Name: Dissezione di non-umano cervello dei primati nello spazio Stereotassica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-16T20:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: Impara la dissezione stereotassica del cervello di primati non umani per studiare l'organizzazione cerebrale e le funzioni neurologiche. Questo metodo fornisce informazioni preziose sulla fisiologia normale e patologica umana.

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Gli autori desiderano ringraziare Ikiel Ptito per il suo continuo supporto tecnico. NSERC concedere a MP.

Parte 1: Pre-trattamento dei tessuti <ol><li> Tessuto deve essere ben perfusi con paraformaldeide, glutaraldeide, o formalina. Questo può essere raggiunto attraverso standard di perfusione transcardial tipicamente usato per raccogliere altri organi. Nel presente studio il soggetto era profondamente sedato con cloridrato di ketamina (10 mg / kg, im), eutanasia con una dose eccessiva di sodio pentobarbital (25 mg / kg, iv) e perfusi transcardially con 0,1 M PBS fino a completo exsanguinated.This è seguito da una soluzione di paraformaldeide al 4% in PBS per 5 min (~ 1 litro). </li></ol> Parte 2: Stereotassica blocco <ol><li> Prima di mettere la testa nel frame stereotassico le coordinate dello zero Horsley-Clarke/interaural aereo deve essere preso. Questo è il punto medio teorico tra le orecchie. Per misurare questo piano, le barre orecchio devono essere ugualmente montato l&#39;apparecchio, poi posto una lama di bisturi nel braccio manipolatore stereotassica e misurare il punto medio tra le sbarre orecchio. Questo è importante per determinare dove per bloccare il tessuto in base alle esigenze di ricerca. Una volta che questo è completato il cranio deve essere preparato per la fissazione nell&#39;apparecchio stereotassica. </li><li> Al fine di posizionare la testa nel frame stereotassico la mascella inferiore dovrà essere rimosso con Rongeurs osso e un bisturi. Inoltre la pelle, muscoli e tessuto connettivo deve essere rimosso al fine di esporre il cranio. Una volta che il tessuto connettivo viene rimosso dal cranio, esporre il cervello intaccando il calvaria (la parte tabellare dell&#39;osso occipitale e parietale, le ossa ad frontale). Nella parte presente esperimento della calvaria è tutto pronto stato rimosso. Fare attenzione a non rimuovere completamente le ossa temporali, perché il canale uditivo dovrà essere intatto per posizionare la testa nel telaio stereotassico. La questione restante durata dovrebbe essere rimosso dal cervello esposto. Il cranio è ora pronto per essere inserito nel telaio stereotassico. </li><li> Nello stesso modo in cui si effettuerebbe un intervento di chirurgia stereotassica, regolare l&#39;occhio, il palato, e bar orecchio in modo che la testa è saldamente fissato l&#39;apparato stereotassico. Posizionare il manipolatore stereotassica nelle coordinate predeterminato anteriore / posteriore (A / P) e spostare il manipolatore alla faccia laterale del cervello. Abbassare lentamente la lama nel cervello, completamente sollevare la lama dal cervello, quindi spostare medialmente e abbassare la lama di nuovo. Ripetere questi due passi fino a quando la lama ha raggiunto la superficie laterale dell&#39;emisfero opposto. Questo completa il primo blocco coronale. Per i successivi blocchi coronale spostare i 1cm manipolatore in asse A / P e ripetere fino a tutto il cervello è stato bloccato. </li></ol> Parte 3: Rimozione del cervello dal cranio <ol><li> Togliere la testa dal telaio stereotassico e tenere il cervello esposti nel palmo della vostra mano. Provate a fissare il cervello con una leggera ponendo vezzeggiare il cervello nel palmo della tua mano e il dito mignolo tra i lobi frontali, questo movimento minimizza del cervello nel cranio. Al fine di evitare l&#39;essiccamento della superficie piale del cervello, posto un pezzo di garza imbevuto PBS in tutto il cervello. Tenere la testa saldamente dal cranio e sgretolare le ossa rimanenti occipitale e temporale