Dichiarazione etica: Lo studio è stato condotto in conformità con le linee guida istituzionali e i principi etici della Dichiarazione di Helsinki. L'approvazione etica è stata ottenuta dal Comitato Etico dell'Università di Bisha (UBCOM-RELOC), con il numero di approvazione H-06-BH-087/(0802.23). La partecipazione era volontaria e il consenso informato scritto è stato ottenuto da tutti i partecipanti prima dell'iscrizione. I materiali, l'equipaggiamento e le procedure analitiche utilizzati nello studio sono riassunti nella Tabella dei Materiali.
Disegno dello studio e contesto
È stato condotto uno studio retrospettivo trasversale presso l'Ospedale Materno Infantile di Bisha, Arabia Saudita, tra dicembre 2022 e maggio 2023, al fine di valutare lo stato ferroviario e analizzare i fattori associati alla carenza di ferro tra le donne in gravidanza nella regione settentrionale di Asir.
Popolazione in studio e metodologia del campionamento
Sono stati arruolati complessivamente 200 partecipanti, tra cui 135 donne in gravidanza che si presentavano a visite di controllo prenatale e 65 donne non in gravidanza, di età confrontabile, che hanno svolto il ruolo di gruppo di controllo. I partecipanti sono stati reclutati da ambulatori esterni mediante campionamento di convenienza durante il periodo dello studio. Le donne idonee che si presentavano durante l’orario di ambulatorio sono state avvicinate consecutivamente, e il reclutamento è proseguito fino al raggiungimento della dimensione campionaria prefissata. Per ridurre il potenziale bias di selezione all’interno di questo contesto, i controlli sono stati abbinati per età utilizzando un campionamento casuale semplice tra le donne non in gravidanza idonee presenti in ambulatorio.
Le donne in gravidanza erano idonee all'inclusione se avevano un'età pari o superiore a 18 anni e una gravidanza con un'età gestazionale compresa tra 12 e 36 settimane. I partecipanti idonei sono stati arruolati indipendentemente dal loro stato ferrocinetico e successivamente classificati come donne in gravidanza con anemia da carenza di ferro (IDA) o senza IDA, in base ai risultati di laboratorio. Secondo i criteri dell'OMS, l'anemia durante la gravidanza è stata definita come concentrazioni di emoglobina (Hb) < 11,0 g/dL durante il primo e il terzo trimestre e < 10,5 g/dL durante il secondo trimestre. L'IDA è stata diagnosticata in donne che presentavano il valore soglia di Hb specifico per la gravidanza e segni di carenza di ferro, inclusi ferritina sierica < 15 ng/mL, ferro sierico < 10 µmol/L e capacità totale di legame del ferro (TIBC) ≥ 68 µmol/L17,18. Le donne in gravidanza che non soddisfacevano questi criteri diagnostici sono state classificate nel gruppo delle donne in gravidanza senza IDA. Le donne non in gravidanza in età fertile, senza una gravidanza in corso e senza disturbi ematologici noti, sono state utilizzate come gruppo di controllo. I criteri di esclusione per entrambi i gruppi includevano anamnesi documentata di condizioni croniche o sistemiche associate a alterato metabolismo del ferro o stato infiammatorio, come malattia renale cronica, disturbi autoimmuni, neoplasie, sindrome dell'intestino irritabile, malattia epatica cronica o disturbi ereditari del ferro (ad esempio, emocromatosi). Sono state inoltre escluse le donne con infezioni acute al momento del prelievo, quelle che avevano ricevuto terapia con ferro endovenoso o trasfusioni di sangue nei tre mesi precedenti e quelle in trattamento cronico con terapie immunosoppressive. Per tutti i partecipanti sono stati registrati l'indice di massa corporea (BMI) e l'etnia; tuttavia, queste variabili non sono state utilizzate come criteri di esclusione, ma considerate come possibili covariate nell'analisi.
Determinazione della dimensione del campione
La dimensione del campione è stata calcolata utilizzando un software epidemiologico per il calcolo della dimensione del campione19, in base a una prevalenza prevista di anemia da carenza di ferro (IDA) tra le donne in gravidanza in Arabia Saudita del 40%6, con un livello di confidenza del 95% e un margine di errore del 5%. La dimensione minima richiesta del campione è stata stimata in 182 partecipanti; pertanto, sono stati reclutati complessivamente 200 partecipanti per migliorare la precisione statistica.
Raccolta dei dati
Questionario
I dati sono stati raccolti utilizzando un questionario strutturato e validato. Il questionario è stato sviluppato a seguito di un'ampia revisione della letteratura ed è stato valutato da un gruppo di esperti del settore, tra cui ostetrici, nutrizionisti ed epidemiologi, per garantire la validità del contenuto. È stato condotto uno studio pilota su 20 partecipanti, non inclusi nell'analisi finale, per valutarne chiarezza, affidabilità e fattibilità. La coerenza interna del questionario è risultata accettabile, con un alfa di Cronbach pari a 0,81.
