Necroscopia diagnostica e prelievo di tessuti

1. Esame esterno

Un esame esterno grossolano del corpo, che include l'ispezione visiva del corpo per lesioni e masse, dovrebbe essere eseguito come fase iniziale di un'autopsia. Il pelo deve essere esaminato per le aree di perdita di capelli. I denti e le unghie vengono valutati per una crescita o un'usura eccessiva. Qualsiasi colorazione della pelliccia alla bocca, alle narici, agli occhi, alle aperture anali e genitali dovrebbe essere notata. I test del nastro, il raschiamento della pelle e gli esami delle pelli devono essere eseguiti per rilevare i parassiti esterni (vedere le procedure di seguito).

1. Test su nastro
   1. L'attrezzatura necessaria per un test su nastro include guanti, una striscia di nastro di cellophane trasparente, un vetrino per microscopio e forbici.
   2. I guanti sono sempre indossati quando si maneggia il nastro, poiché l'adesivo solleva oli e cellule della pelle dalle dita, oscurando i risultati o causando confusione durante la valutazione del vetrino.
   3. Tagliare un pezzo di nastro leggermente più stretto della larghezza e più corto della lunghezza del vetrino del microscopio.
   4. Premere con attenzione il lato appiccicoso del nastro sull'ano e sull'area circostante e rimuoverlo rapidamente.
   5. Usando l'estremità opposta del nastro, premerlo tra le scapole e rimuoverlo rapidamente.
   6. Applicare il nastro sul vetrino del microscopio.
   7. Il test su nastro è pronto per l'esame microscopico. Le uova di parassiti sono visibili con ingrandimento 4X, ma dovrebbero poi essere esaminate con ingrandimento 10X per identificare correttamente la specie.
   8. È importante evitare di toccare il lato adesivo del nastro. Il nastro solleverà i detriti dalle mani guantate e renderà difficile la lettura della diapositiva.
2. Raschiatura della pelle
   1. Il test di raschiatura cutanea viene eseguito su qualsiasi area di alopecia, lesioni cutanee o escoriazione.
   2. L'attrezzatura necessaria per raschiare la pelle è un vetrino per microscopio in vetro pulito, olio minerale e una spatola metallica o una lama di bisturi.
   3. Posizionare alcune gocce di olio minerale sul vetrino del microscopio.
   4. Pizzicare la pelle in una piega sul bordo della lesione o dell'area di interesse.
   5. Metti una piccola quantità di olio minerale sulla pelle.
   6. Posizionare il bordo della spatola o della lama del bisturi sulla pelle e raschiare contro la direzione della crescita dei capelli.
   7. Continuare a raschiare fino a quando una piccola quantità di arrossamento è visibile sulla pelle.
   8. Posizionare i capelli e il tessuto raschiati dalla superficie della pelle nell'olio sul vetrino del microscopio. Se necessario, distribuire il materiale in modo che sia distribuito uniformemente nell'olio.
   9. Il vetrino è ora pronto per essere esaminato al microscopio. Se lo si desidera, è possibile applicare un coverslip alla goccia d'olio sul vetrino. Esaminare la diapositiva con ingrandimento 4X e 10X.
3. Esame Pelt
   1. L'esame pelt è l'ultimo esame esterno eseguito; tuttavia, viene effettivamente fatto dopo che l'esame interno è stato completato.
   2. L'animale viene posto in una capsula di Petri di vetro o plastica dopo che sono stati raccolti tutti i campioni di organi interni.
   3. Il piatto viene posto in frigorifero per 15 minuti.
   4. Dopo 15 minuti, il piatto viene posto sotto un microscopio sezionante e la pelle viene esaminata per i parassiti esterni. La maggior parte degli acari della pelliccia si sposterà alle estremità dei peli e sarà facilmente osservabile.

