Question 1

Qual è la struttura di un batteriofago?

Accepted Answer

I batteriofagi sono virus costituiti da un genoma di acido nucleico, DNA o RNA, circondato da un involucro proteico chiamato capside. Alcuni fagi hanno un involucro lipidico aggiuntivo e appendici di superficie simili a spuntoni o code. Queste particelle ultramicroscopiche sono troppo piccole per essere visualizzate con un microscopio ottico e possono essere viste solo utilizzando un microscopio elettronico.

Question 2

Come fanno i batteriofagi ad infettare e riprodursi nelle cellule batteriche?

Accepted Answer

I batteriofagi si attaccano alla superficie della cellula batterica e iniettano il loro materiale genetico nell'ospite. Il genoma virale viene replicato e le proteine del capside vengono prodotte utilizzando il macchinario biochimico della cellula ospite. Una volta che le particelle dei fagi si assemblano, vengono rilasciate lisando la cellula ospite, spesso scoppiando e uccidendo il batterio nel processo.

Question 3

Che cos'è un saggio di placca e come misura la concentrazione di fagi?

Accepted Answer

Un saggio di placca mescola i fagi con i batteri e dell'agar morbido sovrapposti a piastre di agar regolari. I batteri formano un prato continuo e, quando i fagi infettano e lisano i batteri, si formano placche come zone chiare. Contare le placche discrete e calcolare le unità formanti placca (PFU) per millilitro determina la concentrazione originale di fagi nel campione.

Question 4

Perché i colifagi sono utili indicatori di contaminazione dell'acqua?

Accepted Answer

I colifagi infettano E. coli, un comune batterio intestinale che indica contaminazione fecale. Sono indicatori surrogati affidabili per gli enterovirus che causano malattie e che sono anch'essi trasmessi per via fecale ma difficili da analizzare. Metodi di enumerazione rapidi ed economici rendono i colifagi strumenti attraenti per valutare la contaminazione fecale nell'ambiente campioni d'acqua.

Question 5

Quali condizioni sono necessarie per preparare i batteri in un saggio di placca?

Accepted Answer

I batteri devono essere nella fase di crescita logaritmica per garantire che ogni batterio sia vivo e permetta al fago di produrre progenie. Tre ore prima del test, inoculare la coltura notturna in terreno fresco e incubare a 35-37°C con agitazione. Questo tempismo assicura che i batteri raggiungano l'attività metabolica ottimale per supportare la replicazione del fago.

Question 6

Come possono essere adattati gli assay della placca per rilevare virus diversi dai batteriofagi?

Accepted Answer

Gli saggi della placca possono essere eseguiti con virus di mammiferi come l'influenza facendo crescere cellule di mammiferi come monostrati in piastre di coltura tissutale. Vengono aggiunti mezzi contenenti virus per consentire l'infezione, quindi le cellule sono ricoperte con mezzo immobilizzante come l'agarosa. Dopo un'incubazione che dura fino a due settimane, le cellule infette vengono fissate e colorate per visualizzare e contare le placche.

Question 7

Come si ottengono i singoli isolati di fagi da campioni ambientali utilizzando gli assay di placca?

Accepted Answer

I fagi vengono raccolti da campioni ambientali come il terreno mediante filtrazione, quindi utilizzati per infettare batteri sensibili in un saggio di placca. Singole placche vengono prelevate e seminate su nuove piastre di agar ricoperte di agar superiore contenente batteri. La concentrazione di fagi diminuisce lungo la striscia, consentendo l'isolamento di placche discrete da singoli tipi di fagi e un'ulteriore analisi.

Rilevamento di batteriofagi in campioni di matrici ambientali - Quiz di valutazione