insieme alla colonna vertebrale. Questo espone gli aspetti di base e laterale del cervello. Infine togliere qualunque osso residuo frontale e l&#39;osso nasale, che permetterà l&#39;accesso ai bulbi olfattivi. E &#39;importante rimuovere l&#39;osso frontale ultima perché, come si rimuove la base del cranio, il cervello e si muove leggermente i lobi frontali possono essere danneggiati ai bordi frastagliati delle ossa fontale. Tagliare e rimuovere i restanti materia dura. Sollevare con cautela la parte anteriore del cervello, far scorrere il bisturi sotto il cervello e liberare il cervello dal cranio. </li></ol> Parte 4: Misure <ol><li> Ci sono una serie di misure utili che possono essere fatte prima del congelamento. Ad esempio, l&#39;asse A / P del cervello con una pinza. Inoltre la densità specifica può essere misurata dal peso del cervello, misurazione del volume dallo spostamento d&#39;acqua in un cilindro graduato poi dividendo il peso per il dislocamento del volume (Tabella 1). </li></ol> Parte 5: Fine bloccando il cervello. <ol><li> In genere quando il bisturi viene inserito nel cervello non è abbastanza a lungo per penetrare completamente l&#39;intero dorso-ventrale misura del cervello. Una volta che il cervello viene rimosso e le misurazioni sono ottenute lordo, prendere un tessuto-slicing lama e finire bloccando il cervello attraverso il lato ventrale del cervello (Figura 2). </li><li> Prima del congelamento dei blocchi, è necessario cryoprotect il tessuto in PBS graduato-buffered soluzioni di saccarosio (10, 20, e 30%) hanno mantenuto a 4 ˚ C fino a quando il cervello affonda. Ci vuole in genere una notte di incubazione a 10%, 2-3 giorni nel 20% e ulteriori 3-5 giorni nel 30% per i blocchi a depositarsi sul fondo del contenitore. Un cambio giornaliero di secolosoluzione di saccarosio e 30% è raccomandato. </li></ol> Parte 6: Risultati Rappresentante Ci sono una serie di gravi misure morfologiche che possono essere fatte una volta che il cervello è stato rimosso dal cranio. Questi includono un rapporto lunghezza / P, il peso e la densità specifica (Tabella 1). In genere bloccare il cervello in 6-7 blocchi di misura 1cm (Figura 1). Ogni pezzo viene poi fotografato (Figura 2) e può essere ulteriormente sezionato a seconda delle esigenze di ricerca o pronti per essere congelati in soluzioni di saccarosio classificato. <table border="1"><tbody><tr><td> Soggetto </td><td> A Lunghezza / P (Mm) </td><td> Peso (Grammi) </td><td> Acqua Cilindrata (Ml) </td><td> Densità specifica (G / ml) </td></tr><tr><td> O2303-2-1-1 </td><td> 64,3 </td><td> 28,1 </td><td> 24 </td><td> 1,171 </td></tr><tr><td> O5180-1 </td><td> 71,3 </td><td> 38,7 </td><td> 34 </td><td> 1,138 </td></tr><tr><td> O2708-3-1 </td><td> 62,8 </td><td> 28,7 </td><td> 26 </td><td> 1,104 </td></tr><tr><td> O9184-4-2 </td><td> 65,3 </td><td> 29,5 </td><td> 24 </td><td> 1,229 </td></tr><tr><td> N459-1-14-2 </td><td> 68,2 </td><td> 31,6 </td><td> 26 </td><td> 1,215 </td></tr><tr><td> MEDIA </td><td> 66,38 </td><td> 31,32 </td><td> 26,8 </td><td> 1,171 </td></tr><tr><td> STD DEV </td><td> 3,38 </td><td> 4,33 </td><td> 4,17 </td><td> 0,052 </td></tr></tbody></table> Tabella 1. Misure lordo morfologica della Right Hemisphere su 5 cercopitechi mesi <img src="/files/ftp_upload/1259/1259fig1.jpg" alt="figura 1" /> <img src="/files/ftp_upload/1259/1259fig2.jpg" alt="figura 1.5" /> Figura 1. Schemi per i piani coronali utilizzato per bloccare il cervello. Questo è un esempio di un cervello esteriorizzato vervet adulto. Esempio della procedura di blocco. Le linee verticali qui sono distanziati di 1 cm, di solito produce 7 blocchi coronale da ciascun emisfero. <img src="/files/ftp_upload/1259/1259fig3.jpg" alt="figura 2" /> Figura 2. Blocchi di tessuto cerebrale nello spazio stereotassico. Ciascun blocco produrrà circa 200 sezioni prese a 50 micron. Con questo schema di campionamento oltre 1200 sezioni attraverso la corteccia sarà presa e un ulteriore 400-500 dal cervelletto al taglio nel piano coronale.

