Name: Cella di misura Estensione impianto a parete (Creep), indotta dal pH acido e da Alpha-espansina (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-03-11T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 51 s
Description: Impara a misurare l'estensione delle pareti cellulari vegetali con un estensometro a forza costante. Questo metodo utilizza ipocotili di cetriolo per studiare l'attività delle espansine e il ruolo del pH acido nella crescita delle piante.

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Le tecniche qui sono stati sviluppati con finanziamenti da sovvenzioni da parte del Department of Energy (Scienze della bioenergia) e la National Science Foundation.

Parte 1: Crescere e stoccaggio di materiale vegetale idoneo <ol><li> Nella nostra esperienza, hypocotyls giovani piantine di cetriolo eziolata servire come comoda fonte di materiale della parete cellulare per questi esperimenti. Semi di cetriolo vengono seminati su carta bagnata in un box a prova di luce, che è conservato in un armadio buio in un ambiente a temperatura costante di 26 ° C. La temperatura esatta non è critica, come qualcosa tra i 22 ° e 30 ° C dovrebbe andare bene, ma la temperatura a determinare la velocità di piantine raggiungere un adeguato livello di sviluppo. Il più caldo la temperatura, più velocemente le piantine si svilupperanno. Usiamo tipicamente piantine quando sono cresciuti di circa 5 cm di lunghezza, che si raggiunge 3-4 giorni dopo la semina. E &#39;importante che la piantina è cresciuta al buio, in quanto anche piccole quantità di luce influenzano sia il tasso di sviluppo piantina e le proprietà della parete cellulare, che si misura con questa tecnica. Il giorno 3 si può sbirciare nella scatola, con una fioca luce verde filtrata, per controllare lo sviluppo piantina. </li><li> Piantine si stanno rapidamente tagliate e confezionate in piccole scatole di plastica, 100-150 piantine per scatola, e conservati a -80 ° C. A questa temperatura rimangono utili per settimane. </li></ol> Parte 2: Preparazione di campioni di parete cellulare <ol><li> Piccoli gruppi (8-10) di piantine taglio congelati sono trasferiti dal congelatore un contenitore isolato contenente un blocco -80 congelatore. </li><li> La cuticola che copre il ipocotile è abrasa con carborundum. Questo viene fatto ripetutamente il disegno ipocotile tra il pollice e l&#39;indice, che sono rivestiti con un impasto denso di umida polvere carborundum. Ci vuole un po &#39;di esperienza per conoscere la giusta quantità di pressione da utilizzare: troppa pressione e lo strato epidermico comincia ad essere triturati e lacerato, troppo poca pressione e la cuticola non sarà permeabilizzate. Bisogna anche lavorare velocemente, perché il gelato si scioglie ipocotile, diventa flaccido e difficile da gestire. </li><li> L&#39;ipocotile abrasa è immerso in acqua ghiacciata per rimuovere la maggior parte del carborundum aderente e poi memorizzati su acqua ghiacciata hypocotyls mentre i rimanenti sono preparati in modo simile. </li><li> Il hypocotyls sono tagliati alla lunghezza desiderata, di solito 1,2 cm, con una nuova singola lama di rasoio taglio e poi allineati su un vetrino. </li><li> Ora abbiamo bisogno di appiattire le mura di togliere linfa cellulare e per facilitare la chiusura. Una diapositiva secondo bicchiere è posto sulla parte superiore del gruppo di 8-10 campioni, formando un panino. Un peso (400-500 g) è posto sulla parte superiore del vetrino per 5 minuti. Per il peso che usano abitualmente un bicchiere contenente una quantità adeguata di acqua. </li><li> Passaggio facoltativo: a seconda della sperimentazione, il hypocotyls può essere inattivato con un breve trattamento termico a questo punto. Per fare questo si legano le diapositive di vetro insieme ad una coppia di elastici, inserire l&#39;assembly in un contenitore con 100 ml di acqua deionizzata a temperatura ambiente e metterla in un forno a microonde alla massima potenza. Con il nostro forno a microonde l&#39;acqua inizia a bollire a circa 50 s e ci fermiamo al microonde 15 s dopo la bollitura ha inizio. L&#39;acqua calda è subito travasato e sostituita con acqua fredda per fermare denaturazione. Potrebbe essere necessario variare questi tempi, come il vostro forno a microonde può essere diversa dalla nostra. Con riscaldamento eccessivo i campioni si indeboliscono e si rompono facilmente. Con un riscaldamento insufficiente il espansina endogeno non viene inattivata ed i campioni di muro conservano alcuni reattività a pH acido. </li></ol> Parte 3: setup Estensimetro <ol><li> I campioni muro ora sono bloccati in un estensimetro forza costante. Questa è una custom-built dispositivo che consiste in una vaschetta in plexiglas per lo svolgimento del fine basale del campione muro e un morsetto mobile fissato all&#39;estremità apicale del campione. Il