L'osservazione microscopica-droga suscettibilità (MODS) è un test a basso costo, low-tech strumento di alte prestazioni di rilevamento della tubercolosi (TB) e la tubercolosi multi-resistente (MDRTB). Questo video descrive il liquido MODS mezzi metodo cultura.
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Articolo metodologico
Il metodo MODS per la diagnosi di tubercolosi e di tubercolosi multiresistente
In questo articolo
Sommario
Abstract
I pazienti con tubercolosi polmonare attiva (TB) infettare altre 10-15 persone l'anno, rendendo la diagnosi di TBC attiva essenziale sia per curare il paziente e prevenire nuove infezioni. Inoltre, la comparsa di tubercolosi multiresistente (MDRTB) significa che il rilevamento della resistenza ai farmaci è necessario per fermare la diffusione di ceppi resistenti ai farmaci. L'osservazione microscopica-droga suscettibilità (MODS) è un test a basso costo, low-tech strumento ad alte prestazioni di rilevamento della tubercolosi e MDRTB. Il saggio MODS si basa su tre principi: 1) Mycobacterium tuberculosis (MTB) cresce più velocemente in mezzi liquidi che su terreni solidi 2) la crescita MTB microscopici possono essere rilevati in precedenza in mezzi liquidi che aspettare l'aspetto macroscopico delle colonie su terreni solidi, e che la crescita è caratteristica della MTB, che permette di distinguerlo da micobatteri atipici contaminazioni batteriche o fungine o 3) i farmaci isoniazide e rifampicina può essere incorporato nel saggio MODS per consentire la simultanea rilevazione diretta di MDRTB, ovviando alla necessità di una sottocultura di effettuare indiretta farmaco test di sensibilità. Concorrenti diagnostica attuali sono ostacolati da una bassa sensibilità con striscio dell'espettorato, ritardo prolungato fino diagnosi con una solida cultura dei media, dei costi proibitivi con gli attuali metodi di liquido cultura dei media, e la necessità di fare sottocultura per i test indiretti sensibilità ai farmaci per rilevare MDRTB. Al contrario, il non proprietario metodo MODS ha una sensibilità elevata per la tubercolosi e MDRTB, è un metodo di cultura relativamente rapido, fornisce contemporaneamente test di sensibilità farmaco per MDRTB, ed è accessibile a risorse limitate a poco meno di 3 dollari per i test per la TBC e MDRTB.
Protocollo
- Preparare soluzioni di
- Tampone fosfato magazzino
- Mescolare 950ml di soluzione di sodio bibasico (9.47g di fosfato di sodio dibasico sciolto in 1000 ml di acqua distillata) con 950ml di soluzione di potassio fosfato monobasico (9.07g di fosfato monobasico di potassio disciolti in 1000 ml di acqua distillata) e mescolare; trattenere 50ml di ciascuna soluzione per regolare pH, se necessario,
- Regolare il pH a 6,8 ± 0,2: aggiungere soluzione di fosfato di sodio bibasico per aumentare il pH, aggiungere la soluzione di potassio fosfato monobasico per abbassare il pH
- Autoclave a 121-124 ° C per 15 minuti per sterilizzare <....
- Tampone fosfato magazzino
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Discussione
Il saggio MODS è rivolto a risorse limitate. Per la prima volta, MODS porta la capacità per una rapida individuazione coltura liquida di tubercolosi e di tubercolosi multiresistente a risorse limitate a poco meno di $ 3 per prova. MODS è un non-proprietarie, iterativo metodologia, e la comunità MODS è sempre interessata a miglioramenti che altri laboratori sono riusciti a fare.
Una preoccupazione ricorrente è la biosicurezza di liquido cultura mediatica di tubercolosi, perché i liquidi possono essere versato o aerosol. Crediamo che .......
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Ringraziamenti
Vorremmo riconoscere Sean Fitzwater e Carmen Giannina Luna Colombo per il segmento video di tubercolosi crescita time-lapse. Ringraziamo Marty Roper per lei un feedback accurato ed eccellente durante il montaggio e co-autore del Manuale d'uso, da cui è tratto l'attuale protocollo per lo più alla lettera. La produzione di questo video è stato finanziato dal NIH / Fogarty International Center http://www.fic.nih.gov/ David AJ Moore ha contribuito come Research Fellow Wellcome Trust clinica in Medicina Tropicale e Reader in Malattie Infettive presso l'Imperial College di Londra (Fellowship Premio numero 078067/Z/05). Mark F. Brady ha contribu....
