Name: Cancro Borealis Stomatogastric dissezione del Sistema Nervoso (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-03-23T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 37 s
Description: Impara la dissezione del sistema nervoso stomatogastrico di Cancer borealis per registrazioni elettrofisiologiche. Questo metodo consente di studiare circuiti neurali e generatori di pattern motori.

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Noi riconosciamo con gratitudine i membri del Laboratorio Marder. Ringraziamo il nostro consulente, il dottor Eve Marder, per il suo sostegno e incoraggiamento. Questa ricerca è stata finanziata dal National Institute of Neurological Disorder and Stroke Grants NS-NS-17.813 e 058.110.

1. Dissezione lordo <ol><li> Posizionare un granchio in ghiaccio per 30 minuti opachi i sistemi sensoriali e motorie dell&#39;animale. Lo circondano su tutti i lati con ghiaccio. I guanti dovrebbero essere indossati quando si maneggia il granchio. </li><li> Preparati per la dissezione lordo ponendo la pentola dissezione e gli strumenti si intende utilizzare. Rongeurs, osso taglio forbici, forbicine, pinzette dentate, una spatola con un bordo affusolato, un nero Sylgard rivestita piatto, e perni insetti sono necessari. </li><li> Rimuovere il granchio dal secchiello del ghiaccio per la sua zampa posteriore per evitare che pizzicotti e metterla nella padella dissezione. </li><li> Rimuovere gli artigli prima ruotando verso l&#39;interno di ogni uno. Quindi rimuovere ogni gamba con lo stesso movimento torsione. </li><li> Utilizzando il Rongeurs, rimuovere la mascella che copre la bocca. Rimuovere anche il maxillule morbido. </li><li> Utilizzando il Rongeurs ancora una volta, partire dalla fine laterale posteriore del carapace e ottenere un buon grip sul bordo di esso. Reprimere con la Rongeurs e rompere quel pezzo di carapace off. Assicurarsi di aver tolto abbastanza del carapace per consentire la spatola di entrare l&#39;apertura. Continuare a rimuovere il bordo del carapace fino agli occhi e ripetete dall&#39;altro lato. </li><li> Con la parte conica della spatola, raschiare delicatamente i tessuti molli interiore, lontani dal tetto del carapace dorsale. Tenere la spatola a contatto con il carapace per evitare di danneggiare il STNS. Utilizzare il Rongeurs di rompere le parti del carapace che sono stati separati dal tessuto. Anche separati alcuni dei tessuti molli dal carapace ventrale facendo attenzione a separare ogni muscoli adduttori attaccare il tessuto al carapace. </li><li> Rompere la corazza dorsale fino posteriore come il cuore dove ci sono due piccoli ossicini che sporgono dal carapace. Tagliare il più anteriore possibile. Stabilizzare la Cephalon (il &quot;volto&quot;) con un dito mentre rottura con la parte più anteriore del carapace dorsale. </li><li> Sul lato ventrale del carapace, tirare fuori le mandibole uno alla volta grazie all&#39;ancoraggio del Rongeurs su una mandibola, torsione verso l&#39;esterno per rimuovere la mandibola dal epistome allegato, e tirandolo via. Due ossicini lungo con i muscoli devono essere allegati alla mandibola estratto se fatto correttamente. </li><li> Separare via il tessuto dai lati della Cephalon vicino agli occhi con la spatola. Con le forbici dissezione piccolo, attraversano il tessuto più vicino al crinale di ossicino come strato dopo strato possibile. </li><li> Resto il granchio contro un muro della padella dissezione e prop in su fissandolo in posizione (gli artigli possono essere utilizzate per questo). Taglio del labbro (&quot;labbro superiore&quot;) dal epistome avendo cura di non lasciare qualsiasi tessuto allegato. Utilizzando ossa di taglio forbici fare due tagli diagonali nel carapace ventrale per rimuovere la Cephalon. </li><li> Prendere il labbro con una pinza dentata e tagliare il labium (&quot;labbro inferiore&quot;) dal ossicino sul lato ventrale. Poi sollevare delicatamente il labbro dal carapace ventrale rimanenti. Utilizzare le forbici piccolo per