2. Esame interno grossolano della cavità addominale

1. Ascisare la pelle
   1. Un piccolo taglio è fatto appena anteriormente al bacino nelle femmine e sopra il prepuzio nei maschi.
   2. Il taglio della pelle è esteso al mento.
   3. La dissezione smussata viene utilizzata per allentare la pelle dalla fascia e dal muscolo.
   4. I tagli trasversali sono fatti anteriormente agli arti posteriori e posteriori agli arti anteriori. Bisogna fare attenzione a non irrecidere i vasi sanguigni nella zona ascellare.
   5. Utilizzare la dissezione smussata per esporre l'area cervicale e il torace. È necessario prestare particolare attenzione per evitare la rottura dei vasi giugulari e carotidi nel collo.
2. Ghiandole mammarie
   1. Nelle femmine, esaminare il tessuto mammario per cercare masse, scolorimento o anomalie.
   2. Le femmine in allattamento o in gravidanza avranno un aumento del volume del tessuto mammario e il latte potrebbe essere presente.
   3. Il tessuto mammario si trova dalla parte superiore dello sterno al manubrio all'apertura genitale sulla superficie ventrale e si estende lateralmente su entrambi i lati quasi toccando la superficie dorsale ai fianchi e alle spalle.
   4. L'escissione delle ghiandole mammarie richiede di afferrare il bordo della ghiandola con una pinna per il pollice e l'uso di una dissezione smussata per allentare gli attaccamenti alla pelle. Una volta che la ghiandola è stata separata dalla pelle, le forbici dell'iride possono essere utilizzate per tagliare eventuali attacchi rimanenti prima di posizionare la ghiandola in una soluzione fissativa.
3. Ghiandole sottocutanee
   1. Le ghiandole prepuziali sono accoppiate e situate appena anteriormente al prepuzio nel ratto maschio. Appaiono grandi e sono di colore da grigio a giallastro con un aspetto schiumoso.
   2. Le ghiandole salivari sottomandibolari sono accoppiate, situate nella mandibola, e si estendono lungo il collo fino al manubrio sterno. Hanno una copertura dura e sono strettamente aderenti ai muscoli.
   3. La rimozione di queste ghiandole richiede una dissezione smussata e una cura extra quando si lavora nella regione cervicale per prevenire la rottura dei vasi sanguigni. La dissezione smussata è una tecnica nella dissezione anatomica in cui i tessuti sono separati e le strutture sottostanti esposte senza taglio.
   4. Per la dissezione smussata, le forbici vengono utilizzate per disarti i tessuti, piuttosto che per tagliarli. Le punte chiuse vengono spinte nel tessuto e quindi aperte per dividere il tessuto lungo i piani naturali. Questo processo richiede pazienza e un tocco delicato, poiché lo stiramento del tessuto può causare danni agli organi e ai vasi sanguigni adiacenti.
   5. Le ghiandole, una volta liberate dai muscoli sottostanti, vengono sollevate e gli eventuali attaccamenti residui vengono recisi.
   6. Le ghiandole richiedono almeno un taglio per consentire la penetrazione del fissativo.
   7. Il grasso sottocutaneo viene valutato per quantità e deposizione. Un animale obeso può avere una grande quantità di grasso con la pelle che si sente ispessita. Gli animali disidratati avranno una ridotta elasticità della pelle e si sentiranno più sottili.
4. Muscolo
   1. Osserva i muscoli addominali, intercostali ed esposti del collo e degli arti. Nota qualsiasi ispessimento anormale, masse o scolorimento.
   2. Se il muscolo è necessario per l'analisi, selezionare e tagliare via il campione prima di prendere qualsiasi organo addominale per ridurre la contaminazione del sangue.
5. Apertura della cavità corporea
   1. Un piccolo taglio trasversale viene effettuato nel punto più caudale del muscolo addominale esposto.
   2. Sollevando il muscolo lontano dagli organi, tagliare lungo la linea alba allo xifoide.
   3. Tagliare i muscoli addominali dalla linea mediana lateralmente, appena sopra gli arti posteriori su entrambi i lati.
   4. Tagliare il muscolo addominale lungo la curva delle costole su entrambi i lati.
6. Grasso addominale
   1. Valutare la quantità e l'accumulo di grasso corporeo. Un animale sano avrà cuscinetti di grasso addominale e un po 'di grasso lungo la superficie dorsale nella cavità addominale. Un animale eccessivamente magro, o un animale molto giovane, non avrà quantità apprezzabili di grasso che circondano i reni.
   2. Osservare il colore del grasso corporeo e notare eventuali anomalie.