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Frigorifero/congelatore | Attrezzature | per conservare i preparati di brodo e le scorte di antibiotici già pronti | ||
| Vortex | Attrezzature | per facilitare la decontaminazione dell'espettorato | ||
| Centrifuga | Attrezzatura | per la concentrazione dell'espettorato; in grado di raggiungere 3000 g; d–non deve essere refrigerato, ma DEVE essere a prova di biocontaminazione (i contenitori possono essere sigillati) | ||
| Incubatrice (37 gradi C) | Attrezzatura | per coltura; non richiede un'atmosfera arricchita di CO2 | ||
| Microscopio ottico invertito | Microscopio | leggere le piastre MODS | ||
| Autoclave | Attrezzatura | per sterilizzare i terreni di coltura, il PBS e le piastre usate | ||
| Bilancia | Attrezzature | pesare isoniazide, rifampicina e NALC | ||
| Brodo Middlebrook 7H9 (Difco) | Reagente | Fisher Scientific | DF0713-17-9 | 500 g/bottiglia; base per terreni di coltura |
| Casitone (caseina digerita pancreaticamente) | Reagente | Fisher Scientific | DF0259‐17‐9 | 500 g/bottiglia; base per terreni di coltura |
| Glicerolo (glicerina) liofilizzato | Reagente | Sigma-Aldrich | G‐33‐500 | 500 ml/bottiglia; base per terreni di coltura |
| PANTA (miscela di antibiotici liofilizzata BD) | Reagente | Fisher Scientific | B4345114 | 6 bottiglie/confezione; supplemento antibiotico per terreni di coltura |
| OADC (arricchimento Middlebrook OADC BD) | Reagente | Fisher Scientific | B11886 | 10 x 20 ml/confezione; supplemento per terreni nutrizionali |
| Dimetilsolfossido (Hibri-Max) | Reagente | Sigma-Aldrich | D-2650 | 100 ml/ bottiglia; per preparare la soluzione madre di rifampicina |
| Antibiotici di riserva: isoniazide | Reagente | Sigma-Aldrich | I-3377 | 50 g/bottiglia; test diretto di suscettibilità |
| Antibiotici di riserva: rifampicina | Reagente | Sigma-Aldrich | R-3501 | 1 g/flacone; test diretto di suscettibilità |
| Idrossido di sodio (perle) | Reagente | Sigma-Aldrich | 221465 | 500 g/bottiglia; decontaminazione dell'espettorato |
| Citratо di sodio (sale di trisodio diidrato) | Reagente | Sigma-Aldrich | S-4641 | 500 g/bottiglia; decontaminazione dell'espettorato |
| N-acetil-L-cisteina | Reagente | Sigma-Aldrich | A-7250 | 50 g/bottiglia; decontaminazione dell'espettorato |
| Cristallo di fosfato monopotassico. KH2PO4 | Reagente | Sigma-Aldrich | P0662 | 500 g/bottiglia; decontaminazione dell'espettorato |
| Fosfato disodico, anidro. Na2HPO4 | Reagente | Sigma-Aldrich | S0876 | 500 g/bottiglia; decontaminazione dell'espettorato |
| Ipoclorito di sodio | Reagente | candeggina comune | smaltire i rifiuti contaminati | |
| Tubi da centrifuga da 15 ml (polipropilene 15 ml Falcon 35‐2096) | Materiale di consumo | Fisher Scientific | 14‐959‐49B | 500ea/caso; per la decontaminazione e concentrazione dell'espettorato |
| Piastra a 24 pozzetti (Piastra in tessuto, 24 pozzetti, BD Falcon 35‐3047) | Materiale di consumo | Fisher Scientific | 08-772-1 | 50 piastre/contenitore; per coltura e lettura |
| Sacchetti di polietilene sigillabili 6 X 6 “ (ziplock) | Materiale di consumo | per la biosicurezza, contenere una piastra a 24 pozzetti | ||
| Tubi di vetro con coperchio (16 x 100 mm e 18 x 145 mm) | Materiali di consumo | VWR international | 47729-583 | 500 tubi/scatola; per conservare aliquote di brodo preparato |
| Tubi microcentrifuga con tappo a vite (1,5 ml) | Materiale di consumo | Fisher Scientific | 05‐669‐22 | 1000 ua/caso; per conservare aliquote di soluzioni stock di antibiotici |
| 0.22μfiltri m (solventi acquosi) filtro per siringa Millex blu | Materiale di consumo | Fisher Scientific | SLGL 025 OS | 50 unità/caso; per filtrare le soluzioni antibiotiche |
| 0.22μfiltri m (solventi organici) filtro per siringa Millex giallo | Materiale di consumo | Fisher Scientific | SLGV 033 RS | 50 unità/contenitore; per filtrare le soluzioni stock di antibiotici |
| Pipette Pasteur monouso in vetro borosilicato 9″ | Materiale di consumo | Fisher Scientific | 13‐678‐20 °C | 720ea/caso; per mescolare PANTA con il terreno di coltura |
| Punte con barriera contro gli aerosol 1000‐1300μl | Materiali di consumo | Fisher Scientific | 02‐707‐51 | 1000ea/pk; per distribuire il mezzo in piastra |
| Punte USA Scientific One 1‐200μpunte gialle | Materiale di consumo | Fisher Scientific | 1111‐0006 | 1000 punture/busta; per diluire le soluzioni stock di antibiotici |
Riferimenti
- Arias, M. Clinical evaluation of the microscopic-observation drug-susceptibility assay for detection of tuberculosis. Clin Infect Dis. 44, 674-674 (2007).
- Caviedes, L.
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Ristampe e permessi