separare la parte ventrale dello stomaco dal tessuto di rivestimento del carapace. Quando le ampolle sono visibili piloro, tagliare lo stomaco lontano dal tessuto su entrambi i lati fino a quando lo stomaco è estratto dal granchio. </li><li> Ancora in mano allo stomaco con il labbro con una pinza, il resto lo stomaco contro il palmo della mano e versare salina in bocca. Questo si espande lo stomaco e rende più facile da tagliare aperto. Tagliato dall&#39;apertura alla foce giù tra il diritto piloro attraverso la ossicino tra le ampolle. Poi tagliare in diagonale verso il basso attraverso i due rami cardiale. Tagliare le punte delle tre denti all&#39;interno dello stomaco. </li><li> Posizionare lo stomaco su un grande, nero, Sylgard rivestite piatto con l&#39;interno dello stomaco in giù. Definire con precisione i cinque angoli della preparazione con perni di insetti e riempire il piatto con soluzione fisiologica fredda, immergendo l&#39;intera preparazione (vedi figura 1). </li></ol> 2. Dissezione multa <ol><li> , Micro-dissezione strumenti sono necessari per la dissezione fine. In particolare, pinze e forbici a molla sono necessarie così come un supporto pin con un ago di tungsteno. Un chiaro, Sylgard rivestita, capsula di Petri e di alcuni perni di filo sottile avrebbe dovuto essere preparato. </li><li> A partire l&#39;ingrandimento più basso, iniziare pinning giù i lembi vicino al labbro che ha usato essere l&#39;apertura della bocca. Riorganizzare il resto dei perni per rendere la preparazione teso e pin altre aree necessarie. </li><li> Sollevare con cautela il ipoderma notato che copre la parte inferiore della preparazione e tagliare di traverso lasciando una chiazza di ipoderma con due puntini bianchi. </li><li> Sbucciate il giallo, esile, il tessuto membranoso vicino al fondo della preparazione. Il mvns sono debolmente attaccati alla parte inferiore di questo tessuto. Separare con attenzione il mvns dal tessuto giallo, come si è tirato su. Segui il tessuto giallo e tagliate a fianco del cervello. </li><li> Seguire i processi di spessore uscire il cervello che si estendono laterally. Questi sono i nervi commisural. Una volta alla fine del nervo commissurali viene raggiunto, rimuovere la massa spugnosa, di colore biancastro tessuto che è stato tagliato via dal lato del cervello. </li><li> Dove gli ioni e figli incontrare gli ingranaggi, tagliare via il muscolo e del tessuto di rivelare la lunghezza degli ioni e dei figli. </li><li> Ritorna alla patch ipoderma macchiato e tagliarlo fuori. Questo dovrebbe lasciare un&#39;apertura nel arteria che circonda la STG. Tagliare attraverso l&#39;apertura di separare i due muscoli che fiancheggiano la STG. Sollevare l&#39;estremità di questi muscoli e tagliare proprio sotto di loro per separarli dalla arteria e per esporre il alns e AGN. Separare i muscoli ai lati fino a che la cartilagine che avvolge il stn. </li><li> Tagliare il tessuto arterioso che circonda la STG fino a dove il mvns, DGN, e DVN si incontrano. Lavoro lungo la DVN al lvns e tagliare il biancastro, delicato tessuto che copre il lvns. </li><li> Individuare il PSN negli ossicino vicino al fondo della preparazione. Il PSN può essere utilizzato per individuare il LVN e giunzione dlvn. </li><li> Avanti seguire le dlvn giù per individuare il pyn e PDN. Il pyn avvolge spesso sopra l&#39;ampolla pilorica per l&#39;apertura. La PDN forking del dlvn ed è tra i pilorica ampolla ed i muscoli della valvola pilorica cardio. Lascia qualche muscolo collegato a uno di questi nervi, perché possono essere facilmente confusi quando la preparazione viene trasferito il piatto chiaro Sylgard. </li><li> Una volta che tutti i nervi sono stati scoperti, recidere le connessioni sussistenti tra le STNS ei nervi dei tessuti e indesiderati dello stomaco. Muovere con cautela il STNS lontano dal resto dello stomaco, tagliando tutte le connessioni perse. </li><li> Condizione il piatto Sylgard chiaro con la massa restante del tessuto dello stomaco per lo