morsetto mobile è montata all&#39;estremità di una barra che passa attraverso le bobine aperto di un sensore di posizione, un LVDT o &#39;differenziali variabili lineari Transformer&#39;, che rileva elettronicamente la posizione di un cilindro di metallo, o &#39;core&#39;, che è attaccato alla barra. L&#39;estremità superiore della barra è collegato a una leva con un contrappeso regolabile. Questa leva esercita una quantità regolabile di forza verso l&#39;alto sul campione muro. La forza viene regolata con l&#39;aggiunta o la rimozione dei pesi in metallo calibrato all&#39;estremità della leva. </li><li> Torna il campione muro - alla fine basale del campione ipocotile viene prelevato con una pinza sottile e ~ 2-3 mm dell&#39;estremità apicale è collocato tra le fauci spalancate del morsetto mobile. Questo morsetto è una molla morsetto a coccodrillo in metallo le cui fauci sono rivestiti di plastica per evitare il contatto diretto tra la superficie metallica e la soluzione tampone e il campione muro. Nella nostra esperienza di ioni metallici può percolare dal morsetto e inibiscono la capacità del muro di estendere, e così teniamo il metallo coperti. </li><li> Tenendo la pinza di montaggio mobili in una mano, la fine basale del campione muro è ora manovrato tra i due pezzi cerniera della vaschetta in plexiglas e la cuvettapezzi sono riuniti ed avvitato, in modo da bloccare l&#39;estremità inferiore del muro campione nella cuvetta. </li><li> L&#39;assemblea pinza mobile è ora gentilmente rilasciato, consentendo la piena forza dei contrappesi da trasferire al modello a parete. Noi abitualmente uso di un contrappeso totale di 20 g per i campioni preparati da parete hypocotyls cetriolo. Pareti di materiali o altri esperimenti potrebbe richiedere diversi pesi. </li><li> La cuvetta è piena di tampone (200 uL) e la posizione della cuvetta spostato verso l&#39;alto o verso il basso con una vite di regolazione, in modo che la pinza mobile è portato al limite inferiore del campo di misura LVDT. Il nostro LVDT è collegato ad una unità di acquisizione dati di un microcomputer, e così abbiamo monitorare la posizione LVDT attraverso il computer. Abbiamo otto assemblee LVDT collegato in parallelo con un computer, che ci permette di eseguire 8 campioni muro simultaneamente. Il computer registra la posizione di ciascuna delle assemblee LVDT una volta ogni 30 s. </li></ol> Parte 4: risposta estensione di misura a pH acido o espansina - Risultati Rappresentante <ol><li> [Primo esperimento] Per la misura di acido-indotta estensione, iniziamo con i campioni muro nativo (cioè non inattivato con il calore) e tampone neutro viene aggiunto alla cuvetta. I campioni muro si estendono per qualche minuto, in risposta alla tensione aggiunto, ma la decade estensione a un basso tasso dopo pochi minuti. Il nostro computer ci permette di monitorare entrambi la variazione della lunghezza del campione (cioè il cambiamento nella posizione della pinza mobile, dopo l&#39;inizio della sperimentazione) o siamo in grado di monitorare la derivata temporale della posizione, in altre parole il tasso di estensione . Il tasso di estensione si stabilizza ad un valore basso con il tempo. </li><li> Dopo circa 20 minuti, il buffer neutro viene rimosso. Noi usiamo un tubo di metallo sottile, fatto da un ago ipodermico grande calibro, collegato ad una pompa a vuoto per rimuovere il buffer in modo rapido, con il minimo disturbo della parete o il montaggio meccanico. Tampone acido è poi aggiunto, a volte con 1-2 scambi resoconto di assicurare lo scambio completo di tampone acido. Poi ci sediamo a guardare la risposta del muro. Di solito siamo in grado di rilevare il tasso più veloce di estensione in pochi minuti. Dopo 60 min di solito abbiamo abbastanza informazioni per valutare la risposta di estensione, sebbene in alcuni casi le misurazioni possono estendersi a periodi più lunghi. </li><li> [Secondo Esperimento] Per la misura di espansina indotta estensione della parete cellulare, si inizia con campioni di siero a muro e con un tampone acido viene aggiunto alla cuvetta. Come nel primo esperimento, il tasso di estensione della parete cellulare stabilizza gradualmente a un valore basso a causa della mancanza di espansina funzionale. </li><li> Dopo circa 20 minuti, le proteine ​​espansina viene aggiunto alla cuvetta da &#39;chiodare&#39; con il tampone nella cella con 10-20 uL di una soluzione espansina. Il espansina penetra rapidamente il campione parete cellulare e in pochi minuti si vede che il tasso di estensione è aumentata. Questa risposta estensione può essere seguito per un&#39;ora o più. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1263/fig1.png" alt="" width="600" height="469" /> Figura 1: Schema di procedure per la preparazione di pareti cellulari per valutare acido-indotta o espansina indotta estensione muro.

