani erano assenza di anamnesi di trauma o intervento chirurgico al midollo spinale o al cervello, o di disturbi neurologici; assenza di anamnesi di malattie infiammatorie croniche, disturbi autoimmuni o neoplasie; assenza di malattie cardiovascolari, epatiche o renali gravi; assenza di infezioni acute o croniche nelle precedenti 4 settimane; assenza di gravidanza o allattamento; e abbinamento per età e sesso al gruppo con lesione midollare.

La misura dell'Indipendenza Funzionale (FIM) è stata utilizzata per valutare l'indipendenza funzionale nelle attività quotidiane. Il punteggio FIM massimo è 126. I punteggi relativi alla sensibilità tattile, all'acmestesia e al funzionamento motorio sono stati impiegati per valutare le funzioni sensoriali e motorie. I punteggi massimi per la sensibilità tattile e per l'acmestesia erano 112, mentre il punteggio motorio massimo era 100. Punteggi più bassi indicano un deficit neurologico più grave.

2. Coltura cellulare, costruzione del modello e trasfezione
Le cellule microgliali murine immortalizzate BV2 sono state ottenute dal Centro di Risorse Cellulari dell'Istituto di Biotecnologia di Shanghai. Le cellule sono state coltivate in terreno Dulbecco modificato di Eagle ad alto contenuto di glucosio (DMEM) integrato con siero fetale bovino (FBS) al 10%, penicillina (100 U/mL) e streptomicina (100 U/mL). Le cellule sono state mantenute a 37 °C in un incubatore umidificato contenente 5% di CO₂.

Per la costruzione del modello, le cellule BV2 sono state stimolate con 0, 10, 20, 50, 100, 150 o 200 ng/mL di lipopolisaccaride (LPS) per 24 h. La concentrazione ottimale di LPS è stata selezionata in base ai risultati sperimentali.

Per la trasfezione, le cellule BV2 sono state seminate in piastre a 6 pozzetti e trasfettate una volta raggiunta la confluenza appropriata. È stato utilizzato un reagente di trasfezione in una quantità di 1,5 µL/pozzetto seguendo le istruzioni del produttore. Dopo 6 h, il mezzo di coltura è stato sostituito con mezzo fresco e le cellule sono state coltivate per ulteriori 24 h. Il costrutto per il silenziamento di LINC00707, il controllo negativo corrispondente, l'oligonucleotide miR-145-5p e l'oligonucleotide di controllo corrispondente sono stati utilizzati ciascuno a una concentrazione di 50 nM per pozzetto. Tutti gli esperimenti di trasfezione sono stati ripetuti indipendentemente almeno 5 volte, con 3 replicati paralleli per ciascun esperimento indipendente. I dati sono stati analizzati statisticamente utilizzando i risultati di almeno 5 esperimenti indipendenti.

3. ELISA
I supernatanti di coltura delle cellule BV2 trasfettate e stimolate con LPS sono stati raccolti mediante centrifugazione a 12.000 × g per 10 minuti, e i livelli di interleuchina-1β (IL-1β), IL-6 e fattore di necrosi tumorale-α (TNF-α) sono stati misurati utilizzando i rispettivi kit ELISA. In breve, il saggio è stato eseguito incubando in successione con un anticorpo biotinilato, un coniugato HRP-streptavidina e un substrato TMB, seguendo le istruzioni del produttore. L'assorbanza è stata registrata a 450 nm mediante un lettore per micropiastre. I livelli di citochine sono stati determinati a partire dalle curve standard. Ogni campione è stato misurato in triplice replicato e sono stati effettuati 6 esperimenti indipendenti.

4. Misurazione delle specie reattive dell'ossigeno (ROS)
I livelli intracellulari di ROS in cellule BV2 stimolate con LPS sono stati misurati utilizzando un kit per saggio delle specie reattive dell'ossigeno. In breve, le cellule sono state incubate con 10 µmol/L di DCFH-DA a 37 °C per 20 minuti. Al termine dell'incubazione, il soprannatante è stato eliminato e le cellule sono state lavate 3 volte con soluzione salina tamponata al fosfato (PBS) per rimuovere il sondeo extracellulare in eccesso. L'intensità di fluorescenza è stata misurata mediante un lettore per micropiastre con lunghezze d'onda di eccitazione e di emissione rispettivamente di 488 nm e 525 nm. I livelli relativi di ROS sono stati calcolati in base all'intensità di fluorescenza. Tutti i campioni sono stati analizzati in triplice replicato e l'intero esperimento è stato ripetuto in modo indipendente almeno 5 volte.

5. Rilevamento di malondialdeide, superossido dismutasi e glutathione
Le cellule BV2 trattate sono state raccolte e sono stati preparati gli omogenati cellulari. I campioni sono stati centrifugati a 12.000 × g per 10 min a 4 °C per ottenere il soprannatante. Sono stati utilizzati kit commerciali per il rilevamento di malondialdeide (MDA), superossido dismutasi (SOD) e glutathione (GSH), seguendo le istruzioni del produttore, per determinare i livelli di queste sostanze nei soprannatanti cellulari. Tutti i campioni sono stati analizzati in triplice replicato e l'intero esperimento è stato ripetuto in modo indipendente almeno 5 volte.

6. Saggio del reporter dual-luciferasi
Frammenti della regione non tradotta 3' (3' UTR) di LINC00707 e TRAF6 contenenti i siti di legame predetti per miR-145-5p, insieme alle corrispondenti sequenze mutate, sono stati clonati nel vettore reporter di luciferasi pmirGLO per generare costrutti reporter di tipo selvatico (WT-LINC00707 e WT-TRAF6) e mutati (MUT-LINC00707 e MUT-TRAF6). Le cellule BV2 sono state co-trasfettate con i costrutti reporter e oligonucleotidi miR-145-5p e coltivate per 24 h. Le cellule sono state quindi raccolte e le attività della luciferasi di firefly e della Renilla sono state misurate utilizzando un lettore per micropiastre.

7. RT-qPCR
L'RNA totale è stato estratto utilizzando un reagente per l'estrazione dell'RNA. La qualità dell'RNA è stata valutata mediante il rapporto OD₂₆₀/OD₂₈₀, considerando accettabili valori compresi tra 1,8 e 2,0. Circa 1 µg di RNA totale è stato retrotrascritto in cDNA utilizzando un kit di retrotrascrizione. L'espressione genica è stata quantificata mediante RT-qPCR utilizzando una miscela master PCR con SYBR Green. La retrotrascrizione è stata eseguita a 42 °C per 15 min, seguita dall'inattivazione della retrotrascrittasi a 95 °C per 3 min. Il cDNA sintetizzato è stato conservato a −20 °C fino all'analisi. La PCR quantitativa in tempo reale è stata eseguita con una pre-denaturazione a 95 °C per 1 min, seguita da 40 cicli di denaturazione a 95 °C per 5 s e di annealing ed estensione a 60 °C per 15 s. I segnali di fluorescenza sono stati raccolti al termine di ogni fase di annealing ed estensione. L'analisi della curva di denaturazione è stata effettuata a 95 °C per 15 s, seguita da 60 °C per 1 min. I livelli di espressione relativi sono stati calcolati utilizzando il metodo 2⁻ΔΔCt. GAPDH o 5S è stato utilizzato come riferimento interno per la normalizzazione dell'espressione genica. Le sequenze dei primer erano le seguenti: LINC00707, forward 5'-CCAACAGGGTATCAGAATTCTC-3' e reverse 5'-TGCTGACAATAGCCATTAGG-3'; miR-145-5p, forward 5'-GCCGAGGTCCAGTTTTCCCA-3' e reverse 5'-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3'; TRAF6, forward 5'-ATTACAACTGAGGTGCTTCT-3' e reverse 5'-GCATCTGGTTCTGTTATAGGA-3'; GAPDH, forward 5'-ATCCCATCACCATCTTCCAGG-3' e reverse 5'-CGCCCCACTTGATTTTGG-3'; e 5S, forward 5'-TCGTCTGATCTCGGAAGCTAA-3' e reverse 5'-AAGCCTACAGCACCCGGTAT-3'.

