Culture di arricchimento: coltura di microbi aerobici e anaerobici su terreni selettivi e differenziali

1. Preparazione

1. Prima di iniziare, lavarsi accuratamente le mani e indossare guanti di dimensioni adeguate.
2. Sterilizzare la superficie di lavoro con ipoclorito di sodio al 5% (candeggina) e asciugare accuratamente.
3. Posizionare un anello di inoculazione in un pallone Erlenmeyer vuoto da 120 ml in modo che non tocchi il piano di lavoro.

2. Mezzi di crescita e culture

1. Raccogli quattro piatti di Mannitol Salt Agar (MSA), Eosin Methylene blue agar (EMB) e otto agar di soia triptica (TSA) dal frigorifero (questi possono essere acquistati commercialmente).
2. Posizionare le piastre sull'area di lavoro pulita.
3. Raccogliere le seguenti colture di brodo: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidise Proteus vulgaris. Usare cautela: poiché si tratta di organismi aerobici, i cappucci dei tubi dovrebbero essere leggermente allentati.
4. Posizionare tutte le colture in una griglia per provette sulla superficie di lavoro pulita.

3. Trasferimento di colture e incubazione

1. Stare in piedi o sedersi alla panca con tutti i materiali a portata di mano.
2. Per utilizzare la tecnica asettica per trasferire i batteri alla piastra, prima fiammare il cappio fino a quando non è arancione incandescente - e quindi lasciarlo raffreddare nell'aria.
3. Mentre il cappio si raffredda, prendi la coltura di brodo di E. colie poi apri il cappuccio usando il mignolo.
4. Fiammare rapidamente l'apertura del tubo. Ciò impedisce la contaminazione.
5. Immergere il loop nel tubo e strisciare l'organismo sul primo quadrante di una piastra EMB.
6. Dopo aver eseguito la prima striscia, fiamma il ciclo e quindi esegui una seconda striscia attraversando la prima striscia solo una o due volte. Ciò consentirà l'isolamento di una singola colonia e di determinare se vi è contaminazione.
7. Ripeti questa operazione fino a quando tutti e quattro i quadranti della piastra non sono stati striati.
8. Ora, trasferire ciascuno degli altri quattro organismi nello stesso modo di placcatura a strisce in modo che il prodotto finale sia una piastra MSA, una piastra EMB e due piastre TSA separate per organismo.
9. Una volta che tutti gli organismi sono stati trasferiti, fiamma il loop un'ultima volta e mettilo via.
10. Posizionare 1 piastra TSA con ciascun organismo nella confezione di gas, quindi agitare una bustina di gas prima di metterla nella camera accanto alle piastre. Sigillare saldamente.
11. Incubare tutte le piastre a 37°C durante la notte.
12. Sterilizzare il piano di lavoro un'ultima volta con il 5% di candeggina.

4. Lettura e registrazione dei risultati

1. Rimuovere le piastre dall'incubatore e posizionarle su un banco da laboratorio pulito
2. Prendi nota della crescita degli organismi su ogni piastra nel tuo quaderno di laboratorio. In particolare, prendi appunti dettagliati su:
   1. Numero e dimensione delle colonie (se presenti) su ciascuna piastra, per ogni ceppo placcato
   2. Aspetto dell'agar che circonda qualsiasi colonia che cresce sulle placche MSA
   3. Aspetto di eventuali colonie che crescono sulle piastre EMB
   4. Differenze nella crescita tra le piastre TSA coltivate all'esterno rispetto all'interno del pacchetto di gas