Estrazione Soxhlet di biomarcatori lipidici dal sedimento

1. Impostazione e preparazione dei materiali

1. Raccogliere un campione di sedimenti marini congelati, liofilizzati, frantumati e omogeneizzati. Un campione come questo contiene molti dei composti necessari per gli standard.
   1. Gli standard sono spesso costituiti da sedimenti che vengono lasciati dopo una spedizione o un'analisi di carotaggio. Ad esempio, in questo esperimento, vengono estratti i sedimenti ottenuti dalla "Mud Patch" situata appena a sud di Cape Cod. Questo sedimento è stato preso come parte di una spedizione di carotaggio, ma non sarà utilizzato per rispondere a domande scientifiche. Possiamo quindi usarlo per fare uno standard.
   2. Metti un pezzo di ~ 100 g di sedimento nel congelatore durante la notte in modo che si congeli.
   3. Una volta che il sedimento è completamente congelato, accendere il liofilizzatore (disponibile presso molti rivenditori di apparecchiature scientifiche come Fisher) e attendere che il condensatore raggiunga il suo setpoint (spesso ~ -30 ° C).
   4. Caricare il campione di sedimento nel liofilizzatore e chiudere lo spurgo per iniziare a tirare un vuoto sul campione.
   5. A seconda della quantità di acqua nel sedimento e delle dimensioni del campione, potrebbero essere necessari diversi giorni prima che il campione si asciughi.
   6. Una volta che il campione è asciutto, spegnere il liofilizzatore, sfiatarlo e rimuovere il campione.
   7. Posizionare il campione in un mortaio risciacquato con solvente e macinare in polvere usando un pestello. Fai questo all'intero campione e conservalo in un barattolo di vetro nel congelatore fino al momento dell'estrazione.
2. A seconda delle dimensioni del campione, utilizzare flaconcini con volumi compresi tra 4 e 60 ml. Per questo esperimento, utilizzare fiale di vetro borosilicato (40 ml) e tappi sicuri per solventi. Bruciare i flaconcini, le pipette di vetro borosilicato e le lattine di pesatura a 550 °C per 6 ore prima di garantire la rimozione di possibili contaminanti organici.
3. Ottenere diclorometano e metanolo (entrambi sono comuni nella maggior parte dei laboratori di geochimica organica), quindi utilizzarli singolarmente per risciacquare strumenti di laboratorio e vetreria prima dell'uso. Una miscela di diclorometano (DCM) a metanolo (MeOH; 9:1) viene utilizzata in molti laboratori per estrarre in modo efficiente biomarcatori con una vasta gamma di polarità. I solventi devono essere privi di contaminanti organici.
4. Acquisire un apparecchio soxhlet da utilizzare in questo esperimento (questi possono essere acquistati da Fisher Scientific o da altri rivenditori scientifici), quindi lavarlo e bruciarlo a 550 ° C per 6 ore prima dell'uso.
5. Ottenere ditali in fibra di vetro (acquisto da Whatman) e bruciarli a 550 °C per 6 ore prima dell'uso.

2. Preparazione del campione

1. Posizionare una teglia bruciata sulla bilancia da laboratorio e quindi tarare.
2. Risciacquare la spatola da laboratorio con solvente, quindi utilizzarla per trasferire una massa appropriata di campione nella scatola di pesatura e registrare la massa.
   1. La massa del campione varia a seconda del suo contenuto di materia organica. Il materiale magro relativamente organico (fango marino) può richiedere diversi grammi, mentre il materiale ricco di materia organica (tessuto fogliare) può richiedere molto meno.
3. Trasferire tutto il materiale nella teglia di pesatura in un ditale in fibra di vetro bruciata.

3. Estrazione

1. Trasferire ~400 mL della miscela DCM:MeOH (9:1) nel matraccio a fondo tondo (il matraccio deve essere più della metà pieno) e mettere nel mantello riscaldante. Aggiungere diversi (5-10) trucioli bollenti risciacquati con solvente.
2. Posizionare il ditale del campione, a estremità aperta, nel centrotavola dell'apparato Soxhlet.
3. Posizionare il centrotavola sopra il pallone a fondo tondo e fissare con un morsetto per bicchieri.
4. Installare il condensatore sulla parte superiore del centrotavola del Soxhlet e fissarlo con un morsetto in vetro.
5. Collegare una delle linee di acqua fredda dal condensatore alla linea di acqua fredda nella cappa utilizzando un morsetto per tubi. Instradare l'altro nello scarico.
6. Accendere l'acqua per garantire una corretta circolazione e drenaggio.
7. Accendere il mantello riscaldante e regolare la temperatura fino a quando il solvente nel pallone a fondo tondo non bolle leggermente.
8. Monitorare l'estrazione alcune volte nell'ora successiva.
   1. Verificare che la temperatura sia impostata correttamente a bassa ebollizione, che il solvente si condensi nel condensatore e goccioli nel pezzo centrale, che il pezzo centrale si stia riempiendo e svuotando correttamente e che l'acqua venga scaricata correttamente nello scarico della cappa.
9. Monitorare l'estrazione nelle successive 36 ore.
   1. Assicurarsi che la temperatura sia impostata correttamente a bassa ebollizione, che il solvente si condensi nel condensatore e goccioli nel pezzo centrale, che il pezzo centrale si stia riempiendo e svuotando correttamente, che l'acqua venga scaricata correttamente nello scarico della cappa e che il livello del solvente nel pallone a fondo tondo sia ancora circa mezzo pieno.
10. Dopo 36 ore, interrompere l'estrazione spegnendo il mantello riscaldante.
11. Etichettare il pallone "TLE".