3. Organi addominali

1. Fegato
   1. Normalmente, il colore del fegato dovrebbe essere un rosso scuro. I margini dovrebbero essere lisci e avere un bordo nitido. Un fegato anormale avrà un bordo ispessito e può avere tacche o bordi smerlati.
   2. Bisogna fare attenzione quando si maneggia il fegato, in quanto è un tessuto friabile. Qualsiasi interruzione dell'integrità dell'organo comporterà la fuoriuscita di sangue nella cavità del corpo e l'oscuramento degli organi.
   3. Riflettere delicatamente il fegato lontano dal diaframma e fare un taglio attraverso i vasi sanguigni anteriori al fegato.
   4. Riflettere il fegato verso il diaframma e afferrare il nodo fibroso che collega tutti i lobi del fegato centralmente. Sollevare il fegato mentre si tagliano tutti gli attaccamenti al tratto intestinale e allo stomaco.
   5. Rimuovere il fegato in un unico pezzo e asciugare il sangue in eccesso dalla superficie dell'organo. Può essere posto in un bagno salino, o risciacquato in soluzione salina sterile, prima di tagliare in sezioni più sottili per consentire la penetrazione di soluzioni fissative.
2. Cistifellea
   1. La cistifellea è un piccolo sacco trasparente che spesso appare giallo a causa dell'accumulo di bile. È presente nei topi, ma non nei ratti.
   2. La cistifellea si trova tra la parte superiore più lobi del fegato lungo la linea mediana. È generalmente collegato al diaframma da un frenulo sottile che può essere accidentalmente strappato, causando la rottura della cistifellea.
   3. La cistifellea può essere rimossa con il fegato e separata in seguito per l'esame.
3. Milza
   1. La milza è rosso scuro e si trova lungo la curvatura inferiore dello stomaco. Dovrebbe essere di forma regolare, con una superficie leggermente opaca.
   2. È generalmente più grande nei maschi che nelle femmine. Gli animali con infezioni parassitarie interne, infezioni batteriche o malattie del sangue possono avere ingrossamento della milza.
   3. Poiché la milza filtra i globuli rossi danneggiati dalla circolazione, è piena di sangue. Quando si rimuove la milza, evitare di perforare l'organo.
   4. Per rimuoverlo, la milza viene sollevata e gli attacchi tagliati tra lo stomaco e la milza.
4. Tratto intestinale
   1. I cambiamenti post-mortem si verificano rapidamente e includono il pooling di sangue nei tessuti, con conseguente comparsa di lividi e il gonfiaggio dell'intestino con gas, spesso prodotto da una crescita eccessiva batterica. Il tratto intestinale viene accuratamente esaminato dopo che è stato rimosso dal corpo.
5. Stomaco
   1. Lo stomaco si trova all'estremità distale dell'esofago. Sembra essere bi-tonico, differenziando le porzioni muscolari e ghiandolari.
   2. Lo stomaco dovrebbe essere valutato per la presenza di cibo dal tatto. I roditori generalmente mangiano costantemente a causa di un alto tasso metabolico. Si dovrebbe notare uno stomaco vuoto, in quanto può essere indicativo di malattia.
   3. Non tagliare lo stomaco, poiché il contenuto contaminerà gli organi nella cavità addominale.
   4. Per rimuovere lo stomaco dal tratto intestinale, l'esofago viene reciso appena anteriormente allo stomaco. Se lo stomaco deve essere collocato in un contenitore comune di fissativo, un pezzo di sutura può essere legato attorno all'esofago per evitare la fuoriuscita del contenuto dello stomaco prima del taglio.
6. Intestino tenue
   1. L'intestino tenue è composto da tre sezioni: il duodeno, il digiuno e l'ileo. Non conterrà pellet fecali.
