Name: Propagazione di staminali embrionali umane (ES) Cellule (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 52 s
Description: Impara le tecniche di coltura per mantenere e espandere cellule staminali embrionali umane utilizzando le linee cellulari H1 e H9. Questo metodo collageneo preserva la pluripotenza e supporta la ricerca rigenerativa.

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<ol><li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+midbrain+dopaminergic+neurons+from+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Induction of midbrain dopaminergic neurons from ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Neuron. 28, 31-40 (2000).</li>
<li>Perrier, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+midbrain+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Derivation of midbrain dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 12543-12548 (2004).</li>
<li>Pruszak, J., Isacson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human embryonic stem cells into dopaminergic neurons.</a> , John Wiley and Sons. (2007).</li>
<li>Pruszak, J., Sonntag, K. C., Aung, M. H., Sanchez-Pernaute, R., Isacson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+and+methods+for+cell+sorting+of+human+embryonic+stem+cell-derived+neural+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Markers and methods for cell sorting of human embryonic stem cell-derived neural cell populations.</a> Stem Cells. 25, 2257-2268 (2007).</li>
<li>Sonntag, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+yield+of+neuroepithelial+precursors+and+midbrain-like+dopaminergic+neurons+from+human+embryonic+stem+cells+using+the+bone+morphogenic+protein+antagonist+noggin%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Enhanced yield of neuroepithelial precursors and midbrain-like dopaminergic neurons from human embryonic stem cells using the bone morphogenic protein antagonist noggin.</a> Stem Cells. 25, 411-418 (2007).</li>
<li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+dopaminergic+neurons+and+pigmented+epithelia+from+primate+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Generation of dopaminergic neurons and pigmented epithelia from primate ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 1580-1585 (2002).</li>
<li>Ko, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cell-derived+neural+precursors+as+a+continuous%2C+stable%2C+and+on-demand+source+for+human+dopamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cell-derived neural precursors as a continuous, stable, and on-demand source for human dopamine neurons.</a> J Neurochem. 103, 1417-1429 (2007).</li>
<li>Hong, S., Kang, U. J., Isacson, O., Kim, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+precursors+derived+from+human+embryonic+stem+cells+maintain+long-term+proliferation+without+losing+the+potential+to+differentiate+into+all+three+neural+lineages%2C+including+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Neural precursors derived from human embryonic stem cells maintain long-term proliferation without losing the potential to differentiate into all three neural lineages, including dopaminergic neurons.</a> J Neurochem. , (2007).</li>
<li>Zhang, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+subtype+specification+from+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Neural subtype specification from embryonic stem cells.</a> Brain Pathol. 16, 132-142 (2006).</li>
<li>Pankratz, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+neural+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+via+an+obligated+primitive+anterior+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Directed neural differentiation of human embryonic stem cells via an obligated primitive anterior stage.</a> Stem Cells. 25, 1511-1520 (2007).</li>
<li>Lazzari, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+derivation+of+neural+rosettes+from+cloned+bovine+blastocysts%3A+a+model+of+early+neurulation+events+and+neural+crest+specification+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Direct derivation of neural rosettes from cloned bovine blastocysts: a model of early neurulation events and neural crest specification in vitro.</a> Stem Cells. 24, 2514-2521 (2006).</li>
<li>Pomp, O., Brokhman, I., Ben-Dor, I., Reubinoff, B., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+peripheral+sensory+and+sympathetic+neurons+and+neural+crest+cells+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Generation of peripheral sensory and sympathetic neurons and neural crest cells from human embryonic stem cells.</a> Stem Cells. 23, 923-930 (2005).</li>
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propagazione di staminali embrionali umane (es) cellule

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagazione di staminali embrionali umane (ES) Cellule