8. Analisi statistica
Le analisi statistiche sono state eseguite utilizzando software statistico. La normalità della distribuzione dei dati è stata valutata mediante il test di Shapiro-Wilk, in cui un valore di P > 0,05 indicava una distribuzione normale. I dati con distribuzione normale sono stati espressi come media ± DS, mentre i dati con distribuzione non normale sono stati espressi come mediana (P25, P75). Per le variabili continue con distribuzione normale, i confronti tra due gruppi sono stati effettuati mediante il test t di Student, mentre i confronti tra più gruppi sono stati effettuati mediante ANOVA a un fattore seguita dal test post hoc di Tukey. Per i dati con distribuzione non normale, il test U di Mann-Whitney è stato utilizzato per i confronti tra due gruppi, e il test di Kruskal-Wallis per i confronti tra più gruppi. Il test del chi-quadro è stato impiegato per analizzare le variabili categoriche tra i gruppi. Sono state utilizzate analisi di regressione logistica univariata e multivariata per valutare i fattori clinici associati all'espressione di LINC00707. Le variabili continue sono state dicotomizzate in base alla mediana del coorte (gruppo ad alto valore = 1; gruppo a basso valore = 0). Le variabili con P < 0,05 nell’analisi di regressione logistica univariata sono state inserite nell’analisi di regressione logistica multivariata. I risultati sono stati espressi come odds ratio (OR) con intervalli di confidenza al 95% (IC), in cui un valore di OR > 1 indicava un'associazione positiva e un valore di OR < 1 indicava un'associazione negativa. Tutti gli esperimenti sul fenotipo cellulare hanno incluso almeno 4 replicati biologici indipendenti, con 3 replicati tecnici per ogni replicato biologico. Un valore di P < 0,05 è stato considerato statisticamente significativo.

Risultati

I livelli plasmatici di LINC00707 erano elevati nei pazienti con lesione del midollo spinale (SCI)
Sono state analizzate le caratteristiche cliniche di base di 30 soggetti sani e di 75 pazienti con lesione del midollo spinale (SCI). Rispetto ai soggetti sani, i pazienti con lesione del midollo spinale presentavano punteggi significativamente più bassi per quanto riguarda la sensibilità tattile, l'acmestesia, le funzioni motorie e il punteggio Functional Independence Measure (FIM), indicando un deterioramento delle funzioni sensoriali e motorie. Inoltre, i livelli sierici di citochine pro-infiammatorie erano significativamente più elevati nei pazienti con lesione del midollo spinale rispetto ai controlli sani (Tabella 1, P < 0,001), suggerendo una risposta infiammatoria potenziata.

ElementiHSSCIP-valore
(n=30)(n=75)
Età (anni)45,83±10,0646,17±9,920,786
BMI (kg/m2)22,82±1,5723,94±1,290,69
Sesso (uomini, n)18410,619
Fumatori (n)11280,949
Bevitori (n)14330,804
Classificazione ASIA della lesione midollare (n)/
Lesione midollare completa/18
Lesione midollare incompleta/36
Funzione neurologica normale/21
Livello della lesione midollare (n, %)/
Vertebra cervicale/27 (36,0%)
Vertebra toracica/23 (30,7%)
Vertebra lombare/25 (33,3%)
Punteggio della sensibilità tattile/53,42±22,12
Punteggio dell'acmestesia/53,39±24,68
Punteggio dell'esercizio/49,07±18,74
Punteggio della misura di indipendenza funzionale/71,33±19,41
IL-1β (pg/mL)1,47±0,5252,21±11,32<0,001
IL-6 (pg/mL)2,14±0,9788,47±23,52<0,001
TNF-α (pg/mL)2,84±1,1361,09±18,24<0,001
CRP (mg/L)1,42±0,6362,67±21,85<0,001
Abbreviazioni: HS, soggetto sano; SCI, lesione del midollo spinale; BMI, indice di massa corporea; ASIA, American Spinal Injury Association; FIM, misura di indipendenza funzionale; IL, interleuchina; TNF, fattore di necrosi tumorale; CRP, proteina C reattiva.

Tabella 1: Confronto delle caratteristiche cliniche di base tra soggetti sani e pazienti con lesione del midollo spinale. Questa tabella confronta le caratteristiche demografiche, i punteggi di funzione neurologica, le variabili relative alla lesione e i livelli dei marcatori infiammatori tra soggetti sani e pazienti con lesione del midollo spinale. Abbreviazioni: HS, soggetti sani; SCI, lesione del midollo spinale; ASIA, American Spinal Injury Association; FIM, Functional Independence Measure; IL, interleuchina; TNF, fattore di necrosi tumorale; PCR, proteina C reattiva.

L'espressione plasmatica di LINC00707 è stata quantificata mediante RT-qPCR. Rispetto ai soggetti sani, i pazienti con lesione midollare (SCI) presentavano un'espressione plasmatica di LINC00707 significativamente aumentata (Figura 1A, P < 0,001). L'analisi della curva ROC (receiver operating characteristic) ha fornito evidenze preliminari che l'espressione di LINC00707 potrebbe avere un certo valore discriminatorio nel distinguere i pazienti con SCI dai soggetti sani (Figura 1B). Inoltre, l'espressione plasmatica di LINC00707 aumentava all'aumentare della gravità clinica della SCI (Figura 1C, P < 0,001). L'analisi della correlazione ha mostrato che l'espressione plasmatica di LINC00707 era positivamente associata ai livelli di IL-1β (r = 0,635, P < 0,001), IL-6 (r = 0,612, P < 0,001), TNF-α (r = 0,675, P < 0,001) e proteina C-reattiva (PCR; r = 0,611, P < 0,001) (Figura 1D–G). Questi risultati suggeriscono che un'espressione elevata di LINC00707 è associata alle risposte infiammatorie nei pazienti con SCI.

Grafici a barre dell'espressione A, C; curva ROC B; diagrammi di dispersione di correlazione D-G; confronto di dati scientifici.
Figura 1: Espressione plasmatica di LINC00707 e le sue correlazioni con i fattori infiammatori plasmatici. (A) L'espressione plasmatica di LINC00707 era più elevata nei pazienti con lesione del midollo spinale (SCI) rispetto ai soggetti sani. L'analisi statistica è stata eseguita mediante un test t per campioni indipendenti. (B) L'analisi della curva caratteristica operativa del ricevitore (ROC) ha fornito un'indicazione preliminare che l'espressione di LINC00707 potrebbe essere utile per distinguere i pazienti con SCI dai soggetti sani. (C) L'espressione plasmatica di LINC00707 aumentava all'aumentare della gravità della SCI secondo la classificazione dell'American Spinal Injury Association (ASIA). L'analisi statistica è stata eseguita mediante ANOVA a un fattore seguita dal test post hoc di Tukey HSD. (D–G) L'espressione plasmatica di LINC00707 era positivamente correlata ai livelli dei fattori infiammatori. L'analisi statistica è stata eseguita mediante analisi della correlazione di Pearson. *P < 0,01 e **P < 0,001. Soggetti sani, n = 30; pazienti con SCI, n = 75. I dati sono espressi come media ± DS. Cliccare qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.

I fattori associati all'espressione di LINC00707 sono stati analizzati mediante regressione logistica univariata e multivariata
Sono state eseguite analisi di regressione logistica univariata e multivariata per identificare i fattori associati all'espressione di LINC00707. L'analisi univariata ha mostrato che la classificazione ASIA del danno midollare (OR = 3,912, IC 95%: 1,792–8,537, P < 0,001), il punteggio FIM (OR = 0,281, IC 95%: 0,108–0,729, P = 0,009) e il livello di PCR (OR = 4,600, IC 95%: 1,724–12,271, P = 0,002) erano associati all'espressione di LINC00707. Dopo aggiustamento per variabili potenzialmente confondenti, la regressione logistica multivariata ha mostrato che la classificazione ASIA del danno midollare (OR = 2,598, IC 95%: 1,088–6,203, P = 0,032), il punteggio FIM (OR = 0,303, IC 95%: 0,102–0,902, P = 0,032) e il livello di PCR (OR = 3,202, IC 95%: 1,024–10,015, P = 0,045) erano fattori indipendenti associati all'espressione di LINC00707 (Tabella 2). Una classificazione ASIA più grave e livelli elevati di PCR erano associati a un'espressione maggiore di LINC00707, mentre un punteggio FIM più alto era associato a un'espressione minore di LINC00707. Queste associazioni supportano ulteriormente l'ipotesi che LINC00707 sia coinvolto nel processo patologico del danno midollare.

ElementiAnalisi di regressione univariataAnalisi di regressione multivariata
ORIC 95%Valore PORIC 95%Valore P
Età 1.1760.475-2.9140.725
Sesso1.3030.524-3.2400.57
Classificazione ASIA del danno spinale (SCI) 3.9121.792-8.537<0.0012.5981.088-6.2030.032
Classificazione ASIA del danno spinale (SCI)0.5880.497-1.4800.582
Punteggio della sensibilità tattile0.850.343-2.1050.725
Punteggio dell'acmestesia0.8540.345-2.1190.734
Punteggio dell'esercizio fisico0.3920.153-1.0060.051
Punteggio FIM0.2810.108-0.7290.0090.3030.102-0.9020.032
IL-1β1.1810.475-2.9350.72
IL-6 1.4530.585-3.6080.42
TNF-α1.3040.526-3.2330.567
CRP 4.61.724-12.2710.0023.2021.024-10.0150.045
Abbreviazioni: OR, rapporto tra odds; IC, intervallo di confidenza; ASIA, American Spinal Injury Association; FIM, misura dell'indipendenza funzionale; IL, interleuchina; TNF, fattore di necrosi tumorale; CRP, proteina C reattiva.