   2. Il duodeno è una sezione più corta dallo sfintere dello stomaco posteriore all'inizio del digiuno. Il dotto biliare entra nell'intestino tenue al duodeno e il tessuto pancreatico è più saldamente attaccato a questa porzione dell'intestino tenue.
   3. Il digiuno è la porzione centrale dell'intestino tenue.
   4. I cerotti di Peyer, composti da tessuto linfoide in piccole macchie ovali, sono presenti sulla superficie non microeserica del digiuno e dell'ileo nel ratto. ³ Questi fanno parte del sistema immunitario e possono essere utili nella diagnosi delle malattie immunitarie.
   5. L'ileo è la porzione distale dell'intestino tenue ed è la parte più lunga, che termina al cieco.
7. Cieco
   1. Il cieco è di colore verdastro e molto morbido.
   2. Si trova alla giunzione dell'intestino tenue e crasso.
   3. La fermentazione avviene nel cieco, quindi la puntura dell'organo si tradurrà in un cattivo odore e contaminazione degli organi con batteri.
8. Intestino crasso
   1. L'intestino crasso inizia al cieco e continua fino all'ano. È facilmente identificabile, poiché i pellet fecali possono essere visualizzati all'interno del lume dell'intestino.
   2. Non ci dovrebbero essere aree di emorragia o scolorimento immediatamente dopo l'eutanasia.
9. Mesentere
   1. L'intestino tenue e crasso sono ancorati al corpo dal mesentere, una membrana contenente vasi sanguigni, grasso e linfonodi.
   2. Dovrebbe essere esaminato per i linfonodi ingrossati e qualsiasi massa prima della rimozione del tratto intestinale.
10. Pancreas
    1. Il pancreas è un organo diffuso situato sotto lo stomaco e tra le prime pieghe del duodeno. È di colore da marrone chiaro a grigio e composto da più piccoli lobi con bordi irregolari.
    2. Potrebbe non essere possibile rimuovere il pancreas in un unico pezzo.
    3. Se il tessuto pancreatico deve essere raccolto, deve essere fatto prima della rimozione del tratto intestinale.
    4. Il tessuto identificato come pancreatico deve essere accuratamente preso in giro lontano dal tessuto mesenterico che lo circonda.
11. Rimozione del tratto intestinale
    1. Il tratto intestinale viene rimosso come un unico pezzo, iniziando con lo stomaco e estendendosi fino all'ano.
    2. Un taglio viene effettuato attraverso l'intestino crasso, appena anteriore all'ano. L'intero tratto intestinale può essere sollevato e tutti gli attacchi membranosi recisi. Il tratto intestinale può quindi essere rimosso dal mesentere, tagliato in sezioni e fissato.
    3. Quando si posizionano sezioni dell'intestino in barattoli contenenti altri organi, è imperativo che le estremità siano legate per prevenire la contaminazione dei tessuti con batteri intestinali.
    4. Il lume del tratto intestinale può essere esposto riducendone la lunghezza usando piccole forbici a punta fine. L'interno può essere risciacquato dopo aver esposto il lume.
    5. Alcuni studi possono richiedere che una porzione di intestino venga rimossa e lavata piuttosto che tagliata. Fissando un ago smussato in un'estremità del tessuto asportato, la soluzione salina o fissativa può essere forzata nell'intestino per lavare il contenuto.
12. Rene
    1. I reni sono organi accoppiati situati contro i muscoli della schiena. Il rene destro è più alto del sinistro. I reni negli animali più anziani possono essere circondati da depositi di grasso, rendendoli difficili da visualizzare.
    2. Ha approssimativamente le dimensioni e il colore di un fagiolo scuro e le sue superfici dovrebbero essere lisce.