<ol><li>Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+long-term+extension+of+isolated+cell+walls+from+growing+cucumber+hypocotyls%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">Characterization of long-term extension of isolated cell walls from growing cucumber hypocotyls.</a> Planta. 177, 121-130 (1989).</li>
<li>Rayle, D. L., Cleland, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Acid+Growth+Theory+of+auxin-induced+cell+elongation+is+alive+and+well%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Acid Growth Theory of auxin-induced cell elongation is alive and well.</a> Plant Physiol. 99, 1271-1274 (1992).</li>
<li>Cleland, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxin-induced+growth+of+Avena+coleoptiles+involves+two+mechanisms+with+different+pH+optima%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Auxin-induced growth of Avena coleoptiles involves two mechanisms with different pH optima.</a> Plant Physiol. 99, 1556-1561 (1992).</li>
<li>Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loosening+of+plant+cell+walls+by+expansins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Loosening of plant cell walls by expansins.</a> Nature. 407, 321-326 (2000).</li>
<li>McQueen-Mason, S., Durachko, D. M., Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+endogenous+proteins+that+induce+cell+wall+expansion+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Two endogenous proteins that induce cell wall expansion in plants.</a> Plant Cell. 4, 1425-1433 (1992).</li>
</ol>

Per questa dimostrazione abbiamo usato le pareti delle cellule da hypocotyls cetriolo perché hanno dimostrato di essere una fonte affidabile di campioni di muro che sono facili da maneggiare e che rispondono con una buona sensibilità. Abbiamo anche avuto un buon successo con le pareti di altre piantine così come alcuni materiali dal supermercato, come foglie di spinaci giovani e gambi di sedano. In sostanza, giovane, morbido, tessuti vegetali in rapida crescita sono suscettibili di essere facilmente misurato con questa ...

cella di misura estensione impianto a parete (creep), indotta dal ph acido e da alpha-espansina

Measuring Plant Cell Wall Extension (Creep) Induced by Acidic pH and by Alpha-Expansin

Crescente pareti delle cellule vegetali tipicamente mostrano una proprietà conosciuta come &#39;la crescita acido&#39;, con la quale si intende che sono più estensibili a pH basso (&lt;5) 1. L&#39;ormone vegetale auxina stimola l&#39;allungamento delle cellule in rapida steli giovani e tessuti simili, almeno in parte da un acido-crescita meccanismo 2, 3. Auxina attiva una pompa H + nella membrana plasmatica, che causano l&#39;acidificazione della soluzione di parete cellulare. Acidificazione muro attiva espansine, che sono endogeni-allentamento della parete cellulare delle proteine ​​4, causando la parete cellulare di cedere alle tensioni muro creato dalla pressione di turgore delle cellule. Come risultato, la cellula comincia a ingrandire rapidamente. Questo fenomeno di &#39;crescita acido&#39; è facilmente misurata in campioni di cellule isolate (non vivente) muro. La capacità delle pareti delle cellule di sottoporsi acido-indotta estensione non è semplicemente il risultato della sistemazione strutturale di polisaccaridi della parete della cella (pectine ad esempio), ma dipende dall&#39;attività di espansine 5. Espansine non hanno conosciuto alcuna attività enzimatica e l&#39;unico modo di saggiare per l&#39;attività espansina è quello di misurare la loro induzione di estensione della parete cellulare. Questa relazione Dettagli video le fonti e tecniche di preparazione per l&#39;ottenimento di Pareti di materiali idonei per saggi espansina e continua a mostrare acido-indotta estensione e espansina indotta estensione dei campioni parete preparata da hypocotyls cetriolo in crescita. Per ottenere campioni idonei parete cellulare, cetriolo piantine sono cresciute al buio, la hypocotyls sono tagliati e congelati a -80 ° C. Hypocotyls congelati sono abrase, appiattito, e poi bloccato a tensione costante in una cuvetta speciale per misure estensimetro. Per misurare l&#39;acido-indotta estensione, le pareti sono inizialmente tamponato a pH neutro, con conseguente bassa attività di espansine che sono componenti delle pareti cellulari native. Al cambio di buffer a pH acido, espansine sono attivate e le pareti cellulari estendere rapidamente. Abbiamo anche mostrato attività espansina in un test di ricostituzione. Per questa parte, usiamo un breve trattamento termico a denaturare le espansine nativo nei campioni di parete cellulare. Queste pareti cellulari inattivato non si estendono anche in tampone acido, ma aggiunta di espansine alle pareti delle cellule ristabilisce rapidamente la loro capacità di estendere.