Tabella 2: Analisi di regressione logistica dei fattori associati all'espressione di LINC00707. Questa tabella presenta le analisi di regressione logistica univariata e multivariata utilizzate per identificare i fattori clinici associati all'espressione di LINC00707 in pazienti con lesione del midollo spinale. I risultati sono riportati come odds ratio con intervalli di confidenza al 95% e relativi valori P. Abbreviazioni: OR, odds ratio; CI, intervallo di confidenza; ASIA, American Spinal Injury Association; FIM, Functional Independence Measure; IL, interleuchina; TNF, fattore di necrosi tumorale; CRP, proteina C reattiva.

L'inibizione di LINC00707 ha attenuato l'infiammazione e lo stress ossidativo nelle cellule BV2 stimolate con LPS
Le cellule BV2 sono state trattate con concentrazioni crescenti di LPS (0, 10, 20, 50, 100, 150 o 200 ng/mL). L'analisi RT-qPCR ha mostrato che l'espressione di LINC00707 era significativamente aumentata dopo il trattamento con 100, 150 e 200 ng/mL di LPS (Figura 2A, P < 0,001, n = 6). Sulla base di questi risultati e di precedenti studi27˒28, è stato scelto un trattamento con 100 ng/mL di LPS per stabilire il modello in vitro di SCI. Rispetto al gruppo di controllo, l'espressione di LINC00707 era significativamente aumentata nelle cellule BV2 stimolate con LPS. La trasfezione con si-LINC00707 ha efficacemente soppresso l'espressione di LINC00707 (Figura 2B, P < 0,001, n = 6).

Gli effetti dell'abbattimento di LINC00707 sull'infiammazione e sullo stress ossidativo sono stati successivamente valutati. La stimolazione con LPS ha aumentato significativamente la secrezione di IL-1β (Figura 2C, P < 0,001, n = 5), IL-6 (Figura 2D, P < 0,001, n = 5) e TNF-α (Figura 2E, P < 0,001, n = 5), nonché i livelli intracellulari di ROS (Figura 2F, P < 0,001, n = 6) e il contenuto di MDA (Figura 2G, P < 0,001, n = 5). Al contrario, la stimolazione con LPS ha significativamente ridotto i livelli dei marcatori antiossidanti SOD (Figura 2H, P < 0,001, n = 6) e GSH (Figura 2I, P < 0,001, n = 5). L'abbattimento di LINC00707 ha significativamente ridotto la secrezione di citochine pro-infiammatorie e i livelli dei marcatori pro-ossidativi, ripristinando al contempo i livelli di antiossidanti nelle cellule BV2 stimolate con LPS. Questi risultati indicano che l'abbattimento di LINC00707 attenua le risposte infiammatorie e lo stress ossidativo indotti da LPS nelle cellule BV2.

Serie di grafici a barre che analizzano l'espressione delle citochine e i parametri biochimici nell'esperimento indotto da LPS.
Figura 2: Effetti dell'abbattimento di LINC00707 sull'infiammazione e sullo stress ossidativo in cellule BV2 stimolate da LPS. Le cellule BV2 sono state stimolate con 100 ng/mL di lipopolisaccaride (LPS). (A) L'espressione di LINC00707 è stata misurata mediante RT-qPCR in cellule BV2 trattate con diverse concentrazioni di LPS. (B) L'espressione di LINC00707 è risultata aumentata nel gruppo LPS e ridotta dopo trasfezione con si-LINC00707. (C–E) L'ELISA ha mostrato che la secrezione di fattori pro-infiammatori era aumentata nel gruppo LPS e ridotta dopo l'abbattimento di LINC00707. (F–G) I livelli di specie reattive dell'ossigeno (ROS) e il contenuto di malondialdeide (MDA) erano aumentati nel gruppo LPS e ridotti dopo l'abbattimento di LINC00707. (H–I) L'attività della superossido dismutasi (SOD) e i livelli di glutatione ridotto (GSH) erano diminuiti nel gruppo LPS e aumentati dopo l'abbattimento di LINC00707. **P < 0.001; ns, non significativo. n ≥ 5. Le analisi statistiche sono state eseguite mediante ANOVA a un fattore seguita dal test post hoc di Tukey’s HSD. I dati sono espressi come media ± DS. Cliccare qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.

LINC00707 funge da spugna molecolare per miR-145-5p
Per indagare il meccanismo molecolare alla base della funzione biologica di LINC00707, è stato utilizzato il database ENCORI per prevedere miRNA bersaglio potenziali. L'analisi bioinformatica ha identificato sequenze di legame complementari tra LINC00707 e miR-145-5p (Figura 3A). Saggi reporter a doppia luciferasi hanno mostrato che l'attività luciferasica nel costrutto WT-LINC00707 era significativamente ridotta dal mimico di miR-145-5p e aumentata dall'inibitore di miR-145-5p. Al contrario, nessuno dei due trattamenti ha influenzato l'attività luciferasica nel costrutto MUT-LINC00707 (Figura 3B, P < 0,001, n = 4), confermando l'interazione diretta tra LINC00707 e miR-145-5p.

L'analisi di RT-qPCR ha mostrato che l'espressione di miR-145-5p nel plasma era significativamente ridotta nei pazienti con lesione midollare rispetto ai soggetti sani (Figura 3C, P < 0,001). Inoltre, l'espressione di LINC00707 era negativamente correlata con l'espressione di miR-145-5p (Figura 3D, P < 0,001) e i livelli plasmatici di miR-145-5p diminuivano progressivamente all'aumentare della gravità della lesione midollare (Figura 3E, P < 0,001). In vitro, l'espressione di miR-145-5p era significativamente ridotta nelle cellule BV2 stimolate con LPS rispetto alle cellule di controllo, mentre l'abbattimento dell'espressione di LINC00707 ripristinava l'espressione di miR-145-5p (Figura 3F, P < 0,001, n = 6). Questi risultati suggeriscono che LINC00707 agisce come RNA endogeno competitore (ceRNA) sequestrando miR-145-5p e regolandone così l'espressione durante la progressione patologica della lesione midollare.

Analisi dell'espressione genica; miR-145-5p, saggio della luciferasi, grafico di correlazione; istogrammi, allineamenti di sequenze.
Figura 3. LINC00707 funziona da spugna molecolare per miR-145-5p. (A) Il database ENCORI ha predetto sequenze di legame complementari tra LINC00707 e miR-145-5p. (B) Un saggio del reporter dual-luciferase ha confermato l'interazione tra LINC00707 e miR-145-5p. L'analisi statistica è stata eseguita mediante ANOVA a due vie seguita dal test post hoc di Tukey HSD. (C) La RT-qPCR ha mostrato che l'espressione plasmatica di miR-145-5p era ridotta nei pazienti con lesione del midollo spinale. L'analisi statistica è stata effettuata mediante test t per campioni indipendenti. (D) L'espressione di LINC00707 era negativamente correlata all'espressione di miR-145-5p nei pazienti con lesione del midollo spinale. L'analisi statistica è stata effettuata mediante analisi della correlazione di Pearson. (E) L'espressione plasmatica di miR-145-5p diminuiva all'aumentare della gravità del danno midollare (SCI) secondo la classificazione ASIA. L'analisi statistica è stata effettuata mediante ANOVA a un fattore seguita dal test post hoc di Tukey HSD. (F) L'espressione di miR-145-5p era ridotta nel gruppo LPS, aumentata dopo la trasfezione con si-LINC00707 e ridotta dopo la trasfezione con l'inibitore di miR-145-5p. L'analisi statistica è stata eseguita utilizzando l'ANOVA a un fattore seguita dal test post hoc di Tukey HSD. P < 0,05, *P < 0,01 e **P < 0,001; ns, non significativo. Soggetti sani, n = 30; pazienti con lesione del midollo spinale (SCI), n = 75; esperimenti su cellule, n ≥ 4. I dati sono espressi come media ± deviazione standard (DS). Cliccare qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.

L'inibizione di miR-145-5p ha potenziato l'infiammazione e lo stress ossidativo nelle cellule BV2 stimolate con LPS
Per indagare il ruolo di miR-145-5p, le cellule BV2 sono state trasfettate con un inibitore di miR-145-5p o con il corrispondente controllo negativo. I livelli di citochine infiammatorie e di marcatori dello stress ossidativo sono stati successivamente valutati. Rispetto al gruppo controllo negativo per l'inibitore, l'inibizione di miR-145-5p ha aumentato significativamente la secrezione di IL-1β (Figura 4A, P < 0,001, n = 5), IL-6 (Figura 4B, P < 0,001, n = 5) e TNF-α (Figura 4C, P < 0,001, n = 5). Inoltre, i livelli intracellulari di ROS (Figura 4D, P < 0,001, n = 6) e il contenuto di MDA (Figura 4E, P < 0,001, n = 5) sono risultati significativamente aumentati, mentre i livelli di SOD (Figura 4F, P < 0,001, n = 6) e GSH (Figura 4G, P < 0,001, n = 5) sono risultati significativamente ridotti. Questi risultati indicano che l'inibizione di miR-145-5p inverte gli effetti protettivi dell'abbattimento di LINC00707 sull'infiammazione e sullo stress ossidativo indotti da LPS nelle cellule BV2.

