Name: Limpianto di ingegneria tessutale nel Cuore Rat (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-06-24T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: Scopri l'impianto di tessuto ingegnerizzato nel cuore di ratto per creare una via di conduzione elettrica alternativa. Questo protocollo chirurgico dimostra l'integrazione funzionale delle cellule donatrici nel miocardio ospite.

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Questo lavoro è sostenuto da borse di ricerca dal National Institutes of Health (HL068915; HL088206) e contributi al Fondo di conduzione cardiaca presso il Children Hospital di Boston.

Parte 1: induzione di anestesia generale <ol><li> Un g 200-250 ratto Lewis è anestetizzato con 50 mg / kg di ketamina e 4 mg / kg xylazina iniettato con un ago 30 G nella cavità intraperitoneale. La parte superiore dell'addome e del torace a destra vengono tagliate per eliminare i peli e il sito di incisione accuratamente puliti con etanolo al 70% e poi un povidone-iodio soluzione antisettica topica. </li><li> L'animale è intubato endotracheally utilizzando un catetere endovenoso 16 G collegato ad un respiratore piccolo animale (Harvard Apparatus). Il respiratore è collegato ad un vaporizzatore per la fornitura di 0,5-1,0% isoflurano (Baxter) mescolato con ossigeno al 100% per mantenere l'anestesia generale. Frequenza respiratoria e volume corrente viene regolata in base al peso corporeo del topo. L'animale è posto su una piastra elettrica (Hood Thermo-Pad) per mantenere la temperatura corporea durante la procedura chirurgica. </li><li> Per monitorare la frequenza cardiaca e saturazione di ossigeno durante l'intervento chirurgico di un dispositivo pulsoximeter (Nellcor) è ritagliato su uno degli arti posteriori. </li></ol> Parte 2: toracotomia e l'impianto di ingegneria tessutale <ol><li> Il sito chirurgico viene preparato con sterili drappeggi chirurgico che è tenuto in posizione con fascette asciugamano. </li><li> Un'incisione è fatta dal antero-laterale alla parete laterale del petto a destra, appena sopra il 5 ° spazio intercostale. L'interno della cassa si accede tramite il 5 ° spazio intercostale e un divaricatore piccolo (Roboz) è posizionata per massimizzare la vista. </li><li> Il pericardio viene tagliato appena sopra l'appendice dell'atrio destro e ventricolo destro dalla base verso l'apice del cuore. In seguito, il solco AV è identificato e lo strato epicardico adiacente al aorto-atrio-ventricolare triangolo è gentilmente preso in giro a parte. </li><li> Un Prolene 7-0 sutura (Ethicon) è inserito attraverso la spalla basale del ventricolo destro. A 2 x 2 x 2 pezzi mm è sezionato dalla costruzione di ingegneria tessutale e posizionato all'interno della scanalatura AV e dolcemente legato con la sutura Prolene. </li><li> Il campo chirurgico viene controllato per il sanguinamento e due punti di sutura Vicryl 4-0 (Ethicon) sono poste tra il superiore e inferiore spazio intercostale, per la chiusura della gabbia toracica. </li><li> Qualsiasi pneumotorace apparente è scavato, espandendo i polmoni per mezzo del ventilatore. </li><li> La parete toracica viene poi chiuso a strati. </li></ol> Parte 3: Recupero <ol><li> Mentre l'animale recupera dalla chirurgia, il sito di incisione sono infiltrati di 5 ml bupivacaina 0,25% [2]. </li><li> L'animale è estubato dopo lo svezzamento dal respiratore e viene restituito a una gabbia con lettiere fresche una volta che è completamente sveglio e sternale. Il ratto viene successivamente somministrato 0,01 mg / kg Buprenorfina analgesia per via sottocutanea ogni 12 ore per 3 giorni. </li></ol> Parte 4: I risultati rappresentativi Se eseguita correttamente, il descritto impianto chirurgico di ingegneria tessutale nella AV-scanalatura del cuore (figura 1) si traduce in più del 90% di recupero degli animali. <img src="/files/ftp_upload/1139/Figure1.jpg" alt="Figura 1"> Figura 1. Una fotografia del cuore esposto che mostra il sito dell'impianto di ingegneria tessutale.

<ol><li>Choi, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+conduction+through+engineered+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Cardiac conduction through engineered tissue.</a> Am J Pathol. 169, 72-85 (2006).</li>
<li>Shin, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-dose+systemic+bupivacaine+prevents+the+development+of+allodynia+after+thoracotomy+in+rats.+Anesth+Analg%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Low-dose systemic bupivacaine prevents the development of allodynia after thoracotomy in rats. Anesth Analg.</a> 107, 1587-1591 (2008).</li>
<li>Horstick, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+procedure+affects+physiological+parameters+in+rat+myocardial+ischemia%3A+need+for+mechanical+ventilation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Surgical procedure affects physiological parameters in rat myocardial ischemia: need for mechanical ventilation.</a> Am J Physiol. 276, H472-H479 (1999).</li>
</ol>

Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida e regolamenti stabiliti dalla cura degli animali e del Comitato Istituzionale utilizzo del Children s Hospital di Boston.

