Visualizzazione dei microrganismi del suolo tramite il test su vetrino a contatto e microscopia

1. Preparazione del microcosmo del scivolo del suolo

1. Raccogliere il terreno del giardino dalla superficie (profondità 0-6 ") e pesare 150 g di terreno in due tazze separate.
   1. Se il terreno ha un'alta densità di materia organica, pesare 100 g.
2. Etichettare una tazza "Trattamento" e l'altra "Controllo".
3. Calcola la quantità di acqua necessaria per alterare il contenuto di umidità.
   1. Il contenuto di umidità è spesso vicino alla capacità del campo.
      
4. Misurare la quantità di acqua distillata con un cilindro graduato.
5. Versare la quantità di acqua distillata in due flaconcini.
6. Etichettare una fiala "Trattamento" e l'altra "Controllo".
7. Modificare l'acqua nel flaconcino "Trattamento" con glucosio sufficiente per una concentrazione finale di glucosio nel suolo dell'1%, in base a una base di peso secco nel terreno "Trattamento".
8. Aggiungere 200 mg di NH₄NO₃ nel flaconcino "Trattamento" e mescolare per sciogliere le modifiche. Il nitrato funge da fonte di azoto di nutrienti per i microbi del suolo.
9. Non modifichi il flaconcino "Controllo".
10. In piccole aliquote di circa 50 mg, mescolare il contenuto del flaconcino "Trattamento" nella tazza "Trattamento". Mescolare con una spatola dopo ogni aggiunta di aliquota.
11. In piccole aliquote, mescolare il contenuto del flaconcino "Control" nella tazza "Control". Mescolare con una spatola dopo ogni aggiunta di aliquota.
12. Etichettare quattro vetrini per microscopio puliti: due vetrini "Trattamento" e due vetrini "Controllo".
13. Inserire i due vetrini "Trattamento" nella coppa del terreno "Trattamento" e inserire i due vetrini "Control" nella tazza del terreno "Control". Lasciare 2 cm di ogni diapositiva sporgente sopra la superficie del terreno e assicurarsi di lasciare uno spazio tra le due diapositive.
14. Coprire le tazze con pellicola trasparente e fissarla con un elastico.
15. Forare l'involucro più volte per consentire l'aria, ma evitare comunque un'eccessiva evaporazione.
16. Registra il peso di entrambe le tazze.
17. Incubare le tazze piene di terreno a temperatura ambiente in un'area designata / incubatore per 7 giorni.

2. Colorazione e microscopia a vetrino

1. Registra il peso di entrambe le tazze.
2. Calcola l'umidità del suolo al momento della rimozione della diapositiva.
3. Rimuovere le due diapositive da ciascuna tazza premendo ciascuna diapositiva in posizione inclinata e ritirandosi in modo che la faccia superiore della diapositiva non venga disturbata.
4. Identificare e contrassegnare il lato della diapositiva da macchiare e osservare.
5. Picchiettare delicatamente le diapositive sul piano di lavoro per rimuovere le particelle di terreno di grandi dimensioni.
6. Usando un asciugamano di carta umido, pulire la faccia inferiore delle diapositive. Asciugare le diapositive a temperatura ambiente.
7. Indossando occhiali protettivi e tenendo ogni vetrino con una pinna, immergere i vetrini in acido acetico al 40% (v / v) per 1-3 minuti sotto un cappa aspirante.
8. Lavare via l'acido in eccesso sotto un leggero getto d'acqua.
9. Usando una bottiglia contagocce, coprire la superficie dei vetrini con Rose Bengal fenolico. Sostenere la diapositiva su un rack di colorazione sopra un contenitore per catturare la macchia in eccesso. Fare attenzione, non lavare con forza che potrebbe rimuovere i microrganismi dalla superficie dei vetrini.
10. Macchiare i vetrini per 5-10 minuti. Non lasciare asciugare il vetrino. Aggiungi più macchie se necessario.
11. Lavare delicatamente le diapositive per rimuovere le macchie in eccesso.
12. Lasciare asciugare le diapositive a temperatura ambiente.
13. Utilizzando l'obiettivo di immersione in olio, osservare il vetrino utilizzando un microscopio (Figura 1).

Figura 1. Un vetrino al microscopio.