    3. Immediatamente anteriore al rene è la ghiandola surrenale, che appare come un piccolo nodulo rosa chiaro.
    4. Per rimuovere il rene, isolarlo usando una pinca e tagliare tra il rene e l'uretere.
    5. I reni hanno una capsula esterna dura che può essere staccata per visualizzare meglio le superfici. Tagliare un rene a metà lungo l'asse lungo e l'altro rene trasversalmente. Si noti che qualsiasi graniglia all'interno del rene potrebbe indicare la presenza di cristalli o depositi minerali.
13. Sistema riproduttivo femminile
    1. L'utero è una struttura a forma di Y. Il corpo dell'utero è corto con le corna accoppiate a sinistra ea destra. Le corna terminano alle tube di Falloppio e alle ovaie. In una femmina non incinta, le corna saranno rosa pallido e sottili. In un animale in gravidanza, le corna appariranno più scure e avranno vasi sanguigni pronunciati che corrono adiacenti alle corna uterine. Man mano che la gestazione procede, le corna uterine avranno un aspetto "filo di perle". Gli embrioni in via di sviluppo creeranno un'area pallida all'interno del corno e, man mano che si sviluppano, l'utero si allungherà e il tessuto diventerà più sottile, consentendo la visualizzazione.
    2. Le ovaie si troveranno appena sotto i reni. Avranno una superficie ruvida a causa delle diverse fasi di maturazione dei follicoli. Le ovaie cistiche avranno vescicole piene di liquido. Questo fluido può variare da colore paglierino a sanguigno.
    3. Per rimuovere le ovaie, tagliare gli attaccamenti arteriosi anteriormente e la tuba di Falloppio posteriormente. Se lo si desidera, le ovaie possono essere tolte attaccate all'utero.
    4. Per rimuovere l'utero, deve essere afferrato delicatamente e la trazione applicata per essere in grado di tagliare sotto la cervice. Dopo il taglio, sollevare il corpo e le corna dell'utero, rompendo qualsiasi attaccamento nella cavità del corpo.
14. Sistema riproduttivo maschile
    1. Le vescicole seminali sono strutture bianche, a forma di corno di ariete, accoppiate situate anteriormente alla vescica urinaria e attaccate sulla linea mediana alla ghiandola prostatica. Le dimensioni variano, ma possono essere grandi come il cieco.
    2. La ghiandola prostatica si trova intorno alla vescica urinaria alla base. Questo tessuto è generalmente un'abbronzatura leggera. Negli animali più anziani, può presentare iperplasia. Gli animali più anziani generalmente avranno più grasso corporeo che può rendere difficile la visualizzazione della ghiandola prostatica.
    3. I testicoli sono accoppiati e situati nelle sacche scrotali. La superficie deve essere liscia con una vascolarizzazione fine evidente sulla superficie. Topi e ratti mancano di un anello inguinale o sfintere, che consente all'animale di ritirare i testicoli nella cavità addominale. Per visualizzarli, afferrare i cuscinetti di grasso addominale situati nell'addome inferiore e tirarli anteriormente. Questo tirerà i testicoli dallo scroto per consentire l'esame. L'epididimo è lungo il margine inferiore del testicolo e si assottiglia verso l'alto. Il dotto deferente è attaccato all'estremità dell'epididimo e riconduce alla prostata.
    4. La rimozione dei testicoli può essere effettuata tagliando l'attacco allo scroto e tagliando i dotti deferenti.
    5. La rimozione della prostata e delle vescicole seminali richiede di afferrare la base della vescica urinaria e il sollevamento, mentre si tagliano gli attaccamenti sotto la prostata.