sfregamento sulla superficie della Sylgard fino alla Sylgard non si sente più troppo appiccicoso o secco. Sylgard idrorepellente ed il STNS aderisce fortemente ad esso se la Sylgard rivestite piatto non è condizionato in questo modo. </li><li> Aggiungete un po &#39;salina fredda per il piatto. Afferrare le estremità superiori dei nervi commissurali con una pinza e portare il STNS al piatto chiaro Sylgard. </li><li> Perno del STNS verso il basso sulla Sylgard. Sever il cervello dai nervi commissurali e utilizzare i pin minuten per fissare le quattro estremità della Cogs primo down. Garantire che la preparazione sia dal lato giusto controllando che il IVN è rivolta verso l&#39;alto dalla Sylgard. Il dgn dovrebbe uscire un po &#39;sotto la STG quando la STG è da destra verso l&#39;alto. Pin il resto del nervo termina verso il basso con i perni di filo sottile. </li><li> Pulire via qualsiasi residuo muscolare o tessuto dal STNS. </li><li> Desheath la STG all&#39;utilizzo di un supporto e un pin leggermente aquilino, fine, ago di tungsteno. Fai un piccolo foro in un angolo della guaina STG lontano dal corpo cellulare e utilizzare quel buco per arrivare tra gli strati della guaina. Accuratamente tagliato un lembo di guaina separati per esporre il neuropilo STG e corpi cellulari. </li><li> Pin qualsiasi lembi della guaina giù per aumentare l&#39;accessibilità ai corpi cellulari e di stabilizzare la STG per le registrazioni intracellulari. Re-pin il resto del STNS garantire che ogni nervo è teso e ben distanziati per la registrazione extracellulare (vedi figura 3). </li></ol> 3. Risultati <ol><li> Idealmente, tutti i nervi devono essere privi di ammaccature e danni, in particolare quelli che saranno registrate da. Nessuno dei nervi dovrebbe essere aggrovigliati o torto. La STG dovrebbe essere intatto con tutte le celle disposte in una formazione barba intorno al neuropilo. Il STNS intatta è simmetria bilaterale e assomiglia a un omuncolo con il lvns come le gambe, il mvns come le braccia e la fine anteriore come la testa. </li></ol> Abbreviazioni: <table border="1"><tbody><tr><td> STNS </td><td> Stomatogastric sistema nervoso </td></tr><tr><td> STG </td><td> Ganglio Stomatogastric </td></tr><tr><td> CoG </td><td> Ganglio commissurali </td></tr><tr><td> OG </td><td> Ganglio esofageo </td></tr><tr><td> mvn </td><td> Ventricolare nervo mediano </td></tr><tr><td> ione </td><td> Esofageo inferiore del nervo </td></tr><tr><td> figlio </td><td> Superiore nervo esofageo </td></tr><tr><td> AGN </td><td> Anteriore del nervo gastrico </td></tr><tr><td> ALN </td><td> Anteriore del nervo laterale </td></tr><tr><td> dgn </td><td> Dorsale del nervo gastrico </td></tr><tr><td> DVN </td><td> Ventricolare nervo dorsale </td></tr><tr><td> LVN </td><td> Ventricolare nervo laterale </td></tr><tr><td> PSN </td><td> Stomaco nervo posteriore </td></tr><tr><td> pyn </td><td> Nervo pilorica </td></tr><tr><td> PDN </td><td> Dilatatore nervo pilorica </td></tr><tr><td> dlvn </td><td> Ramo dorsale del nervo del ventricolo laterale </td></tr><tr><td> IVN </td><td> Ventricolare nervo inferiore </td></tr></tbody></table><img src="/files/ftp_upload/1207/figure_1_90ppi.jpg" alt= &quot;Figura 1&quot; /&gt; Figura 1: Diagramma che indica la posizione approssimativa del STNS nello stomaco prima di dissezione. <img src="/files/ftp_upload/1207/figure_2_90ppi.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2: Schema dei vari muscoli nella parte inferiore dello stomaco e una sovrapposizione della STNS in verde chiaro. Ogni tipo di cellula del STG è elencato con i muscoli è nota la loro innervare. Questa mappa è utile quando si pianifica di sezionare un nervo che trasporta un segnale da una determinata cella (per gentile concessione del laboratorio Nadim). <img src="/files/ftp_upload/old/1207_2009_1_12_5/figure_3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3: Rappresentazione schematica del STNS con elettrodi intracellulari e pozzi extracellulare (da Marder e Bucher, 2007).