Dimostriamo l&#39;uso di un estensimetro a forza costante per misurare la estensione a lungo termine (creep) di campioni di cellule vegetali muro indotta da buffer acidi e proteine ​​espansina.

Cella di misura Estensione impianto a parete (Creep), indotta dal pH acido e da Alpha-espansina

Le pareti cellulari delle piante in crescita mostrano caratteristicamente una proprietà nota come "crescita acida", con la quale intendiamo che esse sono più estensibili a pH bassi (< 5) 1. Il...

Qui dimostriamo metodi per misurare l'estensione e l'attività mediante la geometria dell'estensibilità della parete cellulare. Campioni adeguati di parete possono essere preparati dai tessuti ipocotiledoni di semi di cetriolo E TATati per misurare l'estensione indotta da acido, che è catalizzata da espansine endogene legate alle pareti cellulari native. Fissiamo le pareti con un tampone neutro e un estensimetro; al passaggio a pH acido, le espansine vengono attivate e le pareti cellulari si estendono rapidamente.Mostriamo inoltre un saggio di ricostruzione dell'espansina. Per questa parte, utilizziamo un breve trattamento termico per denaturare le espansine endogene. Le pareti cellulari inattivate termicamente non si allungano nemmeno in un tampone acido, ma l'aggiunta rapida di espansina ripristina immediatamente l'estensibilità della parete.Ciao, sono Dan De Roko del laboratorio del Dott. Daniel Cosgrove del dipartimento di biologia della Penn State University. Oggi vi mostreremo un procedimento per misurare l'estensione irreversibile o il rilassamento di pareti cellulari vegetali isolate. Cominciamo.Nella nostra esperienza, i giovani avocado hypo provenienti da piantine di cetriolo etiolate costituiscono una fonte pratica di materiale della parete cellulare. Per questi esperimenti, i semi di cetriolo vengono seminati su carta bagnata in una scatola a prova di luce, che viene mantenuta in un armadio al buio e in una stanza a temperatura costante regolata a 26 gradi Celsius. Anche temperature comprese tra 22 e 30 gradi Celsius sono adatte, ma è importante notare che la temperatura determinerà la velocità di crescita.Più alta è la temperatura, più velocemente si svilupperanno le piantine. È fondamentale mantenere un ambiente di crescita al buio, poiché anche piccole quantità di luce influenzano sia la velocità di sviluppo delle piantine sia le proprietà della parete cellulare che misuriamo con questa tecnica. Al terzo giorno, è possibile dare un'occhiata all'interno della scatola utilizzando una luce fioca filtrata in verde per verificare lo sviluppo delle piantine.Di solito, osservando nella scatola al terzo o quarto giorno, si trovano delle piantine cresciute fino a una lunghezza di circa cinque centimetri, che è generalmente la dimensione utilizzata nei nostri esperimenti. Queste piantine possono essere congelate a meno 80 gradi Celsius prima dell'uso. Per iniziare la preparazione dei campioni di parete cellulare, piccoli gruppi di otto-dieci piantine congelate vengono trasferiti dal congelatore a un contenitore isolante contenente un blocco refrigerato a meno 80 gradi Celsius. Utilizzando una pasta densa di polvere di carborundum per ricoprire pollice e indice, il rivestimento cuticolare dell'ipocotile viene rimosso asciugando ripetutamente l'ipocotile tra pollice e indice.Nel corso di questa tecnica, è fondamentale utilizzare la giusta quantità di pressione per garantire la permeazione della cuticola senza danneggiare lo strato epidermico. È inoltre necessario lavorare rapidamente, poiché, man mano che l'ipocotilo congelato si scongela, diventa molle e difficile da maneggiare, rendendo complessa la rimozione della maggior parte del carum aderente. L'ipocotilo abraso viene immerso e quindi conservato in acqua ghiacciata mentre si preparano gli altri ipocotili.Dopo la rimozione della cuticola su tutti i semenzali, questi vengono tagliati alla lunghezza desiderata, solitamente 1,2 centimetri, utilizzando una nuova lametta da rasoio monouso, quindi allineati su un vetrino dopo l'allineamento. Un secondo vetrino viene posizionato sopra il gruppo di otto-dieci campioni e un peso compreso tra 400 e 500 grammi viene appoggiato sopra il vetrino per cinque minuti. Solitamente utilizziamo un becher riempito con una quantità adeguata di acqua.Il peso del becher appiattirà le pareti cellulari per rimuovere la linfa cellulare e facilitare il bloccaggio. A seconda dell'esperimento, gli ipo coddles possono essere inattivati mediante un breve trattamento termico in questo momento. Per fare ciò, fissiamo insieme le lamelle di vetro con un paio di elastici, poniamo l'assemblaggio in un contenitore con cento millilitri di acqua deionizzata a temperatura ambiente e lo collochiamo in un forno a microonde alla potenza massima con il nostro forno a microonde.L'acqua inizia a bollire dopo circa 50 secondi e interrompiamo il forno a microonde 15 secondi dopo l'inizio dell'ebollizione; l'acqua calda viene rapidamente versata e sostituita con acqua fredda per arrestare la denaturazione. Un riscaldamento ottimale farà sì che i campioni non mostrino alcuna reattività al pH basso, senza al contempo diventare deboli e rompersi facilmente. I campioni della parete vengono ora fissati in un estensimetro a forza costante X.Questo è un dispositivo costruito