Procedure di assistenza di base

1. Manipolazione di topi immunocompetenti (convenzionali)

È stato dimostrato che i disturbi immunitari dei topi sono molto simili a quelli degli esseri umani. ² Poiché questi animali hanno capacità immunologiche limitate, le procedure di manipolazione e cura di tali animali sono state concepite per ridurre al minimo il rischio di malattie infettive mediante l'uso di controlli tecnici, dispositivi di protezione individuale per il personale addetto alla cura degli animali e procedure operative standard; mitigano la contaminazione dell'ingabbiamento e di altre attrezzature con cui gli animali sono in contatto.

1. Disimballaggio dai container di spedizione: ricevere animali da altre istituzioni o venditori di animali rappresenta un rischio per gli animali già ospitati all'interno della struttura per animali. Durante il transito, le scatole di trasporto degli animali possono venire a contatto con agenti patogeni. Pertanto, è necessario eseguire una procedura corretta quando si disimballano i contenitori di spedizione.
   1. I requisiti minimi dei dispositivi di protezione individuale (DPI) sono guanti, camici da laboratorio o scrub puliti, una maschera antiparticolato e occhiali di sicurezza quando si maneggiano gli animali.
   2. Selezionare la gabbia appropriata, compreso il coperchio della barra metallica e la parte superiore della barriera. La gabbia deve essere fornita con lettiere e materiali di nidificazione appropriati. Tutte le intasagioni devono essere preparate e collocate nell'area ricevente prima dell'arrivo degli animali.
   3. All'arrivo, le scatole di trasporto vengono collocate in una stanza sicura e a temperatura controllata. Quindi, esaminare il contenitore per eventuali danni.
   4. Disinfettare le superfici esterne del contenitore di spedizione con un prodotto a biossido di colina per distruggere eventuali agenti patogeni dannosi. Assicurarsi che il disinfettante sia a contatto con la scatola in conformità con le raccomandazioni dei produttori, di solito 15-30 minuti.
   5. Posizionare il contenitore in una stazione di trasferimento degli animali (ATS). L'ATS fornisce un flusso d'aria filtrato HEPA all'interno della cappa che fornisce protezione dagli allergeni creando una barriera d'aria sottovuoto tra l'utente e la zona di lavoro. Ciò garantisce un'esposizione minima ai peli di animali / peli e al materiale della lettiera della gabbia. L'aria unidirezionale protegge anche gli animali dall'aria della stanza circostante, riducendo al minimo la possibilità di contaminazione.
   6. Una volta aperto il container, valutare la salute generale degli animali. Prendi nota di eventuali animali feriti o malati.
   7. Metti gli animali nelle gabbie assemblate nelle dimensioni del gruppo appropriate. Il raggruppamento dovrebbe essere conforme alle normative spaziali e al protocollo sperimentale a cui saranno assegnati.
   8. Coprire la gabbia con il coperchio della barra metallica. Fissare il divisore sul coperchio della barra metallica per creare due aree sul coperchio.
   9. Selezionare il cibo appropriato e posizionare il cibo in un lato del coperchio della barra metallica. Lasciare aperto il secondo lato per consentire una migliore circolazione dell'aria.
   10. L'acqua sarà fornita tramite bottiglie d'acqua o un sistema di irrigazione automatico. Le bottiglie d'acqua vengono utilizzate per i topi appena svezzati per garantire che siano in grado di mantenere i loro livelli di idratazione. Per l'ingabbiamento IVC con irrigazione automatica, caricare il tubo di irrigazione prima di posizionarlo sul rack.
   11. Posizionare la gabbia su un rack. Se si utilizzano IPC, verificare che la gabbia sia completamente inserita nel rack e che il tubo del sorso sia fissato al sistema di irrigazione.
2. Gabbia che cambia topi convenzionali
   1. Le gabbie per animali vengono cambiate in un ATS. L'ATS viene disinfettato alla fine di ogni sessione.
   2. È possibile aprire una sola gabbia alla volta.
   3. L'intasamento preparato con la lettiera appropriata e i materiali di nidificazione viene portato nella stanza degli animali. Un piccolo numero di gabbie sono collocate nell'ATS.
   4. Le gabbie IVC con tubi di sorso interni devono essere caricate per forzare l'acqua nel sorso per rimuovere lo spazio morto dell'aria nel tubo del sorso. Se non caricati correttamente, i mouse potrebbero non essere in grado di fornire una pressione sufficiente sul tubo del sorso per rimuovere l'aria da esso.
   5. I requisiti minimi dei dispositivi di protezione individuale (DPI) sono guanti, camici da laboratorio o scrub puliti, una maschera antiparticolato e occhiali di sicurezza quando si maneggiano gli animali.
   6. Una gabbia di animali da cambiare viene collocata in una nuova gabbia e quindi nell'ATS.
   7. Gli animali vengono trasferiti a mano o con l'uso di una pinina imbottita. I guanti vengono cambiati tra le gabbie o tra gruppi di topi. I guanti possono anche essere disinfettati con una sostanza chimica non tossica tra le gabbie.
   8. È stato dimostrato che il trasferimento dell'area di nidificazione dei topi in una gabbia pulita aiuta con la transizione nella gabbia pulita, specialmente per i maschi ospitati in gruppo. Anche altri elementi di arricchimento vengono trasferiti nella nuova gabbia.
   9. Una volta che la parte superiore della gabbia o l'alimentatore viene inserito nella nuova gabbia, viene aggiunto il cibo.
   10. Il piano della barriera viene posizionato sulla nuova gabbia e la gabbia viene restituita al rack.
   11. Le gabbie IVC devono essere correttamente agganciate al rack per garantire che le valvole dell'aria e dell'acqua siano inserite.