<ol><li>Harris-Warrick, R. M., Marder, E., Selverston, A. I., Moulins, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarris-Warrick%2C+RM+%22Dynamic+Biological+Networks%3A+The+stomatogastric+nervous+system%22">Dynamic Biological Networks: The stomatogastric nervous system</a>. , MIT Press. Boston. (1992).</li>
<li>Marder, E., Bucher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+circuit+dynamics+using+the+stomatogastric+nervous+system+of+lobsters+and+crabs%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.</a> Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).</li>
<li>Maynard, D. M., Dando, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+the+stomatogastric+neuromuscular+system+in+Callinectes+sapidus%2C+Homarus+Americanus+and+Panulirus+argus+%28Decapoda+crustacean%29%5BTitle%5D)+AND+%22Philos.+Trans.+R.+Soc.+Lond.+B+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean).</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268 (892), 161-220 (1974).</li>
<li>Selverston, A. I., Russell, D. F., Miller, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Stomatogastric+Nervous+System%3A+Structure+and+function+of+a+small+neural+network%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">The Stomatogastric Nervous System: Structure and function of a small neural network.</a> Prog. Neurobiology. 7, 215-290 (1976).</li>
</ol>

La dissezione STNS è il primo passo per l&#39;esecuzione di un esperimento o di elettrofisiologia immunoistochimica, o per l&#39;ottenimento di cellule per la coltura cellulare. Indipendentemente l&#39;esperimento previsto, la dissezione lordo rimarrà invariato. Tuttavia, la dissezione multa può variare. E &#39;importante pianificare in anticipo del tempo che cellule e nervi che si registra da. La maggior parte dei neuroni nel STG sono processi che innervano almeno un muscolo nello stomaco (vedi figura 2) e sono classif...

<table><tbody><tr><td>Sylgard nero 170</td><td>Altro</td><td>Dow Corning</td><td>170</td><td>Dissezione grossolana</td></tr><tr><td>Forbici fini</td><td>Chirurgia</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>Puntine per insetti misura 6</td><td>Chirurgia</td><td>Fine Science Tools</td><td>26000-65</td><td></td></tr><tr><td>Forbici Mayo</td><td>Chirurgia</td><td>Fine Science Tools</td><td>14110-17</td><td></td></tr><tr><td>Microspatola</td><td>Chirurgia</td><td>WARD&amp;rsquo;s Natural Science</td><td>15 V 4313</td><td></td></tr><tr><td>Fratturatore osseo (rongeurs)</td><td>Chirurgia</td><td>Fine Science Tools</td><td>16000-14</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per tessuti</td><td>Chirurgia</td><td>Fine Science Tools</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>Filo fine di tungsteno (diametro 0,001 in)</td><td>Chirurgia</td><td>California Fine Wire Company</td><td></td><td>Dissezione fine</td></tr><tr><td>Pinze n. 5</td><td>Chirurgia</td><td>Fine Science Tools</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>Puntine minutine</td><td>Chirurgia</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>Forbici a molla Moria (lame da 7 mm)</td><td>Chirurgia</td><td>Fine Science Tools</td><td>15370-52</td><td></td></tr><tr><td>Piatto di Petri (100x15 mm)</td><td>Altro</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td></td></tr><tr><td>Portapuntine</td><td>Chirurgia</td><td>Fine Science Tools</td><td>26018-17</td><td></td></tr><tr><td>Pinze superfini n. 5SF</td><td>Chirurgia</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 182</td><td>Altro</td><td>Dow Corning</td><td>182</td><td></td></tr><tr><td>Aghi di tungsteno</td><td>Chirurgia</td><td>Fine Science Tools</td><td>10130-05</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio stereoscopico</td><td>Microscopio</td><td>Wild</td><td>MC3</td><td>Varie</td></tr><tr><td>Granchio Jonah (&lt;em&gt;C. borealis&lt;/em&gt;)</td><td>Animale</td><td>Commercial Lobster</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