Sì, sono Lauren Deon. Sono responsabile della struttura congiunta di cellule staminali umane Amgen presso il MGH. Sì, sono Lauren, sono responsabile della struttura congiunta di cellule staminali umane AM presso il MGH.Sto lavorando con cellule staminali umane da anni, ormai, fin da quando ero un postdoc nel laboratorio di George De Lab, circa quattro, quattro anni fa. Attualmente disponiamo di due linee cellulari, H1 e H9, entrambe derivate da Y cell. Il metodo con cui espandiamo o manteniamo queste cellule in coltura, almeno il modo in cui le suddividiamo, prevede l'utilizzo di collagenasi.Quello che di solito faccio è che, per i primi passaggi dopo il seeding delle cellule, utilizzo una tecnica chiamata picking delle colonie. In questo caso, posso osservare al microscopio quali colonie presentano un buon grado di differenziazione e una forma regolare, raccogliere solo queste colonie, tagliarle in alcuni frammenti e riposizionarle in una nuova piastra fresca. Le colonie che presentano un aspetto meno differenziato vengono semplicemente lasciate intatte.L'altro modo per passare le cellule è l'uso della tripsina. Tuttavia, non utilizzo questa tecnica qui. Ritengo che la collagenasi sia leggermente più sicura, poiché le cellule staminali umane non amano essere individualizzate o trovarsi isolate.Quindi, se si utilizza la tripsina per un tempo leggermente troppo lungo, ad esempio tre o quattro minuti, come facciamo normalmente con altri tipi di cellule, le cellule staminali umane si individualizzeranno e la maggior parte di esse morirà, si differenzierà o non aderirà alla matrice. L'idea è quindi quella di mantenere le cellule sotto forma di agglomerati. Non si desidera che siano isolate all'interno del flacone.Pertanto, utilizzando la collagenasi, il vantaggio consiste nel mantenere le cellule vitali. Utilizzando invece la tripsina, si selezionano solo le cellule in grado di sopravvivere a questo processo estremamente aggressivo di opsonizzazione. Di conseguenza, queste cellule sono solitamente altamente proliferative.Quindi è possibile adattare le cellule a questo processo di tripsinizzazione. Il problema è che alcune cellule si comportano in modo diverso e si dividono molto più rapidamente. Un rischio è che possano insorgere alcune anomalie commerciali a causa di questo processo di divisione estremamente elevato.Quindi, afferma che l'isolamento può causare la selezione, in coltura, delle cellule più proliferative. Esatto. Più attive e probabilmente con tassi di sopravvivenza più elevati rispetto ad altre cellule. Pertanto, dopo la proliferazione, fondamentalmente la coltura, dopo la proliferazione in tripsina e dopo diversi passaggi, diventa una coltura diversa, con proprietà differenti.Quindi è difficile capire se siano esattamente identiche. Se si esegue il test, il test abituale, diciamo che si verificano i marcatori, i marcatori abituali delle cellule completamente differenziate come OC4, Nanog, Oct4, SSEA4, CD3, tutte queste molecole potrebbero comunque essere espresse. Se si verifica la formazione della resistenza transepiteliale (TER), queste cellule potrebbero comunque differenziarsi e formarsi come cellule normali.Se si osserva il cariotipo, potrebbe esserci qualche anomalia, ma si potrebbe comunque avere un cariotipo normale. Il vantaggio selettivo potrebbe derivare da una semplice mutazione che non è possibile rilevare mediante analisi del cariotipo. Pertanto, il fatto che crescano molto più rapidamente è di per sé, a mio avviso, un po' più preoccupante.E se volessimo utilizzare queste cellule per un trapianto in un determinato momento, non utilizzerei assolutamente questo tipo di cellule. Ok. Potrebbe dirmi quindi quali sono i principali problemi tecnici nell'uso di questa tecnica per il passaggio delle cellule? Quindi nell'uso di S, sì.È solo un po' più lungo e, poiché le cellule non si dividono altrettanto rapidamente, occorre molto più tempo per ottenere un elevato numero di cellule necessario per effettuare un esperimento. È quindi semplicemente meno conveniente, direi. Vorrebbe parlarmi brevemente degli obiettivi del suo esperimento?Come si utilizzano le cellule CS? Bene, il mio progetto principale qui è ottenere cellule endoteliali da cellule staminali umane AB. E l'idea è quella di essere in grado di produrre sangue.E stiamo collaborando molto con laboratori di ingegneria tissutale, uno dei cui obiettivi è la creazione di tessuti in vitro. Tuttavia, uno dei limiti di questo approccio è la mancanza di vasi sanguigni che attraversino questi tessuti. Pertanto, se riuscissimo a introdurre cellule endoteliali in questi tessuti, otterremmo una crescita tessutale migliore.Pertanto, l'idea è che poche fonti di cellule sono conosciute per le cellule endoteliali, come il sangue freddo o il sangue sotto pressione, ma sarebbe interessante disporre di un'altra fonte di cellule, come le cellule umane derivanti dagli anni. Il vantaggio consiste nel fatto che le cellule umane possono essere amplificate in modo pressoché infinito; inoltre, è possibile modificarle, creare un sistema inducibile e poterlo utilizzare. Successivamente, nel prodotto finale, le cellule del materiale, in questo caso.