su misura che consiste in un cubito in plexiglass per contenere l'estremità basale del campione di parete e una morsa mobile collegata all'estremità APIC del campione. La morsa mobile è montata all'estremità di un'asta che attraversa le bobine aperte di un sensore di posizione, un LVDT (trasduttore differenziale variabile lineare), che rileva elettronicamente la posizione di un piccolo cilindro metallico o nucleo collegato all'asta.L'estremità superiore della bacchetta è collegata a una leva con un contrappeso regolabile. Questa leva esercita una forza regolabile verso l'alto sul campione di parete cellulare. La forza viene regolata aggiungendo o rimuovendo pesi metallici calibrati all'estremità opposta della leva per preparare i campioni alla misurazione dell'espansione della parete cellulare.La parte basale del campione di ipocotile viene afferrata con pinzette fini, posizionando circa due-tre millimetri dell'estremità apicale tra le ganasce aperte della pinza mobile. Questa pinza è una pinza a coccodrillo con molla. Le ganasce metalliche sono rivestite in plastica per evitare il contatto diretto tra la superficie metallica e la soluzione tampone o il campione della parete.Nella nostra esperienza, gli ioni metallici possono fuoriuscire dalla pinza e inibire la capacità della parete di allungarsi, quindi manteniamo il metallo coperto. Tenendo l'insieme della pinza mobile in una mano, l'estremità basale del campione di parete viene ora posizionata tra i due pezzi incernierati del vete in plexiglass, e i pezzi del vete vengono avvicinati e avvitati saldamente, bloccando così l'estremità inferiore del campione di parete all'interno del vete. L'insieme della pinza mobile viene ora rilasciato delicatamente, consentendo il trasferimento dell'intera forza dei contrappesi al campione di parete. Utilizziamo abitualmente un contrappeso totale di 20 grammi per campioni di parete preparati da cetriolo, ipocotile.Altri materiali per le pareti o esperimenti potrebbero richiedere pesi diversi. Il qve viene riempito con tampone e la posizione del QVE viene spostata verso l'alto o verso il basso mediante una vite di regolazione, in modo da portare la pinza mobile all'estremit&agrave; inferiore del campo di misura del LVDT. Il nostro LVDT &egrave; collegato a un'unit&agrave; di acquisizione dati del computer.Abbiamo otto gruppi di trasduttori differenziali variabili lineari (LVDT) collegati in parallelo a un singolo computer, il che ci consente di eseguire contemporaneamente otto campioni di parete. Il computer registra la posizione di ciascun gruppo LVDT una volta ogni 30 secondi per la misurazione dell'allungamento indotto dall'acido. Partiamo da campioni di parete nativi non inattivati mediante calore, ai quali viene aggiunto un tampone neutro nel vetrino.I campioni di parete si allungano per alcuni minuti in risposta alla tensione applicata, ma l'allungamento decade rapidamente a un tasso basso. Dopo alcuni minuti, il nostro computer ci permette di monitorare o la variazione di lunghezza del campione, ovvero la variazione di posizione della pinza mobile a partire dall'inizio dell'esperimento, oppure la derivata temporale della posizione. In altre parole, la velocità di allungamento.La velocità di estensione si stabilizza su un valore basso nel tempo. Dopo circa 20 minuti, il tampone neutro viene rimosso utilizzando un tubo metallico sottile realizzato a partire da un ago ipodermico di grosso calibro, collegato a una pompa a vuoto. Per rimuovere rapidamente il tampone.L'allestimento permette di rimuovere il tampone con il minimo disturbo della parete o del montaggio meccanico. Successivamente si aggiunge il tampone acido, a volte con uno o due scambi rapidi per assicurare lo scambio completo con il tampone acido. A questo punto ci si ritira e si osserva la risposta della parete.Tipicamente, siamo in grado di rilevare la maggiore velocità di allungamento in pochi minuti. Dopo 60 minuti, di solito disponiamo di informazioni sufficienti per valutare la risposta di allungamento, anche se in alcuni casi le misurazioni possono protrarsi per periodi più lunghi. Per la misurazione dell'allungamento della parete cellulare indotto dall'espansione, iniziamo con campioni di parete inattivati termicamente e aggiungiamo un tampone acido al qve.Come nel primo esperimento, la velocità di estensione della parete cellulare si stabilizza gradualmente su un valore basso a causa della mancanza di espansina funzionale. Dopo circa 20 minuti di espansione, la proteina viene aggiunta al Q vet mediante aggiunta di 10-20 microlitri di una soluzione di espansina nel tampone presente nel Q vet. Poiché la cuticola è stata rimossa, l'espansina penetra rapidamente nel campione di parete cellulare e, entro pochi minuti, si osserva un aumento della velocità di estensione.Questa risposta di allungamento può protrarsi per un'ora o più. Abbiamo appena mostrato come misurare l'allungamento della parete cellulare dovuto alle espansine endogene e all'aggiunta di espansine. Durante l'esecuzione di questa procedura, è importante ricordare di mantenere al minimo le vibrazioni meccaniche e le fluttuazioni di temperatura, poiché genererebbero rumore nelle curve di allungamento.Ecco fatto. Grazie per aver guardato e buona fortuna con i vostri saggi di estensione.

