Question 1

Come l'elettroforesi capillare separa le molecole?

Accepted Answer

L'elettroforesi capillare separa le molecole in base alla loro mobilità elettroforetica, che dipende dalla carica, dalla dimensione e dalla viscosità del solvente. Un campo elettrico applicato attraverso un tubo capillare fa sì che le molecole positivamente cariche si muovano più velocemente verso l'uscita negativa, mentre le molecole negativamente cariche si muovono più lentamente verso l'ingresso positivo. Le molecole neutre vengono trasportate insieme al flusso di massa, con conseguente separazione per carica e dimensione.

Question 2

Che cos'è il flusso elettro-osmotico nell'elettroforesi capillare?

Accepted Answer

Il flusso elettro-osmotico è il movimento di massa della soluzione attraverso il capillare causato dal campo elettrico. Gli ioni di sale positivamente caricati lungo le pareti del capillare negativamente cariche si muovono verso l'estremità negativa, trascinando la soluzione al centro attraverso il tubo. Questo flusso trasporta tutte le molecole, incluse quelle neutre, e contribuisce all'efficienza complessiva della separazione nel capillare.

Question 3

Perché l'elettroforesi capillare è più efficiente della cromatografia liquida ad alta prestazione?

Accepted Answer

L'elettroforesi capillare ha un ampio rapporto superficie-volume che dissipa efficacemente il calore, consentendo l'applicazione di tensioni di 10.000-20.000 V senza danneggiare la separazione. Questa alta tensione consente separazioni più rapide ed efficienti con una maggiore capacità di picco rispetto all'alto-cromatografia liquida a prestazione. Le separazioni CE sono particolarmente efficaci per le molecole cariche e forniscono una risoluzione superiore.

Question 4

Come vengono rilevate e registrate le molecole nell'elettroforesi capillare?

Accepted Answer

Le molecole vengono rilevate da un rivelatore come UV-Vis mentre escono dal capillare. L'intensità del segnale del rivelatore viene rappresentata rispetto al tempo per creare un elettroferogramma, che mostra picchi corrispondenti a composti diversi. L'elettroferogramma rivela quanti composti sono presenti in un campione e la quantità di ogni sostanza in base alla posizione e all'area del picco.

Question 5

Quali passaggi di preparazione del campione sono necessari prima di eseguire l'elettroforesi capillare?

Accepted Answer

Prima di eseguire CE, preparare soluzioni madri di analiti a concentrazioni note, quindi creare soluzioni standard e standard di calibrazione a concentrazioni variabili. Per i campioni di soda, il degassaggio con azoto rimuove i gas disciolti che potrebbero interferire con la separazione. I campioni vengono collocati in fiale e caricati nel portacampioni dello strumento, con un'attenta registrazione della posizione di ogni fiala per un'analisi accurata.

Question 6

Come viene utilizzata una curva di calibrazione per determinare la concentrazione dell'analita nell'elettroforesi capillare?

Accepted Answer

Una curva di calibrazione viene creata eseguendo soluzioni standard a concentrazioni note e misurando le loro aree di picco. La relazione tra concentrazione e area di picco viene tracciata per stabilire una curva standard lineare. Le aree di picco dei campioni sconosciuti vengono poi confrontate con questa curva per calcolare la concentrazione dell'analita, consentendo analisi quantitativa di composti come la caffeina in campioni di bevande analcoliche.

Question 7

Quali sono le applicazioni dell'elettroforesi capillare in ambito farmaceutico e di ricerca?

Accepted Answer

L'elettroforesi capillare viene utilizzata nel controllo qualità farmaceutico per rilevare prodotti di lato nei farmaci e verificare il corretto ripiegamento delle proteine. Separa i frammenti di DNA con una risoluzione di singolo paio di basi per il sequenziamento e l'analisi genetica. Quando accoppiata con un spettrometro di massa, la CE può identificare le modificazioni proteiche e le loro posizioni, rendendola preziosa per caratterizzare molecole biologiche complesse nei laboratori accademici e industriali.

Elettroforesi capillare - Quiz di valutazione