4. Cavità toracica

1. Polmoni
   1. I polmoni sono normalmente di un colore rosa brillante e spugnosi nella consistenza con una superficie liscia. Tuttavia, l'eutanasia con CO₂ può causare emorragie polmonari, con conseguenti macchie rosso scuro che possono coprire l'intera superficie polmonare.
2. Cuore
   1. Il cuore è rosso scuro con quattro camere. I ventricoli sono muscolosi e si sentono fermi al tatto. Gli atri sono di colore rosso più scuro e si trovano nella parte superiore dei ventricoli. Sono molto meno muscolosi e appaiono flaccidi.
   2. Il sacco pericardico è una sottile membrana traslucida che circonda il cuore.
3. Timo
   1. Il timo si trova anteriormente al cuore e si trova sopra la trachea. Dovrebbe essere liscio nella consistenza.
   2. Negli animali giovani, appare come abbronzatura con una consistenza grassa.
   3. Gli animali più anziani avranno infiltrazioni di tessuto adiposo nel timo, allargandolo e dando al timo un colore bianco.
4. Trachea
   1. La trachea si estende dall'epiglottide alla biforcazione dei bronchi. È un tubo cartilagineo increspato che è flessibile.
   2. Dovrebbe essere chiaro e non avere alcun liquido fluido o schiumoso nel lume. L'eutanasia con CO₂ può causare accumulo di liquidi (sierosanguino e/o schiumosi) nei polmoni e nella trachea a causa di emorragia.
5. Esofago
   1. L'esofago si estende dalla cavità orale allo stomaco. È un tubo molto sottile che si trova direttamente dietro la trachea e dietro il cuore e passa attraverso il diaframma allo stomaco.
   2. L'esofago è difficile da rimuovere, in quanto è facilmente strappato anche se il tessuto è elastico. La rimozione dell'esofago viene eseguita più facilmente sezionandolo lontano dalla trachea dopo la rimozione del cuore e dei polmoni.
6. Rimozione degli organi toracici
   1. Il cuore e i polmoni sono più facilmente rimossi insieme.
   2. Posizionare la pinna perpendicolare alla trachea e afferrare saldamente la trachea, appena sopra il timo.
   3. Usando le forbici, fare un taglio perpendicolare alla trachea appena anteriore alla pinza. Questo taglio dovrebbe tagliare la trachea e l'esofago.
   4. Senza allentare la presa sulla trachea, sollevare la trachea caudale e snip eventuali attacchi dei polmoni alla superficie spinale nella gabbia toracica.
   5. L'esofago potrebbe aver bisogno di essere tagliato per essere in grado di sollevare il cuore e i polmoni liberi dalla cavità toracica.
   6. Dopo che il cuore è stato rimosso dal corpo, può essere lavato con soluzione salina per rimuovere il sangue residuo e coaguli, oppure può essere riempito con fissativo attraverso l'aorta.
   7. Una volta che i polmoni sono asportati, vengono gonfiati con fissativo. Una legatura è posizionata liberamente intorno alla trachea. Un ago che è attaccato a una siringa contenente il fissativo di scelta viene infilato nel lume della trachea. La legatura viene stretta attorno all'ago e il fissativo viene iniettato fino a quando i polmoni non vengono gonfiati. Dopo la rimozione dell'ago, la legatura viene serrata per evitare perdite.
7. Cavità orale
   1. Lingua
      1. La lingua dei roditori è liscia.
      2. Esaminare la superficie per le lesioni, compresa la parte inferiore.
      3. La lingua viene raramente raccolta ad eccezione di indagini specializzate come studi sul cancro orale.
      4. Per rimuovere la lingua, tagliare le superfici buccali su ciascun lato della cavità orale fino all'articolazione temporale-mandibolare.
      5. Dislocare la mandibola e riflettere la mascella per rivelare l'epiglottide e la base della lingua.
      6. Usando una pinna per estendere la lingua, tagliare gli attacchi sottostanti caudale alla base della lingua.
      7. Mantenendo la trazione, tagliare orizzontalmente alla base della lingua per liberarla dalla cavità orale.
   2. Denti
      1. La dentazione del ratto consiste di tre molari e un incisivo in ogni quadrante che è separato da un diastema sdentato. Sono coperti da smalto solo sul lato labiale; sulla superficie interna del dente è dentina.
      2. I denti di ratto sono normalmente di colore giallo/arancione. Questo colore è più pronunciato sullo smalto incisivo ed è dovuto alla presenza di un pigmento contenente ferro. Il colore inizia a circa 21 giorni dopo la nascita e si approfondisce con l'età.
      3. Esaminare i denti per la crescita eccessiva o la malocclusione.

5. Testa

1. Occhi
   1. Gli occhi dovrebbero essere di dimensioni uguali e chiari dall'essudato. La congiuntiva dovrebbe essere liscia.
   2. Per rimuovere gli occhi, applicare una pressione sulla pelle che circonda l'occhio all'indietro e verso il basso per sporgere l'occhio dall'orbita. Utilizzando una pinna a punta curva, isolare il globo e tagliare gli accessori che lo tengono nella presa.
2. Orecchie
   1. Osservare le orecchie per l'identificazione. Alcuni investigatori richiedono che i marchi auricolari siano inclusi nei campioni di organi per la conferma dell'identità animale.
   2. I canali uditivi vengono esaminati per eventuali lesioni, masse o essudato.
3. Naso
   1. Il naso è osservato per fluido o essudato.
   2. Le narici dovrebbero essere simmetriche e chiare.