Estrazione di biomarcatori dai sedimenti - estrazione accelerata con solvente

1. Raccolta dei materiali necessari

1. Estrarre campioni. I campioni (in questo caso, sedimenti) vengono congelati, liofilizzati, frantumati e omogeneizzati prima dell'estrazione ed estratti in gruppi per massimizzare l'efficienza.
2. A seconda delle dimensioni del campione, utilizzare flaconcini di raccolta con volumi di 40 o 60 ml. Per questo esperimento vengono utilizzate fiale di vetro borosilicato (40 ml) e tappi sicuri con solvente. Bruciare flaconcini, pipette di vetro borosilicato e barattoli di pesatura a 550 °C per 6 ore prima di garantire la rimozione di possibili contaminanti organici.
3. Il diclorometano (DCM) e il metanolo sono comuni nella maggior parte dei laboratori di geochimica organica. Usali singolarmente (metanolo prima, seguito da DCM) per risciacquare strumenti da laboratorio e bicchieri prima dell'uso. Una miscela di diclorometano a metanolo (MeOH; 9:1) viene utilizzata in molti laboratori per estrarre in modo efficiente biomarcatori con una vasta gamma di polarità. I solventi devono essere privi di contaminanti organici.
4. Ottenere un estrattore di solvente accelerato da utilizzare per questo esperimento.

2. Preparazione delle cellule campione

1. Assemblare una cella campione per ogni campione da estrarre, più uno vuoto.
   1. Per ogni cella, avvitare un cappuccio terminale su un'estremità del corpo della cella.
   2. Posizionare un filtro in fibra di vetro bruciato sopra ogni cella usando una pinzetta risciacquata con solvente. Quindi, premere delicatamente e lentamente il filtro nella cella utilizzando lo stantuffo del filtro.
   3. Etichettare i corpi cellulari per numero(ad esempio 1 - 22) per ciascun campione e scrivere "vuoto" sulla cella vuota.
   4. Riempire lo spazio vuoto con terra diatomacea (o sabbia) e chiudere con un secondo tappo terminale. Stringere a mano.

3. Preparazione dei campioni

1. Posizionare una teglia bruciata sulla bilancia da laboratorio e quindi tarare.
2. Risciacquare la spatola da laboratorio con solvente, quindi utilizzarla per trasferire una massa appropriata di campione nella scatola di pesatura e registrare la massa.
   1. La massa del campione varia a seconda del suo contenuto di materia organica. Il materiale magro relativamente organico (fango marino) può richiedere diversi grammi, mentre il materiale ricco di materia organica (tessuto fogliare) può richiedere molto meno.
3. Trasferire tutto il materiale nella scatola di pesatura in una cella ASE preparata.
4. Posizionare un altro filtro in fibra di vetro sulla parte superiore della cella, quindi premere lentamente e delicatamente verso il basso fino a raggiungere la parte superiore del campione utilizzando lo stantuffo del filtro.
5. Aggiungere terra diatomee (o sabbia) alla cellula fino a quando non è quasi piena. Fare attenzione a rimuovere eventuali detriti dai fili del corpo cellulare.
6. Chiudere la parte superiore della cella con un altro cappuccio terminale.
7. Ripetere i passaggi 3.1 - 3.6 per ogni campione.

4. Preparazione delle fiale di raccolta

1. Etichettare ogni flaconcino con il numero di una cella corrispondente(ad es. 1 - 22 o vuota) e tappo con tappo del flaconcino di raccolta ASE.

5. Estrazione

1. Posizionare ogni cella campione in uno slot numerato sul vassoio ASE superiore.
2. Posizionare il flaconcino di raccolta corrispondente nello stesso slot numerico sul vassoio ASE inferiore.
3. Creare il metodo di estrazione utilizzando la tastiera dell'ASE. Estrarre a 100 °C e 1.200 psi. Estrarre ogni campione 3 volte con una presa statica di 10 minuti e lavare il corpo cellulare con il 50% del suo volume totale tra le prese statiche.
4. Assicurarsi che il flacone di solvente contenga abbastanza solvente per estrarre tutti i campioni.
5. Risciacquare l'ASE 3x prima di iniziare la corsa premendo il pulsante "risciacquo" sul pad di controllo ASE.
6. Premere start.