cancro borealis stomatogastric dissezione del sistema nervoso

Cancer Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection

Il ganglio stomatogastric (STG) è un modello eccellente per studiare le interazioni cellulari e di rete, perché contiene un numero relativamente piccolo di cellule (circa 25 in C. borealis) che sono ben caratterizzati. Le cellule del STG mostra una vasta gamma di uscite e sono responsabili delle azioni motorie dello stomaco. Lo stomaco contiene il mulino gastrico che scompone il cibo con tre denti interni, e il piloro che filtra il cibo prima che raggiunga il midgut. La STG produce due uscite ritmica per controllare il mulino gastrica e piloro conosciuto come generatori di pattern centrali (CPG). Ogni cella della STG possono partecipare a uno o entrambi questi ritmi. Queste CPGs permettono per lo studio della neuromodulazione, omeostasi, la variabilità cellulare e di rete, sviluppo della rete, e il recupero della rete. La dissezione del sistema nervoso stomatogastric (STNS) dal granchio Giona (Cancer borealis) è fatto in due parti: la dissezione lordo e fine. Nella dissezione lordo stomaco intero sezionato dal granchio. Durante la dissezione bene il STNS viene estratto dallo stomaco utilizzando un microscopio dissezione e micro-dissezione strumenti (vedi figura 1). Il STNS comprende la STG, il ganglio esofageo (OG), ed i gangli commissurali (COG) così come i nervi che innervano i muscoli dello stomaco. Qui mostriamo come eseguire una dissezione completa del STNS in preparazione per un esperimento di elettrofisiologia in cui le cellule del STG sarebbe registrato da cellule ed i nervi periferici sarebbe stato utilizzato per le registrazioni extracellulari. La tecnica corretta per trovare i nervi desiderata è mostrata così come la nostra tecnica di desheathing ganglio di rivelare la somata e neuropilo.

Il sistema nervoso stomatogastric (STNS) del granchio Giona (<em&gt; C. Borealis</em&gt;) Può essere utilizzato per elettrofisiologia, immunoistochimica, e studi su colture cellulari. L&#39;estrazione STNS avviene in due parti: la dissezione lordo e fine.

Cancro Borealis Stomatogastric dissezione del Sistema Nervoso

Il ganglio stomatogastrico (STG) è un modello eccellente per studiare le interazioni cellulari e di rete poiché contiene un numero relativamente esiguo di...