<ol><li>Gallagher, M., Rapp, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+animal+models+to+study+the+effects+of+aging+on+cognition.+Annu+Rev+Psychol+48%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">The use of animal models to study the effects of aging on cognition. Annu Rev Psychol 48.</a> , 339-370 (1997).</li>
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<li>Mash, D. C., Staley, J. K., Doepel, F. M., Young, S. N., Ervin, F. R., Palmour, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+dopamine+transporter+densities+in+alcohol-preferring+vervet+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Altered dopamine transporter densities in alcohol-preferring vervet monkeys.</a> Neuroreport. 7, 457-462 (1996).</li>
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</ol>

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

Il St. Kitts cercopiteco (Chlorocebus aethiops sabeus) è un primate del Vecchio Mondo, con modelli simili e tassi di sviluppo del cervello corticali e sottocorticali a quella degli esseri umani. Questa specie è stata usata per modellare complessi disturbi del comportamento umano come comportamento ansioso, ipertensione 8, emisferectomia 9, 10 morbo di Parkinson, il morbo di Alzhemier il 11 e l&#39;abuso di alcool 12. Più recentemente, questa specie è stata utilizzata ...

<table><tbody><tr><td>Scalpello</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>Lame per scalpello</td><td>Fine Science Tools</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>Forbici</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-11</td><td>Qualsiasi forbice chirurgica è sufficiente</td></tr><tr><td>Forcipe da rognaggio</td><td>Fine Science Tools</td><td>16121-14</td><td></td></tr><tr><td>Pinze</td><td>Fine Science Tools</td><td>11027-12</td><td></td></tr><tr><td>Carta da filtro</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-924-150</td><td></td></tr><tr><td>Supporto stereotassico</td><td>Kopf Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lama per taglio dei tessuti</td><td>Thomas Scientific</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

dissezione di non-umano cervello dei primati nello spazio stereotassica

Dissecting the Non-human Primate Brain in Stereotaxic Space

L&#39;utilizzo di primati non umani fornisce un modello eccellente traslazionale per la nostra comprensione dei processi di sviluppo e di invecchiamento negli esseri umani<sup&gt; 1-6</sup&gt;. Inoltre, l&#39;uso di primati non umani ha recentemente dato l&#39;opportunità di modellare naturalmente complessi disturbi psichiatrici, come l&#39;abuso di alcool<sup&gt; 7</sup&gt;. Qui si descrive una tecnica per bloccare il cervello nel piano coronale della scimmia cercopiteco (<em&gt; Chlorocebus aethiops sabeus</em&gt;) Nel cranio intatto nello spazio stereotassico. Il metodo descritto fornisce: ecco un piano standard di sezione tra blocchi e soggetti e minimizza le sezioni parziali tra i blocchi. Sezionando un blocco di tessuto sul piano coronale facilita anche la definizione di una zona di interesse. Questo metodo fornisce blocchi di dimensioni gestibili in quanto un singolo emisfero della scimmia cercopiteco produce più di 1200 parti quando taglio a 50 micron. Inoltre, bloccando il cervello in blocchi 1 cm, che facilita la penetrazione di saccarosio per cyroprotection e permette il blocco da affettare su un criostato standard.

Il primate non umano è una specie importante traslazionale per la nostra comprensione della normale elaborazione del cervello. L&#39;organizzazione anatomica del cervello dei primati in grado di fornire spunti importanti in condizioni normali e patologiche nell&#39;uomo.

Dissezione di non-umano cervello dei primati nello spazio Stereotassica

L'uso di primati non umani fornisce un eccellente modello traslazionale per la nostra comprensione dei processi di sviluppo e di invecchiamento negli esseri umani1-6. In ...

Questa procedura inizia con una testa di scimmia ben perfusa. Dopo aver rimosso il cranio, la testa viene quindi posizionata nel telaio stereotassico ed eseguita una serie di sezioni coronali stereotassiche mediante il braccio manipolatore; successivamente il cervello viene rimosso, misurato e protetto mediante crioprotezione. Salve, sono il dottor Mark Burke del Laboratorio di Neuroscienze Visive della Scuola di Ottometria dell'Università di Montreal.Sono la dottoressa Shaheen Zur, anch'io del Laboratorio di Neuroscienze Visive della Scuola di Ottometria dell'Università di Montreal. Sono il dottor Mo Petto, direttore del Laboratorio di Neuroscienze Visive della Scuola di Ottometria dell'Università di Montreal. Oggi vi mostreremo una procedura per bloccare il cervello di primati non umani nello spazio stereotassico.Utilizziamo questa procedura nel nostro laboratorio per studiare diversi aspetti dell'organizzazione cerebrale nello sviluppo normale e in risposta a interferenze nello sviluppo. Cominciamo. Questo protocollo ha inizio dopo l'eutanasia, la fissazione e la decapitazione di una scimmia vervet.Prima della rimozione del cervello, è necessario preparare il telaio stereotassic

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