Articolo metodologico

Raccolta e misurazione nocicettivo mediatori infiammatori e nelle ferite chirurgiche

DOI:

10.3791/962

⸱

29 ottobre 2008

 ,  ,  , 
1Department of Anesthesiology, Stanford University School of Medicine

In questo articolo

Retraction Notice

This article has been retracted at the request of the authors due to duplication of text in J Pain (Carvalho B, Clark DJ, Angst MS (2008) Local and Systemic Release of Cytokines, Nerve Growth Factor, Prostaglandin E2, and Substance P in Incisional Wounds and Serum Following Cesarean Delivery. J Pain 9: 650-657.) due to an honest mistake of the authors. View Retraction Notice

Sommario

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Una tecnica per la raccolta e la misura della ferita chirurgica mediatori biochimici a punti temporali specifici.

Abstract

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Gli obiettivi di questo studio sono stati per testare la fattibilità della raccolta e misurazione dei mediatori biochimici infiammatori e nocicettivi nel sito chirurgico, per valutare la relazione tra ferita e livelli sierici, e per determinare eventuali associazioni tra rilascio mediatore, il dolore e il consumo di analgesici post-cesareo consegna. Venti donne sane in fase di consegna elettiva cesareo con anestesia spinale sono stati arruolati. Essudato e mediatori del siero, i punteggi del dolore ed il consumo di analgesici sono stati misurati ad 1, 6, 24, e 48 ore post-parto cesareo. In essudato, 19 su 20 mediatori erano rilevata con certezza tra cui IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL -17, TNFa, INFγ, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 e MIP-1β, fattore di crescita nervosa (NGF), prostaglandine E2 (PG-E2) e sostanza P. ferita PG-E2 e varie citochine raggiunto l'apice all'inizio , mentre NGF ha mostrato una versione più ritardato. Non ci sono state correlazioni tra la concentrazione rispetto al profilo temporale delle ferite e delle citochine sieriche. Questo studio dimostra la fattibilità della raccolta e misurazione dei mediatori infiammatori nocicettivo e nelle ferite chirurgiche in punti temporali specifici. La mancanza di correlazioni significative tra ferita e livelli sierici sottolinea l'importanza di determinare site-specific di rilascio se patologie localizzate sono da studiare.

Protocollo

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Nocicettivo e infiammatorie raccolta mediatore biochimico

  1. On-Q ® PainBuster Dolore ® Sistema di Soccorso è inserita nello strato sottocutaneo dall'équipe chirurgica appena prima la chiusura della ferita. Il sistema fornisce continuamente soluzione fisiologica (o anestetico locale) per via sottocutanea nella ferita ad una velocità di 2 ml / h.
  2. Un rubinetto a tre vie è incorporato in questo sistema per permettere l'aspirazione di essudato in punti di tempo specificato.
  3. In punti di tempo specificato dal protocollo (ad esempio, 1, 6, 24, e 48 ore dopo il parto cesareo), 1 ml di essudato è ritirato in una tazza di polietilene contenente 30 ml di inibitore della proteasi.
  4. A intervalli stesso tempo, 10 ml di sangue viene raccolto in un tubo verde in alto la raccolta del sangue contenenti eparina di litio. 300 ml di inibitore della proteasi viene poi aggiunta ai campioni di sangue.
  5. Entro 1 ora dal prelievo, i campioni vengono messi in ghiaccio e centrifugati a 3000 rpm per 10 min.
  6. Il siero e supranate ferita viene rimosso e posto in una provetta standard e conservati a -20 ° C.

Test di analisi

  1. Una volta che tutti i campioni sono stati raccolti, vengono scongelati e analizzati allo stesso tempo.
  2. Le citochine sono poi misurati con A17-multiplex tallone piatto immunodosaggio array. Multiplex immuno-saggio tecnologia permette dosaggio fino a 100 analiti nel corpo-fluido campioni più piccoli di volume di 50 microlitri e produrre risultati comparabili con quelli ottenuti con i test ELISA. Questo piatto è in grado di misurare 1SS interleuchina (IL-1SS), interleuchina 2 (IL-2), interleuchina 4 (IL-4), interleuchina 5 (IL-5), l'interleuchina 6 (IL-6), interleuchina 7 (IL -7), interleukina 8 (IL-8), l'interleuchina (IL-10), interleuchina 12 (IL-12), interleuchina 13 (IL-13), interleuchina 17 (IL-17), fattore di necrosi tumorale α (TNF) , interferone α (INFα), fattore stimolante colonie di granulociti (G-CSF), granulociti-macrofagi fattore stimolante le colonie (GM-CSF), proteine ​​chemoattractant monociti 1 (MCP-1) e della proteina infiammatoria macrofagica 1 (MIP-1β).
  3. Fattore di crescita nervosa viene misurata con l'anticorpo NGF DY256 aggiungendolo al 17-plex piastra con l'aiuto del Bio-Plex kit ammina accoppiamento.
  4. Ogni misurazione viene effettuata in duplicati e secondo le specifiche del produttore. Curve standard per ogni analita sono generati utilizzando il analiti di riferimento forniti dai produttori a concentrazioni di 0.20, 0.78, 3.13, 12.5, 50, 200, 800, 3200 pg / ml più uno zero standard (soluzione fisiologica solo). Curve standard sono inclusi in ogni seduta e le concentrazioni del campione sono stati calcolati con Bio-Plex software di gestione.
  5. Prostaglandina E2 e P sostanza sono misurati utilizzando un kit ELISA altamente sensibilità viene eseguita Ciascun test in duplicato secondo le specifiche del produttore.

