Name: A lungo termine Imaging cellule di mammifero utilizzando Wide-Field Microscopia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min
Description: Scopri l'imaging a lungo termine di cellule di mammifero utilizzando microscopia a campo ampio a 37°C. Questo metodo consente di studiare la progressione mitotica in vivo con controllo termico preciso.

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a lungo termine imaging cellule di mammifero utilizzando wide-field microscopia

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

A lungo termine Imaging cellule di mammifero utilizzando Wide-Field Microscopia

In realtà, quello che farò è montarlo qui per primo e poi sostituire te. Quindi ora aspirerò cercando di essere il più delicato possibile. Okay. Alcuni secondi tenendo fermo. Okay. Va bene.Le caratteristiche importanti della nostra griglia per l'imaging in tempo reale sono le seguenti: si tratta di un microscopio invertito, il che significa che l'obiettivo e i campioni qui presenti si trovano al di sotto dell'obiettivo. Pertanto, l'obiettivo è rivolto verso l'alto e l'intero microscopio, o quasi l'intero microscopio, compresi gli obiettivi e il campione, si trova a 37 gradi. Così, tutto all'interno di questa scatola di plastica è mantenuto a 37 gradi.E proprio sopra il palchetto abbiamo una miscela di aria e CO2. Si tratta di CO2 al 5%. L'idea è che il campione si trovi effettivamente in una cella, simile a un incubatore per cellule.E quindi abbiamo, questo è il nostro miscelatore per l'aria e la CO2 e, e viene umidificato e riscaldato, per poi essere convogliato sul campione presente sul palchetto. Ok. E oggi eseguiremo semplicemente la fluorescenza in un canale, la fluorescenza GFP. Questo è il tubo attraverso cui entra la CO2, al 5% di CO2, e si inserisce semplicemente nel suppo

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Imaging del tessuto embrionale in real-time è una sfida per lunghi periodi di tempo. Qui vi presentiamo un test per monitorare i cambiamenti cellulari e sub-cellulare del midollo spinale pulcino per lunghi periodi con elevata risoluzione spaziale e temporale. Questa tecnica può essere adattato ad altre regioni del sistema nervoso e sviluppo embrionale.

Imaging ad alta risoluzione dal vivo del comportamento delle cellule in via di sviluppo neuroepitelio

Time-lapse imaging viene utilizzato per valutare il comportamento di primarie preneoplastiche cellule epiteliali mammarie derivate da modelli murini geneticamente modificati di rischio di cancro al seno per determinare se ci sono correlazioni tra i parametri specifici di comportamento e distinte lesioni genetiche.

Time-lapse imaging di primaria preneoplastiche cellule epiteliali mammarie Derivato da modelli murini geneticamente modificati di cancro al seno

La matrice extracellulare subisce sostanziale rimodellamento durante la guarigione delle ferite, l'infiammazione e tumorigenesi. Vi presentiamo un approccio immunofluorescenza intravitale romanzo per visualizzare le dinamiche di fibrillare come pure componenti della matrice maglia-come con alta risoluzione spaziale e temporale con epifluorescenza o microscopia a due fotoni.

A lungo termine intravitale immunofluorescenza Imaging di tessuto componenti della matrice con Epifluorescenza e due fotoni Microscopia

Immagini dal vivo della coclea embrionale dei mammiferi è impegnativo, perché i processi di sviluppo a portata di mano operano su un gradiente temporale nell'arco di dieci giorni. Qui vi presentiamo un metodo per la coltura e quindi l'imaging embrionale dei tessuti espianto cocleare preso da un topo reporter fluorescente in cinque giorni.

A lungo termine Time Lapse Imaging del mouse cocleari Espianti

Questo protocollo descrive l'uso della microscopia multifotone per eseguire l'imaging a lungo termine ad alta risoluzione di una singola cellula del polmone intatto in tempo reale utilizzando una finestra di imaging stabilizzata sotto vuoto.

A lungo termine ad alta risoluzione intravitale Microscopia nel polmone con un vuoto stabilizzato finestra Imaging

Il metodo qui presentato utilizza il micromodellamento insieme all'imaging quantitativo per rivelare l'organizzazione spaziale all'interno delle culture dei mammiferi. La tecnica è facile da stabilire in un laboratorio di biologia cellulare standard e offre un sistema trattabile per studiare patterning in vitro.

Mappatura dell'Emergente Organizzazione Spaziale delle Cellule Mammarie utilizzando Micropatterns e Quantitative Imaging

Qui viene presentato un protocollo per l'impianto di una finestra cranica cronica per l'imaging longitudinale delle cellule cerebrali in topi svegli e trattenuti dalla testa.

Impianto di una finestra cranica per l'imaging ripetuto in vivo in topi svegli

Viene qui presentato un approccio per l'imaging intravitale a lungo termine utilizzando finestre in silicone otticamente chiare che possono essere incollate direttamente al tessuto / organo di interesse e alla pelle. Queste finestre sono più economiche e versatili di altre attualmente utilizzate sul campo e l'inserimento chirurgico provoca un'infiammazione e un disagio limitati agli animali.

Imaging intravitale longitudinale tramite finestre in silicone trasparente

Questo protocollo descrive una nuova finestra di imaging mammario con un coperchio sostituibile (R.MIW). La microscopia intravitale dopo l'impianto del R.MIW consente l'imaging longitudinale e di più giorni della ghiandola mammaria sana e malata con una risoluzione cellulare durante le diverse fasi dello sviluppo.

Microscopia intravitale longitudinale utilizzando una finestra di imaging mammario con coperchio sostituibile

Il presente protocollo descrive la realizzazione di una grande finestra cranica (6 x 3 mm2) utilizzando un involucro alimentare, silicone trasparente e vetro di copertura. Questa finestra cranica consente esperimenti di imaging di calcio a campo largo e a due fotoni in vivo nello stesso topo.

In vivo Imaging del calcio a campo largo e a due fotoni da un topo utilizzando una grande finestra cranica

I presenti protocolli descrivono nuove immagini a montaggio intero per la visualizzazione di strutture periferiche nel cristallino oculare con metodi per la quantificazione dell'immagine. Questi protocolli possono essere utilizzati negli studi per comprendere meglio la relazione tra le strutture su microscala delle lenti e lo sviluppo/funzione delle lenti.

Imaging a montaggio completo per visualizzare e quantificare la struttura periferica del cristallino, la morfologia e l'organizzazione cellulare

Scopri l'imaging a lungo termine di cellule di mammifero utilizzando microscopia a campo ampio a 37°C. Questo metodo consente di studiare la progressione mitotica in vivo con controllo termico preciso.

A lungo termine Imaging cellule di mammifero utilizzando Wide-Field Microscopia

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