Rendendo Patch-pipette e Elettrodi Sharp con un estrattore programmabile

Summary

Questo video mostra come utilizzare un estrattore programmabile per rendere pipette cerotto e gli elettrodi taglienti per elettrofisiologia. La stessa procedura può essere usato per fare una varietà di strumenti in vetro, tra cui aghi da iniezione.

Abstract

Microelettrodi di vetro (chiamato anche pipette) sono state un cavallo di lavoro di elettrofisiologia per decenni. Oggi, pipette quali sono realizzati in vetro capillari con un estrattore programmabile. Tali strumenti di calore il capillare utilizzando un filamento di metallo o di un laser e tirare fuori il vetro con la gravità, un motore o entrambi. Pipette per il patch-clamp registrazione si formano con il calore e solo la gravità, mentre gli elettrodi taglienti per la registrazione intracellulare utilizzare una combinazione di calore, la gravità, e un motore. La procedura utilizzata per rendere pipette di registrazione intracellulare è simile a quello usato per fare aghi da iniezione per una varietà di applicazioni, tra cui l'iniezione cRNA in ovociti di Xenopus. In generale, capillare di vetro <1,2 mm di diametro è usato per fare pipette per la registrazione di patch clamp, mentre la stretta di vetro è utilizzato per la registrazione intracellulare (diametro esterno = 1,0 mm). Per ogni strumento, l'estrattore è programmato in modo leggermente diverso. Questo video mostra come fare entrambi i tipi di pipette di registrazione con programmi prestabiliti estrattore.

Protocol

Pipette tirando

Utilizzando un microelettrodo estrattore come il P-97 Sutter Flaming / Brown, tirare un insieme di circa 10-20 pipette.

1. Selezionare il capillare di vetro. Noi usiamo borosilicato capillari (Sutter BF150-110-10, 1,5 millimetri di diametro esterno, diametro interno 1,1 millimetri, 10cm di lunghezza). Conservare con cura il vetro in modo che rimane pulito e senza polvere.
2. Progettare un programma di trazione. Usiamo un programma STEP 5, con il calore discendente e velocità ad ogni passo, e un divano piccolo il passo finale. Ricettario pipetta Sutter è un riferimento eccellente per lo sviluppo di programmi a....

Discussion

Il protocollo è illustrato qui di uso quotidiano nei laboratori di elettrofisiologia ed è anche usato per fare aghi da iniezione di cellule e animali. Con un estrattore programmabile, è facile fare pipette per una varietà di usi. Con attenzione e cura, il filamento sul vostro estrattore durerà per un anno o più. Buona fortuna con i vostri esperimenti.

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Strumento per estrattore di micropipette		Sutter Instrument Co.	P-97	O strumento simile (ad es. Sutter P-87 o P-2000)
Capillari di vetro	Reagente	Sutter Instrument Co.	BF150-86-10	O, vetro capillare simile. Per facilitare il riempimento della pipetta, utilizzare un capillare con un filamento di vetro.