Question 1

Perché non è possibile coltivare direttamente le cellule B per produrre anticorpi monoclonali?

Accepted Answer

Le cellule B non sopravvivono bene in colture a lungo termine, rendendo impossibile mantenerle indefinitamente per la produzione di anticorpi. Per superare questa limitazione, gli scienziati fondono le cellule B con cellule di mieloma immortali per creare gli ibridotomi, che combinano le proprietà di produzione di anticorpi delle cellule B con la capacità di crescita indefinita delle cellule di mieloma.

Question 2

Qual è la differenza tra anticorpi policlonali e monoclonali?

Accepted Answer

Gli anticorpi policlonali sono una miscela di anticorpi, ciascuno riconosce diversi epitopi su un antigene, prodotti da molteplici cloni di cellule B. Gli anticorpi monoclonali sono anticorpi identici prodotti da una singola linea cellulare ibridomatica, che riconoscono solo un singolo epitopo specifico. Questo rende gli anticorpi monoclonali più specifici e utili per distinguere tra antigeni simili.

Question 3

Come limitare la diluizione assicura la produzione di anticorpi monoclonali?

Accepted Answer

La diluizione limite è un processo di diluizione seriale che garantisce statisticamente che singole cellule vengano seminate nei pozzetti delle piastre di screening. I pozzetti contenenti una cellula crescono in popolazioni monoclonali che producono anticorpi identici. Questo metodo di clonazione garantisce che la linea di ibridoma risultante rilasci solo l'anticorpo desiderato di specificità nota.

Question 4

Che ruolo svolge il solfato di ammonio nella purificazione degli anticorpi?

Accepted Answer

La precipitazione del solfato di ammonio rimuove gli anticorpi dal mezzo di coltura competendo con le proteine per le molecole d'acqua attraverso interazioni idrofile. Gli ioni di ammonio e solfato altamente caricati diminuiscono la solubilità degli anticorpi, causandone la precipitazione dalla soluzione. Questo metodo di salting-out è una tecnica standard per la purificazione delle proteine dai sovranatanti di coltura.

Question 5

Perché si utilizza il tubo da dialisi dopo la precipitazione del solfato di ammonio?

Accepted Answer

I tubi di dialisi rimuovono il solfato di ammonio residuo dalla soluzione di anticorpi attraverso lo scambio osmotico. La soluzione di anticorpi viene posta nei tubi di dialisi e immersa nel buffer PBS durante la notte. L'acqua e i piccoli ioni di sale passano attraverso la membrana del tubo mentre gli anticorpi rimangono all'interno, risultando in anticorpi purificati privi di solfato di ammonio.

Question 6

Come viene determinata la concentrazione degli anticorpi dopo la purificazione?

Accepted Answer

La concentrazione dell'anticorpo viene misurata utilizzando uno spettrofotometro a 280 nanometri, che rileva l'assorbanza delle proteine. Si prepara una diluizione 20 volte del campione di anticorpo in PBS, poi si analizza utilizzando lo spettrofotometro. La concentrazione viene calcolata utilizzando una formula standard e registrata per la documentazione e la conservazione dell'anticorpo monoclonale purificato.

Question 7

Quale metodo di schermaggio viene utilizzato per identificare gli ibridoomi che producono l'anticorpo desiderato?

Accepted Answer

elisa assays indirect sandwich e competitivo I metodi vengono utilizzati per selezionare i mezzi di coltura degli ibridioma per la presenza dell'anticorpo bersaglio. Dopo la fusione degli ibridioma e la clonazione mediante diluizione limitante, l'ELISA rileva quali pozzetti contengono cellule che producono l'anticorpo monoclonale desiderato. Questo passaggio di schermatura assicura che solo gli ibridioma con la corretta specificità dell'anticorpo siano selezionati per l'espansione e la produzione dell'anticorpo.

Generazione di anticorpi: produzione di anticorpi monoclonali attraverso l'utilizzo di ibridomi - Quiz di valutazione