Grafici a barre che confrontano i livelli di espressione proteica con il trattamento LPS nello studio di inibizione genica.
Figura 4: Effetti dell'inibizione di miR-145-5p sull'infiammazione e sullo stress ossidativo in cellule BV2. (A–C) L'ELISA ha mostrato che la secrezione di fattori pro-infiammatori era significativamente aumentata dopo la trasfezione con l'inibitore di miR-145-5p. (D–E) I livelli di specie reattive dell'ossigeno (ROS) e il contenuto di malondialdeide (MDA) erano significativamente aumentati dopo la trasfezione con l'inibitore di miR-145-5p. (F–G) L'attività della superossido dismutasi (SOD) e i livelli di glutatione (GSH) erano significativamente ridotti dopo la trasfezione con l'inibitore di miR-145-5p. **P < 0.001. n ≥ 5. Le analisi statistiche sono state eseguite mediante ANOVA a un fattore seguita dal test post hoc di Tukey’s HSD. I dati sono espressi come media ± DS. Cliccare qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.

TRAF6 è stato identificato come gene bersaglio di miR-145-5p
Il database miRDB ha predetto TRAF6 come un potenziale bersaglio di miR-145-5p. Sono state identificate sequenze di legame complementari tra la regione 3′ UTR di TRAF6 e miR-145-5p (Figura 5A). Saggi reporter dual-luciferasi hanno mostrato che l'attività luciferasica nel costrutto WT-TRAF6 è significativamente diminuita in presenza del mimico di miR-145-5p ed aumentata in presenza dell'inibitore di miR-145-5p. Al contrario, nessuno dei due trattamenti ha influenzato l'attività luciferasica nel costrutto MUT-TRAF6 (Figura 5B, P < 0,001, n = 4), confermando che TRAF6 è un bersaglio diretto di miR-145-5p.

L'analisi di RT-qPCR ha mostrato che l'espressione di mRNA di TRAF6 nel plasma era significativamente aumentata nei pazienti con lesione del midollo spinale (SCI) (Figura 5C, P < 0,001). L'espressione di TRAF6 era negativamente correlata con l'espressione di miR-145-5p (Figura 5D, P < 0,001) e i livelli plasmatici di mRNA di TRAF6 aumentavano con la gravità della SCI (Figura 5E, P < 0,001). In vitro, l'espressione di TRAF6 era significativamente aumentata nelle cellule BV2 stimolate con LPS rispetto al gruppo di controllo, ma risultava significativamente ridotta dopo il silenziamento di LINC00707 (Figura 5F, P < 0,001, n = 6). Al contrario, l'inibizione di miR-145-5p ripristinava l'espressione di TRAF6 (Figura 5G, P < 0,001, n = 6). Questi risultati indicano che LINC00707 regola l'espressione di TRAF6 attraverso la via di segnalazione di miR-145-5p.

Diagramma della regolazione dell'espressione genica con interazione di miR-145-5p; include equazioni, grafici e dati.
Figura 5: TRAF6 è un gene bersaglio di miR-145-5p. (A) Il database miRDB ha predetto sequenze di legame complementari tra TRAF6 e miR-145-5p. (B) Un saggio con reporter a doppia luciferasi ha confermato la relazione di targeting tra TRAF6 e miR-145-5p. L'analisi statistica è stata eseguita mediante ANOVA a due vie seguita dal test post hoc di Tukey’s HSD. (C) La RT-qPCR ha mostrato un aumento dell'espressione plasmatica di TRAF6 nei pazienti con lesione del midollo spinale (SCI). L'analisi statistica è stata eseguita mediante test t per campioni indipendenti. (D) L'espressione plasmatica di TRAF6 era negativamente correlata con l'espressione plasmatica di miR-145-5p nei pazienti con SCI. L'analisi statistica è stata eseguita mediante analisi della correlazione di Pearson. (E) L'espressione plasmatica di TRAF6 aumentava all'aumentare della gravità della SCI secondo la classificazione ASIA. L'analisi statistica è stata eseguita mediante ANOVA a una via seguita dal test post hoc di Tukey’s HSD. (F) L'espressione di TRAF6 era aumentata nelle cellule BV2 stimolate con LPS e ridotta dopo il silenziamento di LINC00707. L'analisi statistica è stata eseguita mediante ANOVA a una via seguita dal test post hoc di Tukey’s HSD. (G) L'espressione di TRAF6 era aumentata dopo l'inibizione di miR-145-5p. L'analisi statistica è stata eseguita mediante ANOVA a una via seguita dal test post hoc di Tukey’s HSD. P < 0,05, *P < 0,01 e **P < 0,001; ns, non significativo. Soggetti sani, n = 30; pazienti con SCI, n = 75; esperimenti su cellule, n ≥ 4. I dati sono espressi come media ± DS. Cliccare qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.

DISPONIBILITÀ DEI DATI:
I set di dati generati e/o analizzati nel presente studio sono disponibili nel repository Zenodo: https://doi.org/10.5281/zenodo.21470454.

Discussione

La lesione del midollo spinale (SCI) è un grave disturbo traumatico del sistema nervoso centrale che determina un'alterazione o una perdita completa della conduzione nervosa attraverso il midollo spinale, causando disfunzioni motorie, sensoriali e autonomiche permanenti, nonché conseguenze fisiologiche e psicologiche profonde29˒30. La gravità di tali alterazioni generalmente aumenta con l'estensione della lesione del midollo spinale. Nel presente studio, l'espressione plasmatica di LINC00707 era aumentata nei pazienti con lesione del midollo spinale ed era positivamente correlata ai livelli circolanti di citochine pro-infiammatorie, suggerendo un possibile ruolo di LINC00707 nell'infiammazione e nello stress ossidativo associati alla lesione del midollo spinale. Sulla base di questi risultati clinici, abbiamo ulteriormente indagato il ruolo regolatorio di LINC00707 nell'infiammazione e nello stress ossidativo in cellule BV2 trattate con LPS, nel contesto della patogenesi della lesione del midollo spinale.

LINC00707 è stato implicato in una varietà di processi biologici attraverso la regolazione di molteplici vie di segnalazione31. Oltre a regolare la proliferazione cellulare, l'apoptosi, la migrazione e l'invasione, è stato dimostrato che LINC00707 partecipa alle risposte infiammatorie e allo stress ossidativo18˒32˒33. Studi precedenti hanno riportato un'espressione elevata di LINC00707 nel cancro del polmone34, del seno35, della cervice36 e del fegato37, dove promuove la progressione della malattia regolando bersagli molecolari a valle. Inoltre, l'abbattimento di LINC00707 promuove la differenziazione osteogenica delle cellule staminali mesenchimali del midollo osseo attraverso la regolazione di miR-103a-3p38. Zou et al. hanno ulteriormente dimostrato che LINC00707 promuove le risposte infiammatorie indotte da LPS nelle cellule MRC-5, confermando il suo ruolo pro-infiammatorio33. In linea con questi risultati, lo studio attuale ha mostrato che l'espressione di LINC00707 era significativamente aumentata nelle cellule BV2 stimolate con LPS, mentre l'abbattimento di LINC00707 riduceva la produzione di citochine pro-infiammatorie e di marcatori dello stress ossidativo. Questi risultati ulteriormente supportano il coinvolgimento di LINC00707 nelle risposte infiammatorie e allo stress ossidativo.

È stato inoltre riportato che LINC00707 funziona come RNA endogeno competitore (ceRNA) regolando miR-145-5p in diverse condizioni patologiche, tra cui la malattia cardiaca reumatica39, il cancro della vescica40 e la differenziazione osteogenica41. Studi precedenti hanno dimostrato che miR-145-5p esercita effetti protettivi nel danno midollare (SCI) inibendo l'infiammazione e lo stress ossidativo42˒43 e promuovendo l'angiogenesi e la riparazione neuronale44˒45. In linea con queste osservazioni, lo studio attuale ha mostrato che l'espressione plasmatica di miR-145-5p era ridotta nei pazienti con SCI e nelle cellule BV2 stimolate con LPS. È stato inoltre confermato che LINC00707 interagisce direttamente con miR-145-5p e che la silenziamento di LINC00707 ripristina l'espressione di miR-145-5p. Inoltre, l'inibizione di miR-145-5p ha invertito gli effetti protettivi derivanti dall'abbattimento di LINC00707 sulle risposte infiammatorie e sullo stress ossidativo. Questi risultati suggeriscono che LINC00707 potrebbe contribuire alla progressione del danno midollare regolando le risposte infiammatorie e allo stress ossidativo mediate da miR-145-5p.

