Question 1

Che cos'è il trasferimento di cellule adoptive e perché viene utilizzato nella ricerca?

Accepted Answer

Il trasferimento di cellule adottive è un metodo per introdurre cellule in un organismo per studiare meccanismi biologici o trattare malattie. Permette ai ricercatori di esaminare funzioni specifiche delle cellule immunitarie, studiare l'ematopoiesi e testare terapie innovative come i trattamenti contro il cancro in cui le cellule T del paziente vengono estratte, modificate per riconoscere i tumori e reintrodotte per combattere il cancro. I modelli animali permettono un'indagine dettagliata del comportamento e dell'efficacia delle cellule trasferite.

Question 2

Perché i topi CD45.1 Rag gamma-c knockout sono utilizzati negli studi di trasferimento adotivo?

Accepted Answer

CD45.1 Rag gamma-c knockout mice lack fundamental cytokine receptors essential for normal lymphocyte development, resulting in compromised immune systems without natural killer cells, T-cells, or B-cells. These immunocompromised mice serve as ideal recipients for adoptive transfer because they allow researchers to study how donor immune cells establish and function in a lymphocyte-deficient host.

Question 3

Come vengono isolati e purificati gli splenociti dal tessuto del donatore?

Accepted Answer

La milza viene dissociata utilizzando un filtro per cellule e un pistone per rilasciare le cellule in sospensione. Gli eritrociti indesiderati vengono lisi utilizzando un buffer di lisi di cloruro di ammonio e potassio, e la centrifugazione separa i globuli bianchi dai detriti. Gli splenociti purificati risultanti vengono conteggiati utilizzando il blu di tripano e regolati alla concentrazione desiderata prima del trasferimento nei topi ricevitori.

Question 4

Qual è il ruolo della citometria a flusso nel confermare il successo del trasferimento adotivo?

Accepted Answer

La citometria a flusso usando la fluorescenza-ordinamento delle celle attivato (FACS) conferma il successo del trasferimento rilevando le cellule donatrici nella milza dell'ospite. Gli anticorpi marcati contro i marcatori donatori come CD45.2 distinguono le cellule trasferite dalle cellule dell'ospite. La tecnica permette ai ricercatori di identificare popolazioni specifiche di linfociti, come le cellule T CD4, e verificarne la presenza e la distribuzione nei topi riceventi.

Question 5

Come viene preparata la sospensione cellulare prima dell'iniezione endovenosa nei topi riceventi?

Accepted Answer

La sospensione cellulare viene centrifugata e risospesa in soluzione salina tamponata con fosfato attraverso due fasi di lavaggio sequenziali. Il pellet finale viene risospeso in 200 microlitri di soluzione salina tamponata con fosfato. Utilizzando una siringa da 0,5 millilitri con un ago da 29 gauge, 200 microlitri di questa sospensione cellulare purificata vengono iniettati per via endovenosa nel seno sanguigno retro-orbitale del topo ricevente.

Question 6

Che cosa rivela l'analisi FACS sui linfociti trasferiti rispetto a quelli dell'ospite?

Accepted Answer

L'analisi FACS distingue le cellule trasferite positive per CD45.2 dalle cellule ospiti positive per CD45.1 utilizzando grafici a dispersione. Le cellule trasferite appaiono solo nel campione del topo trasferito, non nei topi di controllo che ricevono solo soluzione salina tamponata con fosfato. Un'analisi ulteriore identifica specifici sottogruppi di linfociti trasferiti, come le cellule T CD4, dimostrando sia l'innesto riuscito che il fenotipo delle cellule donatrici all'interno dell'ospite.

Question 7

Quali fattori di compatibilità devono essere considerati prima di eseguire il trapianto di cellule adoptive?

Accepted Answer

La compatibilità tra host e donatore è cruciale per garantire l'adozione delle cellule senza rigetto. In questo protocollo, gli splenociti del donatore CD45.2 vengono trasferiti nei topi riceventi CD45.1 Rag gamma-c, permettendo la discriminazione tra cellule donatrici e dell'host. Questa distinzione genetica permette ai ricercatori di tracciare le cellule trasferite e valutarne l'integrazione, la sopravvivenza e la funzione all'interno dell'ambiente ospite immunocompromesso.

Trasferimento di cellule adottive: introduzione degli splenociti di topo donatore a un topo ospite e valutazione del successo tramite FACS - Quiz di valutazione