Il questionario finale era composto da tre sezioni per un totale di 35 domande (Supplementary File 1):
Sezione 1 (Dati sociodemografici, 10 elementi): età, livello di istruzione, occupazione, luogo di residenza, nazionalità e anamnesi familiare di anemia.
Sezione 2 (abitudini alimentari, 12 voci): frequenza di consumo di alimenti ricchi di ferro (carne rossa, carne bianca, pesce, verdure e cereali arricchiti), consumo di tè e caffè, e regime alimentare. Le variabili dietetiche sono state selezionate a priori in base alla loro rilevanza consolidata riguardo all'assunzione di ferro, alla biodisponibilità del ferro e ai fattori alimentari che possono influenzare l'assorbimento del ferro. Il questionario includeva le principali fonti alimentari di ferro, tra cui carne rossa, pollame, pesce, verdure a foglia verde scura e cereali arricchiti. Sono stati valutati gli alimenti ricchi di vitamina C, in particolare gli agrumi, poiché la vitamina C può potenziare l'assorbimento del ferro non eme. Al contrario, il consumo di tè e caffè è stato valutato perché i polifenoli alimentari possono inibire l'assorbimento del ferro non eme quando assunti durante o subito dopo i pasti. È stato inoltre valutato il regime alimentare e il consumo di cibi da fast food per indicare i modelli alimentari complessivi e l'adeguatezza nutrizionale. Le voci alimentari selezionate si basano sulla letteratura esaminata durante la fase di sviluppo del questionario ed è stata successivamente sottoposta a valutazione da esperti in ostetricia, nutrizione ed epidemiologia per verificarne la validità del contenuto.
Sezione 3 (Anamnesi clinica e sintomi, 13 elementi): età gestazionale, parità, anamnesi di trasfusioni di sangue, affaticamento, capogiri, febbre e altri sintomi comunemente associati all'anemia.
Valutazione biochimica
Per ogni partecipante, è stato prelevato un campione di sangue venoso di 5 mL dopo un digiuno notturno. I campioni sono stati centrifugati a 2000 × g per 15 minuti per separare il siero, che è stato successivamente analizzato immediatamente. La concentrazione di emoglobina è stata misurata mediante un analizzatore ematologico automatico e riportata in grammi per decilitro (g/dL). I livelli sierici di ferritina sono stati valutati mediante un saggio immunoenzimatico con chemiluminescenza elettrochimica (ECLIA) su un analizzatore immunoenzimatico automatico ed espressi in nanogrammi per millilitro (ng/mL). Il ferro sierico, la capacità totale di legame del ferro (TIBC) e la capacità di legame del ferro non saturata (UIBC) sono stati determinati mediante un metodo colorimetrico su un analizzatore biochimico automatico, con risultati riportati in micromoli per litro (µmol/L). La saturazione della transferrina (TR-SAT) è stata calcolata come rapporto tra il ferro sierico e la TIBC moltiplicato per 100 ed espressa in percentuale.
Statistica e analisi dei dati
I dati sono stati codificati e analizzati utilizzando software standardizzato per l'analisi statistica. Per riassumere le variabili sociodemografiche, dietetiche, cliniche e biochimiche sono state utilizzate statistiche descrittive, comprese medie, deviazioni standard e percentuali. I confronti tra gruppi sono stati effettuati mediante il test t di Student non appaiato o l'analisi della varianza a un fattore (ANOVA), secondo le esigenze. L'analisi statistica è stata considerata significativa per p < 0,05. Le rappresentazioni grafiche sono state prodotte mediante software di analisi statistica e grafica.
Per esaminare i fattori indipendentemente associati alla SIDA, è stato applicato un modello di regressione logistica multivariata. Lo stato di SIDA è stato definito come variabile dipendente binaria (SIDA = 1, non-SIDA/controllo = 0). Le variabili indipendenti sono state selezionate a priori in base alla plausibilità biologica e alle evidenze di studi precedenti, e includevano caratteristiche sociodemografiche (luogo di residenza, storia familiare di anemia), stato fisiologico (gravidanza) e variabili dietetiche (assunzione di carne rossa, pollame e frutti agrumi).
Le variabili categoriche sono state codificate utilizzando variabili dummy e le variabili relative all'assunzione alimentare sono state classificate come basse o adeguate in base alla frequenza di consumo dichiarata (≤2 volte a settimana rispetto a >2 volte a settimana). Tutte le variabili selezionate sono state inserite contemporaneamente nel modello di regressione per stimare le loro associazioni indipendenti, tenendo conto di eventuali fattori di confondimento. Sono stati riportati odds ratio aggiustati (OR) con intervalli di confidenza al 95% (IC), in cui valori di OR superiori a 1 indicavano una maggiore probabilità di anemia da carenza di ferro (IDA). Un riassunto visivo degli OR e dei corrispondenti IC al 95% è stato presentato mediante un grafico a foreste generato con un software per fogli elettronici.