Studi precedenti hanno dimostrato che TRAF6 svolge un ruolo importante nelle malattie del sistema nervoso centrale46. Evidenze indicano inoltre che l'inibizione di TRAF6 può migliorare significativamente la lesione del midollo spinale (SCI)47˒48. Il presente studio ha ulteriormente identificato TRAF6 come un bersaglio diretto di miR-145-5p. L'espressione di TRAF6 era significativamente aumentata nei pazienti con SCI e nelle cellule BV2 stimolate con LPS. Inoltre, la riduzione dell'espressione di LINC00707 ha diminuito l'espressione di TRAF6, mentre l'inibizione di miR-145-5p ne ha ripristinato l'espressione. Questi risultati suggeriscono che LINC00707 potrebbe regolare l'espressione di TRAF6 attraverso miR-145-5p durante la SCI.

Questo studio suggerisce che LINC00707 potrebbe influenzare le risposte infiammatorie e il danno da stress ossidativo mediati dai microglia durante la lesione del midollo spinale (SCI) regolando l'asse di segnalazione miR-145-5p/TRAF6. Questo risultato è coerente con un rapporto precedente di Zhu et al., che hanno dimostrato come il silenziamento di LINC00707 attenuasse l'infiammazione e l'apoptosi indotte da LPS nelle cellule PC-12; tuttavia, il meccanismo sottostante nel loro studio coinvolgeva l'asse miR-30a-5p/Neurod118. Nel complesso, questi risultati suggeriscono che LINC00707 potrebbe non agire attraverso un singolo target di miRNA, ma piuttosto attraverso reti di miRNA distinte in modo dipendente dal tipo cellulare, contribuendo così ai processi patologici della SCI.

Questo studio presenta diversi limiti. In primo luogo, è stata valutata soltanto l'espressione dell'mRNA di TRAF6, mentre l'espressione proteica non è stata analizzata. Studi futuri dovrebbero includere una validazione a livello proteico, come l'analisi mediante Western blot, per caratterizzare ulteriormente la relazione regolatoria tra LINC00707, miR-145-5p e TRAF6. In secondo luogo, lo studio è stato condotto esclusivamente a livello cellulare utilizzando un modello di microglia BV2 stimolata con LPS, senza una validazione in vivo. Data la complessità del microambiente della lesione del midollo spinale (SCI), i risultati attuali potrebbero non riprodurre completamente le condizioni fisiopatologiche in vivo. Se LINC00707 eserciti effetti pro-infiammatori simili nei modelli animali di SCI rimane da confermare. Studi futuri dovranno sviluppare modelli animali di SCI per validare il ruolo regolatorio di LINC00707 e i suoi meccanismi molecolari sottostanti. In terzo luogo, sebbene i nostri risultati indichino che LINC00707 agisce attraverso la via di segnalazione miR-145-5p/TRAF6 influenzando l'infiammazione, non è ancora chiaro se LINC00707 funzioni esclusivamente come spugna per specifici miRNA oppure si leghi direttamente ad alcune proteine. Sono necessari ulteriori studi per chiarire questi aspetti meccanicistici. In quarto luogo, l'analisi della curva ROC si basa su dati provenienti da un singolo centro medico e da un numero relativamente ridotto di pazienti. Ciò potrebbe aver introdotto un bias, rendendo i risultati preliminari. Sono necessari studi multicentrici su un numero maggiore di pazienti per confermare il potenziale diagnostico dei biomarcatori identificati.

I risultati di questo studio suggeriscono che LINC00707 potrebbe rappresentare un potenziale biomarcatore plasmatico esplorativo e un bersaglio terapeutico per il danno midollare acuto (SCI). Tuttavia, la traduzione di questi risultati in applicazioni cliniche richiederà diversi passaggi aggiuntivi. In primo luogo, il valore discriminatorio potenziale di LINC00707 nel plasma dovrebbe essere valutato in coorti più ampie multicentriche, in coorti di validazione indipendenti e in gruppi di controllo pertinenti per trauma o infiammazione. La valutazione clinica e l'esame radiologico rimangono gli approcci principali per la diagnosi del danno midollare acuto. In secondo luogo, il potenziale terapeutico del bersaglio LINC00707 dovrebbe essere valutato in modelli animali per analizzarne l'efficacia e la sicurezza. In definitiva, la modulazione della via di segnalazione LINC00707/miR-145-5p/TRAF6 potrebbe offrire un approccio innovativo per ridurre la neuroinfiammazione e lo stress ossidativo nei pazienti con danno midollare acuto, anche se è necessario un notevole lavoro per colmare il divario tra ricerca di base e applicazione clinica.

Complessivamente, l'espressione plasmatica di LINC00707 e TRAF6 era aumentata, mentre l'espressione di miR-145-5p era ridotta nei pazienti con lesione midollare (SCI) e nelle cellule BV2 stimolate con LPS. L'abbattimento di LINC00707 ha attenuato le risposte infiammatorie e lo stress ossidativo attraverso l'asse di segnalazione miR-145-5p/TRAF6, suggerendo che questa via regolatoria potrebbe rappresentare un potenziale bersaglio terapeutico per la lesione midollare.

Dichiarazioni

Gli autori dichiarano di non avere interessi concorrenti.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto dal Progetto di Ricerca in Scienze Mediche del Hebei (Concessione n. 20251479).

