In questo articolo mostriamo come di sezionare il sistema nervoso centrale da terze larve instar Drosophila.
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Articolo metodologico
Dissezione del sistema nervoso centrale larvali in Drosophila melanogaster
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il sistema nervoso centrale (SNC) di larve di Drosophila è complessa e poco conosciuta. Un modo per indagare il sistema nervoso centrale è quello di utilizzare immunoistochimica per esaminare l'espressione di nuove e diverse proteine marker. La colorazione delle larve di tutto non è praticabile perché la cuticola dura anticorpi impedisce di penetrare all'interno della cavità del corpo. Al fine di macchiare questi tessuti è necessario sezionare l'animale prima di fissaggio e la colorazione. In questo articolo mostriamo come a sezionare le larve di Drosophila, senza danneggiare il sistema nervoso centrale. Inizia strappare la larva a metà con un paio di pinze bene, e poi girare la cuticola "inside-out" per esporre il sistema nervoso centrale. Se la dissezione viene eseguita con cura il sistema nervoso centrale rimarranno attaccati alla cuticola. Noi di solito mantenere il sistema nervoso centrale collegato alla cuticola durante le fasi di fissazione e colorazione, e solo rimuovere completamente il sistema nervoso centrale dalla cuticola appena prima del montaggio dei campioni su vetrini. Mostriamo anche alcune immagini rappresentative di un sistema nervoso centrale larvale macchiata di Eva, un fattore di trascrizione espresso in un sottogruppo di neuroni nel sistema nervoso centrale. L'articolo si conclude con una discussione di alcuni degli usi pratici di questa tecnica e le potenziali difficoltà che potrebbero sorgere.
Protocollo
- Sezionare 3 ° larve instar, lasciando collegato al sistema nervoso centrale la cuticola. Mettere in una provetta da 1,5 ml.
- Fissare in PBS (1x) contenente 2% di formaldeide per 40 minuti con dondolo. ; Usa 250ul per ogni SNC 5-10 sezionato.
- Rimuovere la formaldeide e brevemente lavare 3 volte con PBS + 0.1% Triton X-100 (PBST). Utilizzare una pipetta Pasteur finemente tirato per evitare la perdita di tessuto.
- Blocco non specifici siti di legame con le proteine e le membrane delle cellule permeabilize incubando tessuto 1-8 ore in PBST + 5% di BSA, dondolo a 4 ° C.
- Incubare in anticorpo primario diluito in PBST + 5% di BSA a dondolo....
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Discussione
Questo video mostra come sezionare il sistema nervoso centrale da terzi larve instar Drosophila. Dopo la dissezione, il sistema nervoso centrale possono essere colorati utilizzando un protocollo standard di immunoistochimica. Attualmente, è molto più ancora sconosciuto su come il sistema nervoso adulto è generato e come si memorizza e trasmette informazioni. Studi della Drosophila sviluppo larvale SNC dovrebbe accrescere la nostra conoscenza del cablaggio del sistema nervoso e la funzione.
Larve di Drosophila presentano una serie di.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da dichiarare.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Pinzette | a punta fine | |||
| Piastra di Petri da 9 pozzi | ||||
| Piatto di Petri in plastica |
Riferimenti
- Lin, D. M., Goodman, C. S. Ectopic and increased expression of fasciclin II alters motoneuron growth cone guidance. Neuron. 13, 507-523 (1994).
- Park, Y., Fujioka, M., Kobayashi, M., Jaynes, J., Datta, S.
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Ristampe e permessi