Per un esito favorevole alla procedura chirurgica, è fondamentale per intubare correttamente e invasivo ventilare l&#39;animale. Se il ratto è semplicemente sedato e ha permesso di respirare spontaneamente, entrambi i polmoni inevitabilmente crollare mentre il torace è aperto a causa della pleura comuni nei roditori. Prima di chiudere il petto, ogni pneumotorace deve essere completamente eliminato ei polmoni completamente espansa per ridurre atelettasia. Altrimenti, lo svezzamento dal respiratore e recupero sarà success...

<table><tbody><tr><td>7x4 Thermo Pad 4/box</td><td>Attrezzatura</td><td>Hood Thermo-Pad, Summerland, BC Canada</td><td>MODELLO 704R</td><td></td></tr><tr><td>Ventilatore Inspira ASV</td><td>Attrezzatura</td><td>Harvard Apparatus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ossimetro portatile da polso</td><td>Attrezzatura</td><td>Nellcor</td><td>N20PA</td><td></td></tr><tr><td>Retrattore</td><td>Attrezzatura</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-6514</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano (Forane)</td><td>Reagente</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td>1001936040</td><td></td></tr><tr><td>Cloridrato di chetamina</td><td>Reagente</td><td>Hospira Inc.</td><td>RL-0065</td><td></td></tr><tr><td>Xilazina (AnaSed)</td><td>Reagente</td><td>Lloyd, Inc.</td><td>LB15705A</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina HCL iniettabile</td><td>Reagente</td><td>Bedford Laboratories</td><td>Div-BUP-P00</td><td></td></tr><tr><td>Bupivacaina 0,25%</td><td>Reagente</td><td>Hospira Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

l&#39;impianto di ingegneria tessutale nel cuore rat

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

Chirurgia roditore è spesso una componente importante nel valutare l&#39;utilità dei tessuti ingegnerizzati. Una vasta gamma di procedure chirurgiche possono essere eseguite su ratti di laboratorio comuni o nei topi e questi molto spesso servono come un passaggio intermedio tra banco esperimenti e test sugli animali di grandi dimensioni o sperimentazione umana. Dato che i roditori fornire un sistema modello stabilito, conveniente, e fisiologicamente rilevanti in cui sperimentare nuove combinazioni di materiali ponteggi e cellule, sono particolarmente adatti per gli studi di ingegneria dei tessuti cardiovascolari. Attualmente, ci descrivono un cuore aperto procedura chirurgica per l&#39;impianto di ingegneria tessutale che contiene cellule progenitrici miogeniche nel atrio-ventricolare (AV) solco di un cuore di ratto. Questi impianti hanno lo scopo di creare un condotto elettrico tra l&#39;atrio destro e ventricolo destro con l&#39;obiettivo finale di fornire un trattamento alternativo a impianto di pacemaker convenzionale in pazienti pediatrici con blocco cardiaco completo [1]. L&#39;ingegneria tessutale è impiantato nel AV-scanalatura per mezzo di una toracotomia. Per i nostri scopi, i ratti Lewis sono anestetizzati e invasivo ventilato per mantenere la pressione positiva delle vie aeree durante la procedura chirurgica sterile. L&#39;approccio verso il cuore viene eseguito da una toracotomia destra attraverso uno antero-laterale incisione presso i 5<sup&gt; °</sup&gt; Spazio intercostale. Il costrutto tessuto è stato risolto nel solco AV utilizzando un unico 7-0 sutura Prolene e posizionato tra il ventricolo destro e atrio nella porzione ventrale del cuore. L&#39;epicardio è parzialmente rimosso per consentire il contatto diretto tra le cellule del miocardio destinatario e quelle contenute nei tessuti ingegnerizzati. Dopo l&#39;impianto, la parete toracica è chiuso a strati, ogni pneumotorace viene evacuato, e l&#39;animale è estubato e trattato con analgesici.

Qui, descriviamo una procedura chirurgica per l&#39;impianto cardiaco di ingegneria tessutale nella atrio-ventricolare (AV)-solco di un ratto adulto Lewis.

L&#39;impianto di ingegneria tessutale nel Cuore Rat

La chirurgia sui roditori rappresenta spesso una componente fondamentale per valutare l'utilità dei tessuti ingegnerizzati. Una vasta gamma di procedure chirurgiche può essere eseguita in...

Ciao, sono Zu del laboratorio di Douglas Cowan del Dipartimento di Anestesiologia del Children's Hospital e della Harvard Medical School. Oggi vi mostreremo una procedura per l'impianto di tessuto ingegnerizzato nel cuore rosso. Utilizziamo questa procedura nel nostro laboratorio per creare un percorso alternativo di conduzione elettrica atrio-ventricolare.Iniziamo. Questo video descrive un'impianto chirurgico di un costrutto tessutale ingegnerizzato contenente mioblasti. Questo protocollo sperimentale di principio dimostra che gli stampi tessutali possono essere fabbricati in vitro e trapiantati in vivo in soggetti destinatari che necessitano della riparazione di un organo non funzionante.Il video allegato descrive come le cellule siano state inoculate nello stampo progettato per adattarsi al solco AV del cuore di un ratto adulto. Il protocollo inizia anestetizzando un ratto Lewis di peso compreso tra 200 e 250 grammi mediante un cocktail di ketamina e xilazina, iniettato attraverso un ago da 30 gauge nella cavità intraperitoneale. Una volta che il ratto è completamente anestetizzato e non risponde a una leggera pressione sul piede, procedere con la preparazione per l'intervento c

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Metodi per la preparazione di un gel iniettabile matrice dal tessuto decellularized e iniettarlo nel ratto...

