Il protocollo testo completo di questo approccio sperimentale è disponibile in <a href="http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract?hd=author,Powers]">protocolli di corrente in Biologia Cellulare</a> .

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

ottenere uova da xenopus laevis femmine

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

Le uova di Xenopus laevis intatto, lisate, e / o frazionato sono utili per una vasta gamma di esperimenti. Questo protocollo mostra come indurre deposizione delle uova, raccogliere e dejelly le uova, e ordinare le uova per rimuovere tutte le uova danneggiate.

Ottenere uova da Xenopus laevis Femmine

Le uova di Xenopus laevis intatte, lisate e/o frazionate sono utili per un'ampia varietà di esperimenti. Questo protocollo mostra come indurre la deposizione delle uova, ...

Gli estratti di uova di Xip Labis sono utili come fonte di materiale citoplasmatico e organellare per la ricostruzione in vitro di eventi cellulari come l'assemblaggio del nucleo e l'importazione di proteine nucleari. Ovviamente, prima di poter utilizzare gli estratti di uova, è necessario ottenere le uova da rane femmine. Ciao, mi chiamo Marie Cross e sono una studentessa laureata nel laboratorio della dottoressa Maureen Power presso il Dipartimento di Biologia Cellulare dell'Università di Emory a Atlanta, in Georgia.Oggi vi mostreremo come ottenere uova di gelatina D da femmine mature di opus lavis. Questa procedura comprende i seguenti passaggi: preparazione delle rane per la deposizione delle uova con siero di gonadotropina gravida, induzione della deposizione delle uova con gonadotropina corionica umana e selezione delle uova difettose o dei citi. Cominciamo dunque.Per produrre uova, le femmine mature di rana vengono prima sottoposte a priming con gonadotropina di siero di puledra gravida. Per iniziare la procedura di priming, preparare un serbatoio contenente cloruro di sodio cento millimolare per ospitare le rane. Dopo l'iniezione, le rane sottoposte a priming devono essere mantenute a una densità di circa una rana per litro.La produzione ottimale di uova viene mantenuta allevando le rane a 18 gradi Celsius. Utilizzando un ago da 27 gauge collegato a una siringa da un mil, iniettare 0,5 mil di siero di giumenta gravida gonadotropina a 200 unità per mil nel sacco linfatico dorsale della rana per via sottocutanea.Reintrodurre le rane in forma ottimale nel serbatoio contenente cloruro di sodio a cento millimolari. Dopo due o tre giorni, indurre la deposizione delle uova iniettando nelle rane 0,5 mil di cento unità per mil di gonadotropina corionica umana, iniettando nuovamente per via sottocutanea nel sacco linfatico dorsale.Dopo l'iniezione, posizionare ogni rana in cinque litri di cloruro di sodio cento millimolare. È preferibile mettere ogni rana in un contenitore separato, poiché la qualità delle uova varia da rana a rana. Circa 16-22 ore dopo l'iniezione di gonadotropina corionica umana, rimuovere la rana da un serbatoio di acqua pulita e versare le uova in un becher.È consigliabile osservare le rane per uno o due giorni alla ricerca di segni di infezione nel sito di iniezione. A questo stadio, un rivestimento gelatinoso trasparente circonda ogni uovo, impedendo loro di toccarsi. Per rimuovere la gelatina dagli uova, sciacquare gli uova una volta con soluzione di cisteina al 2% a pH 8, quindi continuare l'incubazione in cento provette contenenti soluzione di cisteina al 2% per rana per circa cinque minuti. A temperatura ambiente, agitare delicatamente gli uova periodicamente dopo cinque minuti.Versare la soluzione di cisteina dagli ovocisti deje e lavarli tre volte con una soluzione di ringer modificata 0,25 x. Per rimuovere i detriti, versare le uova in una capsula di Petri di vetro da cento millimetri, operando al microscopio stereoscopico. Rimuovere le uova danneggiate dalla capsula di Petri con una pipetta Pasteur.Le uova mature di xip presentano una metà superiore fortemente pigmentata e una metà inferiore chiara. Al centro dell'emisfero fortemente pigmentato dell'uovo maturo dovrebbe essere visibile una piccola macchia bianca, indicativa della maturazione dell'ovocita. Un buon uovo è quello con una pigmentazione uniforme e ben modellata.Tutto ciò che non presenta questa macchia bianca è un oocita e deve essere rimosso. Tutte le uova che sono ingrandite, bianche o non uniformemente pigmentate devono essere eliminate. Un uovo particolarmente difettoso apparirà come una pallina bianca e gonfia con il confine tra gli emisferi completamente oscurato. Lavare e selezionare le uova da due a tre volte versando su di esse il buffer di lisi per le uova, quindi versare con attenzione il buffer, riducendo al minimo il numero di uova che vengono versate accidentalmente.Ora le uova possono essere lisate e possono essere preparati gli estratti. Vi abbiamo appena mostrato come ottenere e rimuovere la gelatina dalle uova di femmine mature di Xenopus laevis. Assicuratevi di vedere i nostri altri due video che vi mostrano come preparare estratti grezzi di uovo e come reconstituire in vitro l'assemblaggio nucleare utilizzando estratti di uovo frazionati.Ecco fatto. Grazie per aver guardato e buona fortuna con i vostri esperimenti.

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Emory University.  Le uova di Xenopus laevis intatto, lisate, e / o frazionato sono utili per una vasta gamma di esperimenti. Questo protocollo mostra come indurre deposizione delle uova, raccogliere e dejelly le uova, e ordinare le uova per rimuovere tutte le uova danneggiate.

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