Elettroforesi capillare

1. Configurazione della strumentazione CE

1. Accendere lo strumento CE e il computer. Utilizzando il software del computer, accendere la sorgente luminosa per l'analisi UV per consentirne il riscaldamento. Alcuni software hanno un indicatore quando la lampada è pronta per l'uso (l'icona della lampada diventa colorata).
2. Creare un file di metodi. Impostare i parametri importanti per l'esecuzione del CE. In questa analisi le temperature della cartuccia e della conservazione del campione sono di 35 °C. La lunghezza d'onda per il rilevamento UV è di 214 nm.
3. Scrivi un programma temporale. Il programma consiste generalmente in fasi di risciacquo (per pulire il capillare prima dell'analisi), fasi di iniezione e quindi una fase di elettroforesi. Per la fase di risciacquo, eseguire 2 risciacqui per 1 minuto utilizzando 20 psi di pressione. Il primo risciacquo è con NaOH, che aiuta ad assicurarsi che i gruppi silanolici sulla parete capillare siano deprototonati. Il secondo risciacquo è con tampone di corsa (tampone borato 0,025 M qui) per assicurarsi che il capillare sia lasciato equilibrato con tampone.
4. Per l'iniezione, l'iniezione di pressione viene utilizzata a 0,5 psi per 5 s.
5. Per la fase di elettroforesi, le condizioni sono tensione di separazione: 20 kV, tempo: 5 min, polarità normale. Per ogni passaggio, indicare anche quale flaconcino è l'ingresso e quale flaconcino è l'uscita. Salvare il file dei metodi dopo aver inserito tutti i parametri.

2. Preparazione degli standard e dei campioni di soda

1. Produrre soluzioni stock da 500 ppm di aspartame, caffeina e acido benzoico in acqua. Fare 50 ml di ciascuno, usando un pallone volumetrico.
2. Produrre una soluzione standard di 150 ppm di aspartame, 150 ppm di caffeina e 100 ppm di acido benzoico in un matraccio volumetrico da 10 ml.
3. Produrre soluzioni standard di caffeina di 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm e 200 ppm in un pallone volumetrico da 10 ml.

3. Eseguire gli esempi sul ce

1. Inserire i flaconcini contenenti campioni standard o di soda nel porta flaconcino del campione. Assicurati di annotare quale campione si trova in quale slot. Due slot hanno il buffer di esecuzione del borato e la soluzione di risciacquo NaOH da 0,1 M.
2. Nel file di metodo, inserire lo slot in cui si trova il primo flaconcino campione.
3. Acquisire una singola esecuzione, assicurandosi di inserire tutte le informazioni sui dati richieste dal programma.
4. Continuare ad acquisire dati, cambiando il flaconcino di ingresso per ciascun campione. Esegui lo standard di combinazione, le 3 concentrazioni di caffeina e un campione di Pepsi e Pepsi dietetica.
5. Inserire il target nello strumento e scegliere lo strumento appropriato.
6. Analizzare i dati sul computer. Calcola le aree di picco e gli standard di sovrapposizione e i campioni reali per aiutare a identificare i picchi. Crea una curva di calibrazione per i dati sulla caffeina.