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
tubo microcentrifugo da 1,5 mLKIRGENKG2211Tubo in polipropilene con tappo a scatto, privo di DNasi/RNasi, non pirogeno, forza centrifuga massima 20.000 × g, per la conservazione e la centrifugazione di campioni di RNA/proteine.
Piastra per coltura cellulare a 6 pozzettiCorning3516Piastra in polistirene trattata per colture cellulari, con fondo piatto, sterile e confezionata singolarmente; volume della pozzetta di 16,8 mL e superficie di crescita di 9,5 cm²
Ago per prelievo del sangueBecton, Dickinson and Company367283BD Vacutainer Ago Monouso per Prelievo di Sangue. Progettato con ago a doppia estremità, di cui una per la venipuntura e l'altra per il collegamento al portatacche e al tubo sottovuoto, consentendo il prelievo multiplo in più provette. Rivestito in silicone per ridurre al minimo il disagio del paziente durante l'inserimento.
Tubi per il prelievo del sangueBecton, Dickinson and Company367605Tubi per prelievo ematico evacuati BD Vacutainer. Tappi codificati con diversi colori indicano vari additivi, corrispondenti a specifici test di laboratorio.
Linea cellulare immortalizzata di microglia murina BV2Centro di Risorse Cellulari dell'Istituto di Biotecnologia di ShanghaiRRID: CVCL_0182Linea cellulare murina di microglia immortalizzata che esprime stabilmente marcatori specifici della microglia (Iba1, CD11b, F4/80). In seguito a stimolazione con LPS, le cellule BV2 secernono citochine pro-infiammatorie (IL-1β, IL-6, TNF-α) e accumulano ROS intracellulari, MDA per mimare l'attivazione infiammatoria microgliale in vivo dopo una lesione del midollo spinale. Le cellule vengono coltivate in DMEM ad alto contenuto di glucosio integrato con 10% di FBS e 1× penicillina-streptomicina, mantenuto a 37 °C con 5% CO2 incubatrice umidificata; passati al raggiungimento del 70%–80% di confluenza per evitare un'eccessiva attivazione.
Kit per il dosaggio del malondialdeide (MDA) cellulareNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA003-4-2Kit colorimetrico basato su micropiastre per la rilevazione quantitativa del malondialdeide cellulare, un marcatore della perossidazione lipidica. L'MDA reagisce con l'acido tiobarbiturico (TBA) in condizioni di riscaldamento formando addotti rossi; l'assorbanza viene rilevata a 532 nm mediante spettrofotometro per micropiastre. Ottimizzato per campioni di lisati cellulari, operazioni ad alto rendimento in piastre da 96 pozzetti, con un intervallo di quantificazione lineare che copre livelli da bassi a moderati di ossidazione lipidica nelle microglia.
CO2 incubatriceThermo Scientific3111CO₂ con giacca d'acqua umidificata2 incubatrice con volume interno di 184 L, CO₂ ad infrarossi2 sensore, sistema di filtrazione dell'aria HEPA per minimizzare la contaminazione microbica. Mantiene un ambiente di coltura stabile a 37 °C, 5% CO₂2 e umidità satura per la coltura cellulare aderente a lungo termine.
Kit per Saggio Genico del Reporter a Doppia LuciferasiBeyotime BiotechnologyRG028Questo kit a doppia luciferasi consente la rilevazione quantitativa sequenziale della luciferasi della lucciola e della luciferasi di Renilla nei lisati cellulari. Il segnale della luciferasi della lucciola viene innanzitutto misurato utilizzando il substrato luciferina; il successivo reagente di rilevazione per Renilla contiene un potente inibitore che elimina >99,9% di luminescenza residua della luciferasi di firefly, garantendo una lettura pura del segnale di Renilla con substrato coelenterazina. Il kit include un buffer specifico per la lisi cellulare, compatibile con luminometri per micropiastre a 96 pozzetti, per la lisi di cellule aderenti. Il reagente per la luciferasi di firefly è fornito in soluzione liquida pre-miscelata, pronta all'uso; i valori di luminescenza di firefly e Renilla vengono registrati in sequenza per calcolare l'attività luciferasica relativa normalizzata (rapporto Firefly/Renilla) per la validazione di bersagli ceRNA.
Dulbecco's Modified Eagle MediumGibco11995065DMEM è un mezzo basale ampiamente utilizzato per sostenere la crescita di molti tipi diversi di cellule mammifere. Questa formulazione contiene glucosio ad alta concentrazione, L-glutammina, rosso fenolo e piruvato di sodio. Richiede un'integrazione, comunemente con il 10% di siero fetale bovino (FBS), e una concentrazione di CO₂ al 5%–10% CO2 ambiente per mantenere il pH fisiologico.
Siero fetale bovinoOGNI VERDE13011-8611FBS di grado premium, basso contenuto di endotossine, privo di micoplasmi & batteriofago negativo, aggiunto al DMEM al 10% v/v per supportare la crescita cellulare.
GraphPad Prism versione 9GraphPad Software, San Diego, CA, USANASoftware specializzato in grafica scientifica e analisi statistica per dati sperimentali di cellule in vitro. Tutti i valori grezzi di qPCR, ELISA, stress ossidativo e luminescenza dual-luciferasi con assorbanza sono stati importati in Prism 9 per verificare la normalità, effettuare confronti tra gruppi parametrici/non parametrici, generare tutte le figure quantitative e calcolare la media ± DS, valori P esatti e intervalli di confidenza al 95%, ed esportare figure ad alta risoluzione (300 dpi) conformi agli standard di pubblicazione delle riviste. I file sorgente originali del progetto .prism di tutti i grafici sono depositati nel repository pubblico dei dati, come richiesto.
IBM SPSS Statistics Versione 26.0IBM Corporation, Armonk, NY, USANAPacchetto statistico completo utilizzato per l'ordinamento dei dati basali dei campioni clinici, il test di normalità (test di Shapiro-Wilk), il test t indipendente/non appaiato, l'ANOVA a un fattore con correzione di Tukey’correzione per confronti multipli, test non parametrico U di Mann-Whitney e calcolo di valori P esatti e intervalli di confidenza al 95% per tutti i dati quantitativi umani e cellulari. Tutti i dati demografici e di laboratorio dei pazienti clinici sono stati elaborati e analizzati all'interno di questa piattaforma.
IL-1β SimpleStep ELISA KitAbcamab255730Questo kit ELISA colorimetrico sandwich con un solo lavaggio adotta la tecnologia proprietaria SimpleStep, completando l'intera procedura di rilevamento in 90 minuti. Misura quantitativamente l'interleuchina-1 di rattoβ nei campioni di supernatante di coltura cellulare, siero e plasma con EDTA/citrato/eeparina. La sensibilità di rilevamento raggiunge 26,58 pg/mL, con un intervallo di quantificazione lineare di 54,69–3500 pg/mL. È inclusa una micropiattaforma in striscia da 8 pozzetti rimovibili pre-ricoperta. I segnali di assorbanza vengono rilevati a 450 nm mediante lettore per micropiastre per calcolare l'IL-1β concentrazione
Kit ELISA SimpleStep per IL-6Abcamab234570Kit colorimetrico ELISA sandwich SimpleStep ottimizzato per la rilevazione quantitativa dell'interleuchina-6 (IL-6) di ratto in campioni di supernatante di coltura cellulare, siero e plasma con citrato/EDTA/eeparina. Adotta un protocollo con un'unica fase di incubazione e un singolo lavaggio, riducendo il tempo totale del saggio a 90 minuti, con una sensibilità di rilevamento di 43 pg/mL e un intervallo di quantificazione lineare compreso tra 125 pg/mL e 8000 pg/mL. Il kit include una micropiastra in strisce da 8 pozzetti pre-rivestiti e divisibili; i valori di assorbanza vengono letti a 450 nm mediante spettrofotometro per micropiastre per il calcolo finale della concentrazione di IL-6.
Piastra LightCycler Multiwell da 96 pozzetti, biancaRoche LifeScience, Svizzera4729692001Piastre di reazione bianche in polipropilene a 96 pozzetti con bordo parziale, appositamente ottimizzate per l'utilizzo con lo strumento di PCR in tempo reale LightCycler 96. Le pareti bianche dei pozzetti riducono l'interferenza della fluorescenza di fondo e potenziano la riflessione del segnale, migliorando la sensibilità di rilevamento per trascritti a bassa abbondanza. Il design uniforme a pareti sottili garantisce una conduttività termica costante in tutti i pozzetti, ed è compatibile con volumi di reazione compresi tra 10 e 50 μL. Privi di DNasi/RNasi e privi di pirrogeni per saggi di amplificazione di cDNA derivato da RNA.