2. Manipolazione di topi immunocompromessi

1. Disimballaggio dai container di spedizione
   1. Gli animali immunocompromessi devono essere disimballati in condizioni sterili. Tutti gli individui che maneggiano topi immunodefici devono indossare un camice sterilizzato a vapore, maschera, cofano per capelli e guanti sterili. La tecnica asettica dovrebbe essere usata in ogni momento quando si consegnano questi animali.
   2. Tutte le attrezzature e l'intasamento dovrebbero essere state sterilizzate a vapore, radiazioni UV o sterilizzate chimicamente con un ammollo in etanolo al 70% per almeno 30 minuti Ci sono due opzioni per l'intasamento sterile: intasamento standard che è stato avvolto e sterilizzato a vapore, o intasamento che viene sterilizzato - di solito attraverso l'irradiazione - dal venditore. Queste gabbie sono un uso unico, unità usa e getta.
   3. Prima di manipolare i topi sotto il cappuccio a flusso laminare, il cappuccio viene spruzzato con etanolo al 70% con il ventilatore in funzione. Il ventilatore del cappuccio deve rimanere sempre acceso per mantenere l'ambiente sterile. Dopo ogni utilizzo, il cappuccio viene spruzzato con un disinfettante e pulito da tutti i detriti e nuovamente spruzzato con etanolo al 70%.
   4. In modo ottimale, sono necessarie due persone per la corretta ricezione dei topi immunocompromessi: una per gestire gli animali usando tecniche asettiche (il tecnico sterile) e una che gestirà gli oggetti contaminati (il tecnico non sterile). La persona non sterili dovrebbe comunque indossare un abito pulito a maniche lunghe; cappotto da laboratorio o smock; maschera; cofano; e guanti sterili per prevenire la contaminazione dell'interno sterile nel caso in cui debbano raggiungere il cofano.
   5. Preparare una cappa a flusso laminare come descritto in precedenza. È preferibile avere una cappa dedicata agli animali immunocompromessi. Si raccomanda che la cappa sia dotata di luci di sterilizzazione a raggi ultravioletti (UV) che possono essere utilizzate per sterilizzare l'interno della cappa tra un uso e l'altro. Un timer viene utilizzato per garantire che la superficie della cappa abbia un'adeguata esposizione ai raggi UV.
   6. L'esterno di tutte le forniture che vengono inserite nel cofano viene spruzzato con alcol al 70%, incluso l'imballaggio esterno di cibo, acqua e intasamento.
   7. I contenitori di spedizione vengono spruzzati con una soluzione di biossido di cloro prima di essere collocati nel cofano. Una volta messi nel cappuccio, devono rimanere aperti per 15-30 minuti.
   8. Il conduttore di animali designato apre il cibo sterile e l'acqua sotto il cofano.
   9. Il tecnico non sterilia apre la scatola di spedizione sotto il cofano. Il tecnico non sterili deve prestare attenzione per evitare il contatto con le superfici interne della cappa e l'interno della scatola di spedizione.
   10. Il conduttore di animali apre la gabbia sterile e prepara la gabbia posizionando cibo e acqua sulla parte superiore della gabbia. I topi vengono quindi rimossi dalla scatola di spedizione e collocati nella gabbia sterile.
   11. Le condizioni degli animali sono notate dal conduttore di animali sterili. Tutti gli animali che appaiono malati o hanno lesioni evidenti saranno segregati. Tutte le gabbie contrassegnate con animali che richiedono attenzione veterinaria saranno posizionate per la manipolazione, il cambio della gabbia o la manipolazione sperimentale per ultimo, per ridurre la potenziale contaminazione di altri animali.
   12. La persona non sterilista rimuoverà la gabbia popolata dal cofano. Le gabbie possono essere posizionate su un rack standard come gabbie statiche o su un rack ventilato come IPC. Negli IPC, i topi dovrebbero essere dotati di materiali di nidificazione aggiuntivi per aiutare con la regolazione termica.
   13. Il conduttore di animali dovrebbe cambiare i guanti dopo ogni contenitore di spedizione per evitare possibili contaminazioni incrociate di gruppi di animali. Il numero del contenitore di spedizione è registrato sulla scheda della gabbia per tracciare l'origine degli animali in caso di malattia.
   14. Le forniture inutilizzate possono essere salvate per un uso futuro a condizione che il contenitore originale possa essere risigillato. Il cibo inutilizzato viene rimosso dalla stanza.
   15. I topi devono sottoporsi a un periodo di acclimatazione minimo di una settimana prima dell'uso sperimentale.
2. Cambio gabbia per topi immunocompromessi
   1. Le gabbie per topi vengono cambiate almeno una volta alla settimana, o più spesso se ritenuto necessario.
   2. I passaggi per la preparazione della cappa, la preparazione della gabbia e i DPI del personale sono gli stessi del disimballaggio degli animali.
   3. Gli animali vengono trasferiti a mano o con l'uso di pinse di forza imbottite. Il conduttore di animali designato dovrebbe reglove dopo ogni 5-10 gabbie, se i guanti sono strappati o contaminati, o se un animale appare malato.
   4. Eventuali gabbie con animali che appaiono malati saranno posizionate alla fine dell'ordine di cambio della gabbia, per evitare la possibile esposizione di animali sani a patogeni o contaminanti.
   5. Se il cibo e/o l'acqua devono essere aggiunti alla gabbia prima del successivo cambio di gabbia programmato, deve essere fatto in modo asettico sotto il cofano preparato.