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Biologia

La capacità di cellule staminali embrionali umane per auto-rinnovarsi e differenziarsi in tutti i tipi di cellule del corpo suggerisce che essi sono molto promettenti per le applicazioni mediche e come strumento di ricerca per affrontare questioni fondamentali per lo sviluppo e la malattia. Qui, mettiamo a disposizione una concisa, passo-passo il protocollo per la derivazione di cellule staminali embrionali umane da embrioni da immunosurgical isolamento della massa cellulare interna.

Derivazione di cellule staminali embrionali umane da Immunosurgery

La differenziazione del Comitato coincide con cellule di tipo specifici cambiamenti nella struttura e nella composizione della cromatina. La rilevazione di questi cambiamenti fornisce preziose informazioni sui meccanismi che definiscono stemcellness e differenziazione cellulare. Immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) rappresenta un metodo valido per analizzare i meccanismi molecolari alla base della differenziazione delle cellule staminali.

Immunoprecipitazione della cromatina di cellule staminali embrionali umane

Questo video dimostra come mantenere la crescita delle cellule staminali embrionali umane (hESC) in cellule di alimentazione priva di condizioni e modalità di continuo passaggio in hESC alimentatore cellulare senza condizioni. Conferma di hESC pluripotenza delle cellule coltivate in alimentatore senza condizioni al microscopio immunofluorescenza è anche dimostrata. Parte 3 di 3.

Dal MEF per Matrigel 3: hESC Passaging da Matrigel su Matrigel

Regia di hESC differenziazione in cellule specifiche, ha generato molto interesse nella medicina rigenerativa. Forniamo un conciso, passo-passo il protocollo per la determinazione...

Mappatura destino di cellule staminali embrionali umane per la formazione teratoma

Nonostante i recenti progressi nella modificazione genetica, trasfezione di cellule staminali embrionali umane (hESC) rimane un processo capriccioso. A nostra conoscenza, metodi sistematici ed efficiente per trasfettare umani cellule staminali pluripotenti indotte (iPSCs) non sono stati segnalati. Qui, descriviamo i protocolli affidabili per trasfettare in modo efficiente e nucleofect iPSCs umani.

Trasfettando e Nucleofecting umani cellule staminali pluripotenti indotte

Abbiamo stabilito un protocollo per l'induzione di neuroblasti pluripotenti direttamente da cellule staminali embrionali umane conservati in condizioni definite con piccole molecole, che permette la derivazione di una grande quantità di progenitori neuronali umane e tipi di cellule neuronali nel sistema nervoso centrale per lo sviluppo neurale riparazione.

Derivazione efficiente di progenitori neuronali umane e Neuroni pluripotenti da cellule staminali embrionali umane con induzione piccole molecole

Singolo gene delle cellule saggio di espressione è necessaria per comprendere eterogeneità di cellule staminali.

Profiling cellule staminali embrionali umane individuale mediante RT-PCR

Linee cellulari Reporter offrono un mezzo per visualizzare, monitorare e isolare le cellule di interesse da popolazioni eterogenee. Tuttavia,-gene targeting utilizzando convenzionale ricombinazione omologa in cellule staminali embrionali umane è estremamente inefficiente. Qui, descriviamo il targeting CNS mesencefalo specifico PITX3 locus fattore di trascrizione con EGFP utilizzando zinc-finger nucleasi avanzata ricombinazione omologa.

Zinc-finger nucleasi avanzata gene targeting in cellule staminali embrionali umane

Presentato qui è un protocollo per la generazione di una coltura unicellulare di cellule staminali embrionali umane e la loro successiva differenziazione in cellule progenitrici neurali. Il protocollo è semplice, robusto, scalabile e adatto per lo screening farmacologico e le applicazioni di medicina rigenerativa.

Differenziazione neurale efficiente utilizzando la coltura a cella singola di cellule staminali embrionali umane

Qui mostriamo come il nostro laboratorio si blocca RIFLESSI embrionali umane linee di cellule staminali.

Congelamento cellule staminali embrionali umane

Impara le tecniche di coltura per mantenere e espandere cellule staminali embrionali umane utilizzando le linee cellulari H1 e H9. Questo metodo collageneo preserva la pluripotenza e supporta la ricerca rigenerativa.

Propagazione di staminali embrionali umane (ES) Cellule

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