Questa procedura inizia con una dissezione macroscopica dello stomaco del granchio, durante la quale gli ap pendici e il carpo dorsale vengono rimossi dal granchio. L'intero stomaco viene dissezionato dall'animale. Lo stomaco viene aperto con un taglio e fissato piatto su una capsula Petri nera.In preparazione alla dissezione fine, il sistema nervoso gastrico di Steamatic viene dissezionato dallo stomaco e trasferito in una capsula di Petri chiara rivestita in Sard, dove viene descheletrizzato in vista di un esperimento di elettrofisiologia. Ciao, mi chiamo Rachel Au del laboratorio Martyr dell'Università di Brandeis. E io sono Gabrielle Gutierrez, anch'io del laboratorio Martyr.Oggi vi mostreremo una procedura per dissezionare il sistema nervoso gastrico somatico dal granchio Cancer borealis. Nel nostro laboratorio utilizziamo il sistema nervoso dello St del granchio per esperimenti di elettrofisiologia, immunohistochimica e colture cellulari. Utilizzando questa rete neurale, possiamo indagare diversi principi fondamentali della neurobiologia, come la modulazione neuromodulatrice, l'omeostasi, la variabilità della rete, lo sviluppo della rete e il recupero della rete.Iniziamo. Prima di iniziare la dissezione, il granchio deve essere intorpidito coprendolo completamente di ghiaccio per 30 minuti. Assicurarsi di circondarlo da tutti i lati con ghiaccio.Il ghiaccio inibisce i sistemi sensoriali e motori del granchio, ma il granchio potrebbe comunque essere reattivo quando viene rimosso, mentre è freddo. Prepararsi alla dissezione macroscopica raccogliendo l'attrezzatura necessaria per questa parte del protocollo. Il vassoio per dissezione, forbici da laboratorio per tagliare ossa, forbici piccole, pinzette con punte dentate, una spatola con bordo affusolato, una capsula in vetro rivestita di nero e spilli per insetti prima di iniziare.Proteggi le mani indossando guanti. Trascorsi 30 minuti, rimuovi il granchio dal secchiello del ghiaccio afferrandolo per la zampa posteriore. Per evitare di essere pizzicato e prima di posizionarlo nel vassoio di dissezione, rimuovi le chele ruotando ciascuna verso l'interno.Successivamente, rimuovere ogni gamba utilizzando lo stesso movimento di torsione. Ora che l'animale è privo di appendici, utilizzare il Ron Jos per rimuovere la mascella che copre la bocca e la mascella molle. Utilizzando nuovamente il Ron Jos, partire dall'estremità latero-posteriore del carpo e afferrare saldamente il bordo. Stringere con il Ron Jos e staccare quella porzione di carpo.Assicurarsi di rimuovere una porzione sufficiente del carpo per permettere l'inserimento della spatola nell'apertura. Continuare a rimuovere il margine del carpo fino agli occhi e ripetere dall'altro lato. Con il lato affusolato della spatola, staccare delicatamente il tessuto interno morbido dal tetto del carpo dorsale.Mentre si esegue questa operazione, mantenere la spatola a contatto con il carus. Per evitare di danneggiare le STNS, utilizzare il Ron Jos per staccare le parti del carus che sono state separate dal tessuto. Staccare il carus dorsale fino al punto in cui si notano due piccoli S che sporgono dal carus.Tagliare il più anteriormente possibile. Stabilizzare il cefalone con un dito mentre si rimuovono le parti più anteriori del carapace dorsale. Separare alcuni tessuti molli dal carapace ventrale.Assicurarsi di separare tutti i muscoli adduttori che collegano il tessuto al carpo sulla faccia ventrale del carpo. Estrarre le mandibole una alla volta, ancorando le mascelle errate su una mandibola ruotandola verso l'esterno ed estraendo due ostacoli allungati ai quali dovrebbero essere attaccati dei muscoli. Se eseguito correttamente, separare il tessuto dai lati del cefalone vicino agli occhi.Utilizzando la spatola con piccole forbici da dissezione, tagliare strato per strato il tessuto proprio accanto alla cresta dell'ossicolo. Sostenere ciò che resta del granchio contro il vassoio da dissezione. Utilizzando le chele staccate, staccare completamente il labro dall'epistoma.Utilizzando le piccole forbici da taglio osseo, effettuare due incisioni diagonali nel carpo ventrale. Per rimuovere il cefalone, afferrare ora il labro con pinzette dentate e staccare il labio dall'osso sul lato ventrale. Sollevare delicatamente il labbro dal carpo ventrale residuo.Utilizzare forbici piccole per separare la parte ventrale dello stomaco dal tessuto che riveste il carapace. Quando le pori canula sono visibili, tagliare lo stomaco dal tessuto su entrambi i lati fino a quando lo stomaco viene estratto dal granchio, tenendo lo stomaco con il labbro mediante pinzette. Appoggiare lo stomaco sul palmo della mano e versare soluzione salina nella bocca.Questo espanderà lo stomaco e renderà più facile aprirlo utilizzando le piccole forbici. Tagliare dall'apertura della bocca verso il basso tra le ula, attraversando completamente l'ostacolo. Quindi tagliare diagonalmente attraverso i due rami cardio.Infine, recidere le punte dei tre denti presenti all'interno dello stomaco. Posizionare lo stomaco su una piastra nera rivestita con la faccia interna dello stomaco rivolta verso il basso, per prepararlo alla dissezione fine. Fissare con spilli da insetto i cinque angoli dello stomaco e immergere il preparato in soluzione salina fredda.La dissezione fine viene eseguita al microscopio stereoscopico e richiede pinzette e forbici a molla, oltre a un supporto per perni con un ago al tungsteno. Una piastra di Petri con bordo trasparente rivestito e alcuni perni di filo sottile devono essere già pronti; iniziando dall'ingrandimento più basso, fissare con i perni i lembi vicino al labbro che un tempo costituivano l'apertura della bocca. Rendere ora la preparazione tesa riorganizzando e aggiungendo perni secondo necessità.Con una pinzetta, sollevare con