Reagente per trasfezione LipofectamineTM 3000Thermo Fisher ScientificL3000015Il reagente per la trasfezione con nanoparticelle lipidiche abbinato all'Enhancer P3000 consente una trasfezione ad alta efficienza di siRNA/plasmidi nelle microglia BV2 con bassa citotossicità.
Kit per la Sintesi del cDNA del Primo Filamento di lncRNA lnRcute lncRNATIANGENKR202-02Questo kit è stato appositamente ottimizzato per la trascrizione inversa di RNA non codificanti lunghi (lncRNA) a bassa abbondanza, con contenuto variabile di GC e strutture secondarie complesse. Contiene un buffer indipendente per l'eliminazione del DNA genomico (gDNA) al fine di rimuovere la contaminazione da DNA genomico prima della trascrizione inversa, nonché una miscela specifica di primer lnR-RT per arricchire i templati di lncRNA a lunghezza intera. La trascrittasi inversa modificata consente una sintesi efficiente di cDNA a filamento lungo a partire da RNA totale in quantità comprese tra 10 ng e 2 ng.
Kit di rilevamento lnRcute per lncRNA con qPCR (SYBR Green)TIANGENFP402Un premix dedicato per PCR quantitativa basato su SYBR Green per la quantificazione di lncRNA. La DNA polimerasi con attivazione termica mediata da anticorpo garantisce un'elevata specificità di amplificazione; i componenti H-competitor riducono l'interferenza dovuta alla struttura secondaria dei templati di lncRNA ricchi in GC. Compatibile con il cDNA generato dal kit di trascrizione inversa lnRcute per lncRNA e adatto alla quantificazione dell'espressione relativa di lncRNA a bassa abbondanza.
oligonucleotidi miR-145-5pGeneralbiol (Wuhan, Cina)NAMimetico sintetico di miR-145-5p, inibitore e oligonucleotidi di controllo negativo corrispondenti, utilizzati per modulare l'attività di miR-145-5p in cellule BV2. Utilizzati in saggi di espressione, infiammazione, stress ossidativo e saggi reporter dual-luciferasi.
miRcute Plus miRNA First-Strand cDNA KitTIANGENKR211-02Adotta una reazione combinata in un unico tubo di poliadenilazione e trascrizione inversa per semplificare il flusso di lavoro sperimentale. La miscela enzimatica contiene poli(A) polimerasi da E. coli, trascrittasi inversa priva di attività RNasi H e inibitore delle RNasi, che riconosce specificamente il miRNA maturo a singolo filamento ed evita interferenze nell'amplificazione da parte del pre-miRNA con strutture a forcina. Adatto per miRNA estratto da lisati cellulari, plasma e campioni di tessuto.
Kit di rilevamento miRcute Plus per qPCR di miRNA (SYBR Green)TIANGENFP411Premix di SYBR Green ottimizzato per la quantificazione di miRNA maturi, perfettamente abbinato ai prodotti di trascrizione inversa miRcute. Il sistema tampone migliora l'efficienza di appaiamento dei primer per gli ampliconi brevi di miRNA, garantendo segnali fluorescenti stabili e un'elevata sensibilità nella rilevazione di miRNA espressi a livelli bassi. L'RNA snU6 è comunemente utilizzato come riferimento interno per la normalizzazione.
Soluzione di Penicillina-Streptomicina (100×)Beyotime BiotechnologyC0222Miscela filtrata sterile contenente 10.000 U/mL di penicillina e 10 mg/mL di streptomicina; diluizione di lavoro 1:100 nel mezzo di coltura per prevenire contaminazioni batteriche.
Kit per Saggio di Specie Reattive dell'Ossigeno con DiluenteBeyotime BiotechnologyS0034MQuesto kit utilizza la sonda fluorescente DCFH-DA per quantificare le specie reattive dell'ossigeno (ROS) intracellulari. La DCFH-DA attraversa la membrana cellulare e viene idrolizzata dall'esterasi intracellulare in DCFH, che viene ossidata dai ROS per generare la DCF fluorescente. Compatibile con piastre microtitolazione a 96 pozzetti e lettore fluorimetrico per piastre, consente rilevazioni ad alto rendimento (Es = 488 nm, Em = 525 nm). Fornito con un diluente specifico per la sonda e il reagente di controllo positivo Rosup per stabilizzare i segnali di colorazione, è adatto al rilevamento dello stress ossidativo nei microglia BV2 aderenti senza lisare le cellule.
Kit per il Dosaggio del Glutatione Ridotto (GSH)Nanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA006-1-2Kit colorimetrico in micropiastre per la rilevazione del glutatione ridotto (GSH), l'antiossidante intracellulare principale. Il GSH reagisce con l'acido ditionitrobenzoico (DTNB) per produrre un composto cromogeno giallo, la cui assorbanza viene misurata a 405 nm su un lettore di micropiastre. Il kit adatta un protocollo standard in provetta alla rilevazione ad alto rendimento in micropiastre da 96 pozzetti per l'analisi degli antiossidanti in lisati cellulari.
si-LINC00707GenePharma (Shanghai, Cina)NARNA interferente corto progettato per ridurre l'espressione di LINC00707 in cellule BV2. Utilizzato in esperimenti di perdita di funzione per valutare gli effetti del silenziamento di LINC00707 sulle risposte infiammatorie, sullo stress ossidativo, sull'espressione di miR-145-5p e sull'espressione di TRAF6.
si-LINC00707 NCGenePharma (Shanghai, Cina)NARNA interferente corto non mirato utilizzato come controllo negativo per la trasfezione di si-LINC00707. Utilizzato per controllare gli effetti non specifici della procedura di trasfezione e dell'esposizione all'RNA interferente.
SuperReal PreMix Plus (SYBR Green)TIANGEN4992777Premix universale per PCR quantitativa con SYBR Green per la quantificazione relativa di mRNA, contenente Taq polimerasi con attivazione termica (hot-start), dNTP, SYBR Green I e colorante di riferimento ROX per la normalizzazione della fluorescenza. Amplificazione non specifica ridotta, efficienza di amplificazione stabile, ampiamente utilizzato per la quantificazione di geni bersaglio mRNA (TRAF6, GAPDH ecc.).
Thermo Scientific™ Sorvall™ ST 8 centrifuga da banco piccolaThermo Scientific75200709La scelta classica per i laboratori clinici, in grado di gestire fino a 24 × Tubi per la raccolta del sangue da 5/7 mL contemporaneamente. La serie R è una versione refrigerata, in grado di proteggere meglio i campioni che richiedono una centrifugazione a bassa temperatura.
Kit per la Sintesi del cDNA di Primo Filamento TIANScript IITIANGENGKR107-02Progettato per la trascrizione inversa di mRNA in generale, per generare cDNA di lunghezza fino a 12 kb. Dotato sia di primer Oligo (dT) 15 che di esameri casuali, per strategie di innesco flessibili. La trascrittasi inversa M-MLV modificata legge efficacemente attraverso strutture secondarie complesse e regioni ricche di GC nell'mRNA, con ampia compatibilità per l'amplificazione successiva mediante qPCR dell'mRNA.
TNF-α SimpleStep ELISA KitAbcamab236712Un kit ELISA sandwich SimpleStep con un solo lavaggio rapido ottimizzato per la rilevazione quantitativa del fattore di necrosi tumorale di rattoα (TNF-α) nel supernatante di colture cellulari, siero e diverse specie di plasma. La durata totale del saggio è di 90 minuti, con un'ultra-elevata sensibilità di 1,04 pg/mL e un intervallo di rilevamento lineare compreso tra 15,63 pg/mL e 1000 pg/mL. Dotato di un modulo staccabile da 8×piatto pre-ricoperto a 12 pozzetti; i valori di DO a 450 nm vengono registrati per il TNF finaleα calcolo quantitativo
Kit per il dosaggio della superossido dismutasi totale (T-SOD)Nanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA001-3-2Kit cromogenico per micropiastre WST-1 per la rilevazione dell'attività enzimatica totale della SOD. La SOD elimina i radicali anionici superossido e inibisce la reazione di riduzione del WST-1. L'assorbanza viene registrata a 450 nm mediante lettore per micropiastre per il calcolo dell'attività. Adatto per omogenati cellulari, sieri e campioni tissutali, con sviluppo del colore stabile e alta ripetibilità, per la valutazione della capacità antiossidante.
Reagente TRIzolThermo Fisher Scientific15596018Reagente monofasico di fenolo-guanidina isotiocianato per l'isolamento in un unico passaggio di RNA totale da cellule di microglia in coltura; estrae contemporaneamente DNA e proteine dagli stessi campioni.

