Tecniche e metodi di ricerca sugli organoidi prostatici: coltura tridimensionale (3D), centrifugazione, Parafilm alveolato e metodo di fusione

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Sanghee Lee

University of California San Diego

La dottoressa Sanghee Lee ha conseguito il dottorato presso il Dipartimento di Urologia e il Programma di Biologia Cellulare e Molecolare dell'Università del Wisconsin-Madison nel 2015. La sua supervisore della tesi è stata la dottoressa Wade Bushman e ha descritto l'interazione neuronale tra vescica e prostata, nonché i cambiamenti funzionali indotti dall'infiammazione prostatica nella vescica urinaria di topi adulti. Come borsista postdottorato, la dottoressa Lee ha studiato la disfunzione vescicale neurogena in un modello murino di sclerosi multipla nel laboratorio della dottoressa Anna Malykhina presso l'Università del Colorado Anschutz Medical Campus. Nel 2017, la dottoressa Lee si è unita all'Università della California di San Diego (UCSD) come prima borsista in Neuro-Urologia con un incarico congiunto presso il Dipartimento di Urologia dell'UCSD e presso il Rady Children’s Hospital di San Diego. I membri del suo comitato di consulenza per la ricerca sono la dottoressa Christina Jamieson (PI), il dottor George Chiang, la dottoressa Yahir Santiago-Lastra, il dottor Todd Coleman e il dottor Tony Yaksh. I suoi attuali interessi di ricerca includono i meccanismi di metastasi e dolore nel cancro alla prostata con metastasi ossee.

Christina Jamieson

University of California San Diego

La dottoressa Jamieson è una scienziata traslazionale in Oncologia Urologica presso il Dipartimento di Urologia dell'Università della California, San Diego (UCSD). Studia le cause della metastasi ossea e ha sviluppato nuovi modelli derivati da campioni di pazienti per testare terapie innovative e offrire speranza ai pazienti affetti da cancro alla prostata avanzato e resistente alla castrazione. Ha conseguito il dottorato in Immunologia Molecolare presso la Brandeis University con il dottor Ranjan Sen, dimostrando che lo stimolo del recettore del linfocita T (TCR) induce direttamente l'attivazione di NF-kB e di NF-AT. La dottoressa Jamieson si è poi trasferita all'Università della California, San Francisco (UCSF) per il suo post-dottorato, dapprima con il dottor Dan R. Littman e successivamente con il dottor Keith R. Yamamoto. Ha scoperto i meccanismi di interazione tra i segnali provenienti dal TCR e dai glucocorticoidi che regolano la sopravvivenza dei progenitori dei linfociti T, modellando così il repertorio immunitario. Questi percorsi possono inoltre essere alterati nei tumori guidati dagli ormoni steroidei. La dottoressa Jamieson ha iniziato come Professore Associato presso i Dipartimenti di Urologia e Genetica Umana dell'UCLA per studiare i meccanismi di resistenza alle terapie basate sugli ormoni steroidei nei tumori, per poi trasferirsi all'UCSD con l'obiettivo di superare la resistenza terapeutica nel cancro alla prostata metastatico osseo, utilizzando modelli basati su campioni di pazienti e nuove terapie.

Collection Overview

Gli organoidi sono strutture cellulari tridimensionali (3D) coltivate ex vivo che si ritiene riproducano e mantengano le condizioni in vivo di vitalità cellulare e risposta ai farmaci terapeutici. Matrigel o collagene sono stati utilizzati come matrice extracellulare per consentire alle cellule derivate dal paziente di formare strutture tridimensionali/organoidi, inclusi sisti e sferoidi. Gli organoidi coltivati in 3D sono considerati ottimi modelli per comprendere i meccanismi di tumorigenesi e per determinare gli effetti degli agenti antitumorali. Per questo motivo, sono stati sviluppati metodi per diverse tipologie di tumore, tra cui quelli cerebrale, mammario, polmonare e prostatico. La prostata, tuttavia, presenta una certa peculiarità: i metodi attuali per la coltivazione di organoidi mostrano un tasso di successo inferiore rispetto ad altri tipi tumorali. La difficoltà nel stabilire colture di organoidi prostatici potrebbe essere in parte determinata dall'eterogeneità tumorale. La maggior parte degli organoidi prostatici deriva da xenotrapi anti paziente (PDX) ed è rappresentativa dal punto di vista genomico del tumore prostatico del paziente. Pertanto, i modelli di organoidi PDX sono di grande valore per lo studio delle vie di segnalazione a valle delle molecole bersaglio e degli effetti del trattamento con agenti antitumorali. Diversi gruppi hanno sviluppato protocolli modificati ottimizzati in base ai loro obiettivi sperimentali. L'obiettivo di questa raccolta è (1) fornire diversi esempi di condizioni di coltura ottimizzate per organoidi 3D derivati da pazienti con cancro alla prostata, (2) presentare metodologie successive per analisi a singola cellula come RNA-FISH e citometria a flusso, (3) condividere dettagli accurati della tecnica di immunohistochimica (IHC) e immunofluorescenza (IF) specifica per organoidi e (4) criteri differenziali per valutare gli effetti del trattamento farmacologico sugli organoidi.