attenzione l'ipoderma maculato che ricopre la parte inferiore del preparato e tagliarlo trasversalmente. Quello che deve rimanere è una porzione di ipoderma con due puntini bianchi. Ora staccare il tessuto membranoso giallo e filamentoso situato vicino alla base del preparato. I M vns sono debolmente attaccati alla faccia inferiore di questo tessuto.Utilizzando la lama delle forbici, separare con attenzione il M VNS dal tessuto giallo mentre viene sollevato. Rimuovere il tessuto giallo lungo i pochi spessi processi bianchi visibili del cervello. La maggior parte del cervello è attualmente sepolta nel tessuto.Seguire i processi che si estendono lateralmente e in direzione del labbro. Questi sono i due nervi comessurali. Una volta individuata l'estremità del nervo comessurale, rimuovere il tessuto spugnoso di colore bianco sporco che è stato asportato dal lato del cervello.Individuare l'IO e il sos al punto di giunzione con i gangli comessurali. Rimuovere il muscolo e il tessuto per esporre l'intera lunghezza dei nervi IO ns e so ns; questi due nervi decorrono medialmente dai gangli comessurali e si uniscono al nervo esofageo. Tornare alla zona ipodermica maculata e asportarla.Questa operazione deve lasciare un'apertura nell'arteria che circonda il STG. Tagliare attraverso l'apertura per separare i due muscoli che fiancheggiano il STG. Sollevare le estremità di questi muscoli e tagliare al di sotto per staccarli dall'arteria. Questo passaggio espone i ALNs.Rimuovere i muscoli laterali fino alla linea cartilaginea sopra il nucleo subtalamico (STN). Il nervo timpanico (TN) è un nervo che risale dal ganglio timpanico superiore (STG) e presenta un lieve rigonfiamento. Successivamente, asportare il tessuto arterioso circostante il ganglio timpanico superiore (STG) fino al punto in cui il nervo vago mediale (M vns DGN) e il nucleo dorsale del vago (DVN) si incontrano.Seguire il DVN mentre si divide nei due LVN. Tagliare attraverso il tessuto delicato di colore biancastro fino a quando ogni LVN è completamente esposto e si congiunge con il DLVN. Individuare il PSN sopra l'Osco.Vicino alla base della preparazione, il PSN può essere utilizzato per individuare il punto di giunzione tra LVN e DLVN. Quindi il DV DLV procede in questo modo. Scende qui. Sì.Successivamente si divide e prosegue in questa direzione. Esatto. Quindi quello che faccio di solito è individuarle qui in basso e risalire all'indietro. Il PDN si dirama dal DLVN ed è situato tra i muscoli della valvola ULA e cardio Pylori. Sì. Quindi qui ci sono l'ampolla ula, l'ula ampolla, il P, il PYN proprio qui.Assicurarsi di lasciare un po' di muscolo attaccato a uno di questi nervi come marcatore per distinguerli l'uno dall'altro. Una volta che tutti i nervi sono stati esposti, recidere eventuali connessioni rimanenti tra il STNS e lo stomaco. Infine, spostare con cura il STNS dal resto dello stomaco.Tagliare eventuali connessioni rimaste. Preparare la capsula S trasparente sfregando un po' di tessuto gastrico su di essa finché non risulti umida e meno appiccicosa. Il STNS aderirà saldamente al sogar.Se la piastra non è stata condizionata in questo modo, aggiungere un po' di soluzione salina fresca e fredda alla piastra. Afferrare con una pinzetta le estremità superiori dei nervi comissurali e spostare il NS st al piatto Sogar chiaro. Il cervello rimarrà ancora attaccato ai nervi comissurali per evitare che si annodino.Ora, preparare i STNS per la fissazione recidendo il cervello dai nervi commissurali. Utilizzare spilli minuchin per fissare le quattro estremità dei nervi commissurali al paraurti inferiore. Assicurarsi che il preparato sia posizionato nel verso corretto verificando che il nervo IVN sia orientato verso l'alto e che il nervo DGN esca leggermente al di sotto del pin STG.Il resto del nervo termina in basso con i perni di filo sottile. Utilizzando pinzette e forbici fini, rimuovere con attenzione qualsiasi muscolo o tessuto residuo dal STNS. Ora il STG deve essere privato della guaina utilizzando un portaperne con un sottile ago di tungsteno leggermente ricurvo.Praticare un piccolo foro nell'angolo della guaina del STG, lontano dai corpi cellulari. Inserire delicatamente l'ago di tungsteno nel foro e posizionarlo tra la guaina e il Samara. Tagliare o strappare delicatamente una linguetta di guaina staccata per esporre il neuro pacco del STG e i corpi cellulari.Fissare eventuali lembi della guaina per aumentare l'accessibilità ai corpi cellulari e stabilizzare il ganglio stomatogastrico (STG) durante le registrazioni intracellulari. Orientare il resto del sistema nervoso stomatogastrico (STNS) assicurandosi che ogni nervo sia teso e ben distanziato per le registrazioni extracellulari. Idealmente, tutti i nervi dovrebbero essere privi di restringimenti e danni, in particolare quelli dai quali si effettueranno le registrazioni.Nessuno dei nervi deve essere aggrovigliato o attorcigliato. Il STG deve essere integro, con tutte le sue cellule disposte in una formazione a barba attorno al becco del NI. Il TNS era bilaterale e simmetrico e presenta l'aspetto di un omoncolo, con i LVN che corrispondono alle gambe.L'M vns corrisponde agli arti e l'estremit&agrave; anteriore &egrave; la testa. Vi abbiamo appena mostrato come dissezionare il sistema nervoso gastrico somatico del granchio in preparazione a un esperimento di elettrofisiologia. Quando si esegue questa procedura, &egrave; importante ricordare di dissezionare i nervi dai quali si intende registrare, seguendo i nervi desiderati fino ai muscoli che si sa sono da essi innervati.Assicurarsi che il STNS sia fissato in tensione sulla piastra trasparente a forma di sigaro con il lato del STG privo di guaina rivolto verso l'alto. Ecco fatto. Grazie per aver guardato e buona fortuna con i vostri esperimenti.

