Name: Gene-gun trasfezione di neuroni dellippocampo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: Impara la trasfezione con gene gun di neuroni dell'ippocampo per studi neuroscientifici. Questo metodo consente l'isolamento preciso del tessuto cerebrale e l'integrazione genica in vitro.

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gene-gun trasfezione di neuroni dell&#39;ippocampo

Gene-gun Transfection of Hippocampal Neurons

Gene-gun trasfezione di neuroni dell&#39;ippocampo

Ciao, sono Kma. Lavoro nel Case Lab della Brown University. Pulisco lo stage del taglia-campioni con etanolo al 70%. Inserisco la piastra nel sei.Piastra a pozzetti con mezzo e incubare a 37 gradi. Estrarre il cervello intero con pinzette tra il mesencefalo e il telencefalo. Isolare l'ippocampo da un lato, quindi isolare l'ippocampo dal secondo lato. Posizionare gli ippocampi su una goccia di PBS.Aspirare il PBS ed eseguire sezioni sagittali utilizzando il taglia tessuti. Ripetere il trasferimento dei taglia tessuti su un recipiente aggiungendo e aspirando delicatamente PBS e mezzo per lavare le sezioni. Separare le sezioni con pinzette.Lavare le sezioni con PBS e mezzo. Nuovamente, trasferire le sezioni sulla piastra e inserirle. Aspirare il mezzo dalle sezioni utilizzando pinzette.Collegare il tubo della pistola genica al cilindro di elio. Fissare la canna alla pistola genica. Riempire il caricatore con i proiettili.Inserire la cartuccia nella pistola Jing. Regolare la pressione sul serbatoio di elio per lo sparo. Applicare le perle rivestite con EGFP sulle sezioni.E ora.

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Descriviamo un metodo per la preparazione di proiettili rivestiti d'oro del DNA e dimostrare l'uso di proiettili ad esempio per trasfettare biolistically neuroni in colture di fettine di ippocampo.

Preparazione di proiettili pistola Gene e Biolistic Transfection dei neuroni in cultura Slice

L'imaging cellulare Live è di particolare utilità quando si studiano le dinamiche del traffico di organelli. Qui si descrive un protocollo per l'imaging dal vivo di denso-core vescicole in neuroni coltivati ​​con grande campo microscopia a fluorescenza. Questo protocollo è flessibile e può essere adattato a organelli altra immagine come i mitocondri, endosomi e perossisomi.

Immagini dal vivo di Dense-core Vescicole nella Primaria neuroni coltivati ​​ippocampale

Questo protocollo delinea i passaggi necessari per analizzare, attraverso trasfezione elettroporazione e neuroni dell'ippocampo e del mouse cultura corticale. Colture a breve termine possono essere utilizzati per gli studi della crescita degli assoni e la guida, mentre a lungo termine le culture possono essere utilizzati per studi di sinaptogenesi e analisi spine dendritiche.

Nucleofection e cultura primaria di neuroni embrionali di topo ippocampale e corticale

Fonte: Keener, D. G., et al. Elettroporazione a singola cellula in diverse colture organotipiche di neuroni eccitatori eccitatori e inibitori specifici di classe dell'ippocampo di topo. J. Vis. Exp. (2020).Questo video mostra il processo di elettroporazione a singola cellula per introdurre il DNA plasmidico nei neuroni all'interno di colture di fette di ippocampo di topo. La procedura prevede il posizionamento preciso della pipetta, la regolazione della pressione e gli impulsi di...

Espressione genica tramite elettroporazione di una singola cellula in colture di fette di ippocampo di topo

Fonte: Denaxa, M., el al., Trapianto di progenitori interneuronali corticali chemiogeneticamente modificati in cervelli di topo postnatali precoci. J. Vis. Exp. (2019)Questo video mostra la procedura per iniettare un vettore plasmidico che trasporta il gene di interesse nei progenitori degli interneuroni in una fetta di cervello embrionale, seguita dall'elettroporazione per l'ingresso nel plasmide e l'espressione genica. Questi progenitori modificati possono essere successivamente utilizzati...

Trasferimento genico assistito da elettroporazione incorporato in agarosio nei progenitori degli interneuroni corticali di topo

Precipitazione di fosfato di calcio è un metodo conveniente ed economico per la trasfezione di cellule in coltura. Con ottimizzazione, è possibile usare questo metodo su cellule di difficile trasfezione come neuroni primari. Qui descriviamo il nostro protocollo dettagliato per fosfato di calcio trasfezione di neuroni dell'ippocampo co-coltivate con le cellule astrogliali.

Fosfato di calcio trasfezione di primaria neuroni dell&#39;ippocampo

I recenti miglioramenti nelle preparazioni organotipiche di fette di cervello hanno permesso il loro sfruttamento per applicazioni biotecnologiche. Le fette organotipiche mantengono le caratteristiche strutturali locali della biologia in vivo, comprese le connessioni sinaptiche funzionali. Qui presentiamo un metodo di somministrazione biolistico regioselettivo per etichettare e manipolare geneticamente queste fette.

Regioselettiva Biolistic Targeting in Organotipica Fette cervello Utilizzando un Gene Gun Modificato

Presentato qui è un metodo di tubo rullo modificate per la coltura e fette di imaging ad alta risoluzione intermittente del cervello del roditore sopra molte settimane con riposizionamento preciso sulle lamelle di fotoincisioni. Vitalità neuronale e fetta morfologia sono ben tenute. Vengono fornite applicazioni di questo sistema completamente chiusa usando i virus per espressione specifica del tipo di cella.

Metodo del tubo rullo modificate per Imaging intermittente precisamente localizzata e ripetitivi durante la coltura a lungo termine delle fette di cervello in un sistema chiuso

Presentato qui è un protocollo per l'elettroporazione a singola cellula in grado di fornire geni sia nei neuroni eccitatori che inibitori in una vasta gamma di età della coltura di fette ippocampali in vitro. Il nostro approccio fornisce un'espressione precisa ed efficiente dei geni nelle singole cellule, che può essere utilizzata per esaminare le funzioni cellulari autonome e intercellulari.

Elettroporazione a cella singola attraverso diverse culture di fette organotipiche di neuroni eccitatori ippocampali del topo e specifici della classe

Questa tecnica mostra un modo efficace per preparare le scorte retrovirali replica difettoso codifica di un oncogene umano, e successivamente utilizzata per l'induzione di malattie mieloproliferative nel modello murino.

Produzione di replica-difettoso da Retrovirus trasfezione transiente di cellule 293T

Impara la trasfezione con gene gun di neuroni dell'ippocampo per studi neuroscientifici. Questo metodo consente l'isolamento preciso del tessuto cerebrale e l'integrazione genica in vitro.

Gene-gun trasfezione di neuroni dell'ippocampo

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