Fabbricazione di derivazione biologica Materiali iniettabili per l&#39;ingegneria tissutale miocardica

Imaging bioluminescenza per la valutazione delle risposte immunitarie A seguito di impianto di tessuto cardiaco Composti (EHT)

L'impianto di una biograft per trattare infarto del miocardio indotta da legatura LAD in un modello di roditore è convenzionalmente richiesto due operazioni a cuore aperto. Al fine di ridurre la mortalità e fornire le condizioni ottimali per la fissazione di biomatrici solidi e gelatinosi associati con le cellule, sono state sviluppate procedure minimamente invasive.

Terapia cellulare per insufficienza cardiaca nel ratto: Doppia Toracotomia per infarto miocardico e epicardico impianto di cellule e Biomatrix

Questa è una linea guida per la costruzione di tessuto vascolarizzato in vivo utilizzando un circuito arterovenoso microchirurgico o una configurazione peduncolare a flusso continuo all'interno di una camera di ingegneria tissutale. I tessuti vascolarizzati generati possono essere impiegati per la rigenerazione degli organi e la sostituzione di difetti tissutali, nonché per test farmacologici e modellazione della malattia.

Ingegneria dei tessuti da parte intrinseca Vascolarizzazione in un<em&gt; In Vivo</em&gt; Camera ingegneria dei tessuti

Qui presentiamo un protocollo per l'induzione di cryoinjury ventricolare sinistra seguita dall'impianto di una patch di muscolo cardiaco, derivata da cardiomiociti iPS-cellula umana in un modello della cavia.

Impianto di hiPSC-derivato del muscolo cardiaco patch dopo lesione del miocardio in un modello della cavia

Descriviamo un modello di trapianto di cuore addominale eterotopico nei ratti, implicando modifiche delle strategie attuali, che portano a un approccio chirurgico semplificato. Inoltre, descriviamo un nuovo modello di rigetto mediante iniezione in-ear di cellule muscolari cardiache vitali, consentendo ulteriori analisi immunologiche dei trapianti nei ratti.

Un modello immunologico per il trapianto di cellule cardiache e cardiache cardiache cardiache cardiache cardiache cardiache

Questo protocollo descrive l'impianto di stent coronari umani nell'aorta addominale dei ratti con uno sfondo apoE-/- utilizzando un accesso trans-femorale. Rispetto ad altri modelli animali, i modelli murini portano i vantaggi di alta produttività, riproducibilità, facilità di movimentazione e alloggiamento e un'ampia disponibilità di marcatori molecolari.

Impianto di stent coronari di dimensioni umane nell'aorta addominale del ratto utilizzando un accesso trans-femorale

Questo protocollo descrive un metodo semplice ed efficiente per il trapianto di foglietti valvolari aortici sotto la capsula renale per consentire lo studio dell'alloreattività delle valvole cardiache.

Un modello semplificato per il trapianto di valvole cardiache eterotopiche nei roditori

Il presente protocollo descrive i metodi per l'espressione transgenica nei cuori di ratto e topo mediante iniezione intramiocardica diretta del virus sotto guida ecocardiografica. Qui vengono spiegati anche i metodi per la valutazione della suscettibilità dei cuori alle aritmie ventricolari mediante la stimolazione elettrica programmata di cuori isolati perfusi da Langendorff.

Espressione del transgene virale nei cuori dei roditori e valutazione del rischio di aritmia cardiaca

Questo lavoro presenta un modello animale di fibrosi indotta da transizione endoteliale a mesenchimale, come si vede nei difetti cardiaci congeniti come la stenosi aortica critica o la sindrome del cuore sinistro ipoplasico, che consente una valutazione istologica dettagliata del tessuto, l'identificazione delle vie di segnalazione regolatorie e la verifica delle opzioni di trattamento.

Un modello di trapianto di cuore di ratto eterotopico neonatale per lo studio della transizione da endoteliale a mesenchimale

Qui, viene presentato un protocollo per l'impianto di un innesto vascolare di ingegneria tissutale nell'arteria carotide di topo utilizzando la tecnica della cuffia, fornendo un modello animale adatto per studiare i meccanismi di rigenerazione del tessuto vascolare.

Impianto di innesto vascolare di ingegneria tissutale nell'arteria carotide di topo tramite tecnica della cuffia

Scopri l'impianto di tessuto ingegnerizzato nel cuore di ratto per creare una via di conduzione elettrica alternativa. Questo protocollo chirurgico dimostra l'integrazione funzionale delle cellule donatrici nel miocardio ospite.

L'impianto di ingegneria tessutale nel Cuore Rat

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