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Biologia

Descriviamo la dissezione di precisione del sistema nervoso stomatogastric dallo stomaco del aragosta americana...

Homarus Americanus Stomatogastric dissezione del Sistema Nervoso

Descriviamo la dissezione lordo dello stomaco del aragosta americana...

Dissezione lordo dello Stomaco del Gambero, Homarus Americanus</em

La cooperazione tra l'oncogene attivato, come RAS V12 e le mutazioni nei geni della polarità cellulare come scarabocchiato, causare la crescita del tumore in Drosophila in cui le cellule tumorali mostrano anche comportamenti invasivi. Qui un semplice protocollo per l'induzione e l'osservazione dei tumori benigni e invasivi è presentato.

Un protocollo per induzione genetica e la visualizzazione dei tumori benigni e invasive in cefalico Complessi di<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Lamprede recuperare locomozione dopo una lesione completa del midollo spinale. Tuttavia, alcuni neuroni spinali-proiezione sono buoni recuperatori e altri non lo sono. Questo documento illustra le tecniche per la lampreda di mare abitazioni larve (e adulti recentemente trasformati), producendo completi transezioni midollo spinale e la preparazione di cervelli wholemount e midolli spinali per l'ibridazione in situ.

Completa lesioni del midollo spinale e del cervello dissezione Protocollo per Wholemount successiva<em&gt; In Situ</em&gt; Ibridazione in larvale Sea Lamprey

Qui descriviamo la dissezione del cordone nervoso addominale del gambero. Dimostriamo anche una tecnica elettrofisiologica per registrare la locomozione fittizia dai motoneuroni nuotatori.

Il Sistema swimmeret di gamberi: Una guida pratica per la dissezione del cavo di Nerve e extracellulari registrazioni del modello Motor

Questo articolo video mostra l'uso dei gangli della radice dorsale (DRG)/modello di cellule tumorali nell'adenocarcinoma duttale pancreatico.

In Vitro Modellazione di cancerose Neural Invasion: La dorsale della radice Ganglio Modello

L'invasione perineurale (PNI) è una caratteristica comune del carcinoma a cellule squamose della testa e del collo (HNSCC), che conferisce tassi di sopravvivenza più bassi. I suoi meccanismi sono poco conosciuti. Utilizzando neuriti generati da gangli murini della radice dorsale confinati in una matrice semisolida, è possibile studiare le vie coinvolte nel PNI delle linee cellulari HNSCC.

Un modello per perineurale Invasion in testa e del collo carcinoma a cellule squamose

Qui presentiamo un protocollo per la parte chirurgica minimamente invasiva dei muscoli intrinseci all'apparato alimentare del mollusco marino Aplysia californica per comprendere i ruoli di questi muscoli durante il comportamento di alimentazione.

Una tecnica di lesione mini-invasiva per i muscoli intrinseca all'odontoia di Aplysia californica

Questo protocollo presenta un metodo per l'imaging dell'attività della popolazione neuronale con risoluzione a singola cellula in specie di invertebrati non transgenici utilizzando coloranti sensibili alla tensione di assorbanza e un array di fotodiodi. Questo approccio consente un flusso di lavoro rapido, in cui l'imaging e l'analisi possono essere perseguiti nel corso di un solo giorno.

Imaging ottico basato su fotodiodi per la registrazione di dinamiche di rete con risoluzione a singolo neurone in invertebrati non transgenici

Il presente protocollo descrive un modello murino di ablazione dell'innervazione adrenergica mediante l'identificazione e la resezione del ganglio cervicale superiore.

Tecnica chirurgica per ganglionectomia cervicale superiore in modello murino

Impara la dissezione del sistema nervoso stomatogastrico di Cancer borealis per registrazioni elettrofisiologiche. Questo metodo consente di studiare circuiti neurali e generatori di pattern motori.

Cancro Borealis Stomatogastric dissezione del Sistema Nervoso

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