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Biologia

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Mapping basato AFM delle proprietà elastiche delle pareti cellulari: al Tissue, cellulare, e le risoluzioni subcellulari

Segnalazione Ca 2 + regola diversi processi biologici nelle piante. Qui vi presentiamo approcci per il monitoraggio di stress abiotico indotto Ca spaziale e temporale 2+ segnali nelle cellule e tessuti utilizzando le geneticamente codificati Ca 2 + indicatori aequorina o Case12 Arabidopsis.

Misurazione spaziale e temporale Ca 2 + Segnali in Arabidopsis Piante

Un nuovo protocollo di imaging è stato sviluppato utilizzando un attuatore meccanico motorizzato personalizzato per consentire la misurazione delle risposte in tempo reale alla deformazione meccanica nelle cellule vive. Rilevante per la meccanobiologia, il sistema può applicare deformazioni fino al 20% consentendo l'imaging quasi in tempo reale con microscopia confocale o a forza atomica.

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Caratterizzazione delle proprietà meccaniche della parete cellulare primaria in organi vegetali viventi mediante microscopia a forza atomica

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Questo rapporto descrive i metodi fondamentali utilizzati per coltivare e manipolare sperimentalmente l'alga streptofita unicellulare, Penium margaritaceum. Fornisce inoltre protocolli fondamentali di imaging basato sulla microscopia, tra cui la marcatura di cellule vive con anticorpi monoclonali e altre sonde fluorescenti e la microscopia elettronica a scansione.

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Impara a misurare l'estensione delle pareti cellulari vegetali con un estensometro a forza costante. Questo metodo utilizza ipocotili di cetriolo per studiare l'attività delle espansine e il ruolo del pH acido nella crescita delle piante.

Cella di misura Estensione impianto a parete (Creep), indotta dal pH acido e da Alpha-espansina

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