    Figura 1
    Figura 1

    Figura 1: livelli di essudato e nel siero di varie citochine pro-e anti-infiammatorie (interleuchina 1SS (IL-1SS), interleuchina 2 (IL-2), interleuchina 4 (IL-4), interleuchina 5 (IL-5), interleuchina 6 (IL-6), interleuchina 7 (IL-7), interleuchina 8 (IL-8), l'interleuchina (IL-10), interleuchina 12 (IL-12), interleuchina 13 (IL-13), interleuchina 17 (IL -17), fattore di necrosi tumorale α (TNF-α), l'interferone γ (INFγ), fattore stimolante le colonie di granulociti (G-CSF), granulociti-macrofagi colony stimulating factor (GM-CSF), fattore chemiotattico dei monociti proteina 1 (MCP-1 ) e di proteine ​​infiammatorie macrofagi 1 (MIP-1SS), il fattore di crescita nervosa (NGF), prostaglandina E2 (PG-E2) e sostanza P (SP) livelli (pg / mL) misurati al basale, 6 e 24 ore dopo il cesareo consegna .

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Discussione

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On-Q ® PainBuster dolore System ® Sollievo dovrebbe essere inserito attraverso l'incisione intera strato sottocutaneo appena prima la chiusura della ferita. Questo facilita l'aspirazione tramite il rubinetto a tre vie a intervalli di tempo specificato. On-Q ® sistema offre continuamente soluzione fisiologica per via sottocutanea nella ferita ad una velocità di 2 ml / h. Questo impedisce la coagulazione del catetere e migliora l'affidabilità del sistema di produrre campioni di essudato. Se l'aspirazione di essudato è difficil...

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Dichiarazioni

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Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

Ringraziamenti

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Il lavoro del Dr. Carvalho è supportato da una costruzione Lavora interdisciplinare in assegno di ricerca delle donne Salute presso l'Ufficio di ricerca sulla salute delle donne e il National Institute of Child Health e lo Sviluppo Umano del National Institutes of Health (5K12 HD043452). Angst dr ricevuto rifornimenti (On-Q ® PainBuster ® Post-Op sistema sollievo dal dolore) e finanziamenti per lo svolgimento del test biochimici da I-Flow (Lake Forest, California).

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
On-Q® PainBuster® Sistema post-operatorio per il sollievo dal doloreI-Flow, Lake Forest, CA
Inibitore completo delle proteasiRoche Group
Piastra Bio-PlexTM per saggio immunoanalitico multiplex a 17 parametriBio-Rad
Kit di accoppiamento amminico Bio-PlexBio-Rad
Anticorpo anti-NGF DY256R&D Systems
Kit ELISA per prostaglandina E2 e sostanza PAssay Designs

Riferimenti

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  1. Elshal, M. F., McCoy, J. P. Multiplex bead array assays: performance evaluation and comparison of sensitivity to ELISA. Methods. 38, 317-323 (2006).
  2. Heijmans-Antonissen, C., Wesseldijk, F., Munnikes, R. J., Huygen, F. J., van der Meijden, P., Hop, W. C., Hooijkaas, H., Zijlstra, F. J. Multiplex bead array assay for detection of 25 soluble cytokines in blister fluid of patients with complex regional pain syndrome type 1. Mediators Inflamm.. 28398, 1-8 (2006).
  3. Buvanendran, A., Kroin, J. S., Berger, R. A., Hallab, N. J., Saha, C., Negrescu, C., Moric, M., Caicedo, M. S., Tuman, K. J. Upregulation of prostaglandin E2 and interleukins in the central nervous system and peripheral tissue during and after surgery in humans. Anesthesiology. 104, 403-410 (2000).
  4. Holzheimer, R. G., Steinmetz, W. Local and systemic concentrations of pro- and anti-inflammatory cytokines in human wounds. Eur J Med Res. 5, 347-355 (2000).

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