Riferimenti

  1. Trueblood CT, Singh A, Cusimano MA, Hou S. Autonomic dysreflexia in spinal cord injury: mechanisms and prospective therapeutic targets. Neuroscientist. 2024;30(5):597-611.
  2. Anderson MA, Squair JW, Gautier M, Hutson TH, Kathe C, Barraud Q, et al. Natural and targeted circuit reorganization after spinal cord injury. Nat Neurosci. 2022;25(12):1584-96.
  3. Liu Y, Yang X, He Z, Li J, Li Y, Wu Y, et al. Spinal cord injury: global burden from 1990 to 2019 and projections up to 2030 using Bayesian age-period-cohort analysis. Front Neurol. 2023;14:1304153. doi:10.3389/fneur.2023.1304153.
  4. Sekhon LH, Fehlings MG. Epidemiology, demographics, and pathophysiology of acute spinal cord injury. Spine (Phila Pa 1976). 2001;26(24 Suppl):S2-12.
  5. Chan BC, Cadarette SM, Wodchis WP, Krahn MD, Mittmann N. The lifetime cost of spinal cord injury in Ontario, Canada: a population-based study from the perspective of the public health care payer. J Spinal Cord Med. 2019;42(2):184-93.
  6. Van Broeckhoven J, Sommer D, Dooley D, Hendrix S, Franssen A. Macrophage phagocytosis after spinal cord injury: when friends become foes. Brain. 2021;144(10):2933-45.
  7. Xiao S, Zhong N, Yang Q, Li A, Tong W, Zhang Y, et al. Aucubin promoted neuron functional recovery by suppressing inflammation and neuronal apoptosis in a spinal cord injury model. Int Immunopharmacol. 2022;111:109163. doi:10.1016/j.intimp.2022.109163.
  8. Li F, Wang Y, Zheng K. Microglial mitophagy integrates the microbiota-gut-brain axis to restrain neuroinflammation during neurotropic herpesvirus infection. Autophagy. 2023;19(2):734-6.
  9. Beattie MS. Inflammation and apoptosis: linked therapeutic targets in spinal cord injury. Trends Mol Med. 2004;10(12):580-3.
  10. Brennan FH, Li Y, Wang C, Ma A, Guo Q, Li Y, et al. Microglia coordinate cellular interactions during spinal cord repair in mice. Nat Commun. 2022;13(1):4096. doi:10.1038/s41467-022-31797-0.
  11. Kwon HS, Koh SH. Neuroinflammation in neurodegenerative disorders: the roles of microglia and astrocytes. Transl Neurodegener. 2020;9(1):42. doi:10.1186/s40035-020-00221-2.
  12. Zhong J, Qiu X, Yu Q, Chen H, Yan C. A novel polysaccharide from Acorus tatarinowii protects against LPS-induced neuroinflammation and neurotoxicity by inhibiting TLR4-mediated MyD88/NF-κB and PI3K/Akt signaling pathways. Int J Biol Macromol. 2020;163:464-75.
  13. Han X, Xu T, Fang Q, Zhang H, Yue L, Hu G, et al. Quercetin hinders microglial activation to alleviate neurotoxicity via .the interplay between NLRP3 inflammasome and mitophagy. Redox Biol. 2021;44:102010. doi:10.1016/j.redox.2021.102010.
  14. Simpson DSA, Oliver PL. ROS generation in microglia: understanding oxidative stress and inflammation in neurodegenerative disease. Antioxidants (Basel). 2020;9(8):743. doi:10.3390/antiox9080743.
  15. Onoguchi-Mizutani R, Akimitsu N. Long noncoding RNA and phase separation in cellular stress response. J Biochem. 2022;171(3):269-76.
  16. Zhang Y. LncRNA-encoded peptides in cancer. J Hematol Oncol. 2024;17(1):66. doi:10.1186/s13045-024-01591-0.
  17. Hu W, Zhou J, Jiang Y, Bao Z, Hu X. Silencing of LINC00707 alleviates brain injury by targeting miR-30a-5p to regulate microglia inflammation and apoptosis. Neurochem Res. 2024;49(1):222-33.
  18. Zhu S, Zhou Z, Li Z, Shao J, Jiao G, Huang YE, et al. Suppression of LINC00707 alleviates lipopolysaccharide-induced inflammation and apoptosis in PC-12 cells by regulating miR-30a-5p/Neurod1. Biosci Biotechnol Biochem. 2019;83(11):2049-56.
  19. Long J, Lan W, Shen B, Liao F, Cai H, Li J, et al. LncRNA-miRNA-mRNA network in schizophrenia. J Mol Neurosci. 2025;75(3):104.
  20. De Gasperi R, Graham ZA, Harlow LM, Bauman WA, Qin W, Cardozo CP. The signature of microRNA dysregulation in muscle paralyzed by spinal cord injury includes downregulation of microRNAs that target myostatin signaling. PLoS One. 2016;11(12):e0166189.
  21. Lin Y, Liu L, Lin Y, Yang R, Liao S, Xu M, et al. MiR-145 alleviates sepsis-induced inflammatory responses and organ injury by targeting ADAM17. Front Biosci (Landmark Ed). 2024;29(1):44. doi:10.31083/j.fbl2901044.
  22. Wang C, Gu L, Yang Z, Su J, Wen X. Mume Fructus total flavonoids modulate miR-145-3p expression to inhibit lipopolysaccharide-induced inflammatory cytokine production in BV2 cells. Comb Chem High Throughput Screen. 2026;29. doi:http://dx.doi.org/10.2174/0113862073447531260414195911
  23. Chen S, Wei J, Huang L, Feng B, Guo W. MiRNA-194-5p inhibits inflammatory response after spinal cord injury via .regulating TRAF6. Minerva Med. 2020;111(6):603-6.
  24. Lu Y, Jiang BC, Cao DL, Zhang ZJ, Zhang X, Ji RR, et al. TRAF6 upregulation in spinal astrocytes maintains neuropathic pain by integrating TNF-α and IL-1β signaling. Pain. 2014;155(12):2618-29.
  25. Zhao Y, Li T, Zhang L, Yang J, Zhao F, Wang Y, et al. TRAF6 promotes spinal microglial M1 polarization to aggravate neuropathic pain by activating the c-JUN/NF-κB signaling pathway. Cell Biol Toxicol. 2024;40(1):54. doi:10.1007/s10565-024-09900-6.
  26. Kirshblum SC, Memmo P, Kim N, Campagnolo D, Millis S, American Spinal Injury Association. Comparison of the revised 2000 American Spinal Injury Association classification standards with the 1996 guidelines. Am J Phys Med Rehabil. 2002;81(7):502-5.
  27. Xue MT, Sheng WJ, Song X, Shi YJ, Geng ZJ, Shen L, et al. Atractylenolide III ameliorates spinal cord injury in rats by modulating microglial/macrophage polarization. CNS Neurosci Ther. 2022;28(7):1059-71.
  28. Zhang H, Xiang L, Yuan H, Yu H. PTPRO inhibition ameliorates spinal cord injury through shifting microglial M1/M2 polarization via .the NF-κB/STAT6 signaling pathway. Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis. 2024;1870(5):167141. doi:10.1016/j.bbadis.2024.167141.
  29. Eli I, Lerner DP, Ghogawala Z. Acute traumatic spinal cord injury. Neurol Clin. 2021;39(2):471-88.
  30. Brouwers E, van der Meent H, Curt A, Maier DD, Abel RF, Weidner N, et al. Recovery after traumatic thoracic and lumbar spinal cord injury: the neurological level of injury matters. Spinal Cord. 2020;58(9):980-7.
  31. Yao Q, Li Z, Chen D. Review of LINC00707: a novel lncRNA and promising biomarker for human diseases. Front Cell Dev Biol. 2022;10:813963. doi:10.3389/fcell.2022.813963.
  32. Chen L, Chen Y, Huang J, Zhang J. LncRNA LINC00707 serves as a sponge of miR-382-5p to alleviate lipopolysaccharide-induced WI-38 cell injury through upregulating NKAP in infantile pneumonia. Autoimmunity. 2022;55(5):328-38.
  33. Zou X, Gao C, Shang R, Chen H, Wang B. Knockdown of lncRNA LINC00707 alleviates LPS-induced injury in MRC-5 cells by acting as a ceRNA of miR-223-5p. Biosci Biotechnol Biochem. 2021;85(2):315-23.
  34. Ma T, Ma H, Zou Z, He X, Liu Y, Shuai Y, et al. The long intergenic noncoding RNA 00707 promotes lung adenocarcinoma cell proliferation and migration by regulating Cdc42. Cell Physiol Biochem. 2018;45(4):1566-80.
  35. Li H, Liu Q, Hu Y, Yin C, Zhang Y, Gao P. LINC00707 regulates autophagy and promotes the progression of triple-negative breast cancer by activation of the PI3K/AKT/mTOR pathway. Cell Death Discov. 2024;10(1):138. doi:10.1038/s41420-024-01906-7.
  36. Fang F, Guo C, Zheng W, Li Q. LINC00707 promotes cell proliferation in cervical cancer via .the miR-374c-5p/SDC4 axis. Biomed Res Int. 2022;2022:5793912. doi:10.1155/2022/5793912.
  37. Wei M, Lu L, Ma J, Luo Z, Tan X, Wang J. LINC00707 impairs natural killer cell antitumor activity in hepatocellular carcinoma by decreasing YTHDF2 stability. J Cell Mol Med. 2024;28(5):e18106.
  38. Liu J, Wu M, Feng G, Li R, Wang Y, Jiao J. Downregulation of LINC00707 promotes osteogenic differentiation of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells by regulating DKK1 via .targeting miR-103a-3p. Int J Mol Med. 2020;46(3):1029-38.
  39. Zhao W, Huang G, Ye J. LINC00707 inhibits myocardial fibrosis and immune disorder in rheumatic heart disease by regulating miR-145-5p/S1PR1. Biotechnol Genet Eng Rev. 2024;40(4):3073-86.
  40. Gao T, Ji Y. Long noncoding RNA LINC00707 accelerates tumorigenesis and progression of bladder cancer via .targeting the miR-145/CDCA3 regulatory loop. Urol Int. 2021;105(9–10):891-905.
  41. Cai WL, Zeng W, Liu HH, Zhu BY, Liu JL, Liu Y. LncRNA LINC00707 promotes osteogenic differentiation of hBMSCs through the Wnt/β-catenin pathway activated by the LINC00707/miR-145/LRP5 axis. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2020;24(1):18-28.
  42. Jiang L, Wei ZC, Xu LL, Yu SY, Li C. Inhibition of miR-145-5p reduces spinal cord injury-induced inflammatory and oxidative stress responses via .affecting the Nurr1-TNF-α signaling axis. Cell Biochem Biophys. 2021;79(4):791-9.
  43. Jiang Z, Zhang J. Mesenchymal stem cell-derived exosomes containing miR-145-5p reduce inflammation in spinal cord injury by regulating the TLR4/NF-κB signaling pathway. Cell Cycle. 2021;20(10):993-1009.
  44. Park AJ, Fandl HK, Garcia VP, Coombs GB, DeSouza NM, Greiner JJ, et al. Differential expression of vascular-related microRNA in circulating endothelial microvesicles in adults with spinal cord injury: a pilot study. Top Spinal Cord Inj Rehabil. 2023;29(2):34-42. doi:10.46292/sci22-00032.
  45. Gao C, Yin F, Li R, Ruan Q, Meng C, Zhao K, et al. MicroRNA-145-mediated KDM6A downregulation enhances neural repair after spinal cord injury via .the NOTCH2/Abcb1a axis. Oxid Med Cell Longev. 2021;2021:2580619. doi:10.1155/2021/2580619.
  46. Dou Y, Tian X, Zhang J, Wang Z, Chen G. Roles of TRAF6 in the central nervous system. Curr Neuropharmacol. 2018;16(9):1306-13.
  47. Huang T, Jia Z, Fang L, Cheng Z, Qian J, Xiong F, et al. Extracellular vesicle-derived miR-511-3p from hypoxia-preconditioned adipose mesenchymal stem cells ameliorates spinal cord injury through the TRAF6/S1P axis. Brain Res Bull. 2022;180:73-85.
  48. Wei J, Wang J, Zhou Y, Yan S, Li K, Lin H. MicroRNA-146a contributes to SCI recovery via .regulating TRAF6 and IRAK1 expression. Biomed Res Int. 2016;2016:4013487.

Ristampe e permessi

Tag

Regolazione dell'infiammazioneRT-qPCRsaggio dual-luciferasiattivazione della microglia
Contattaci
Consiglia alla biblioteca

Privacy

Termini di utilizzo

Politiche

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Tutti i diritti riservati.