Creazione di Murine aneurismi dell'aorta addominale Sperimentale con elastasi

Questa procedura chirurgica utilizzata per creare un aneurisma dell'aorta addominale inizia con un'incisione addominale sulla linea mediana. Il contenuto addominale viene spostato di lato e tutti i rami aortici vengono legati. Le porzioni prossimale e distale dell'aorta sono legate.

Il cuore viene perforato con un ago e una profusione di elastasi viene erogata attraverso un tubo di polietilene conico a caldo. Quando la profusione è completa, l'autotomia AOR viene chiusa. Le legature vengono rimosse, l'aorta si riempie di sangue e la cavità addominale viene chiusa.

Il topo viene quindi lasciato riprendersi e l'aneurisma sarà completamente dilatato in 14 giorni. Ciao, sono Julian Asma del laboratorio di Cellule Fetali presso il Dipartimento di Medicina Cardiovascolare dell'Università di Stanford. Oggi ti mostrerò la procedura per iniettare un nuovo aneurisma dell'aorta addominale sperimentale con elastasi.

Usiamo questa procedura nel tuo laboratorio per studiare le EP dell'arte addominale S.So iniziamo. Per iniziare i tuoi esperimenti, seleziona un topo di interesse, ad esempio un mouse C 57 black six, e anestetizzalo con isofluoro inalato fino a quando il topo non perde conoscenza. Si prega di essere consapevoli del fatto che diversi ceppi di topi variano nel tasso di crescita dell'aneurisma.

Rimuovere il topo anestetizzato dalla camera in una stazione di preparazione adeguatamente illuminata. Rasare il pelo dall'addome dall'estremità dell'osso cosale alla radice delle gambe. Usa una crema depilatoria per rimuovere i peli in eccesso.

Strofinare la pelle nuda con alcool al 70% fino a quando tutti i peli non si sono staccati dalla regione rasata. Quindi strofinare la pelle almeno tre volte con Betadine, tamponando con alcool tra uno scrub e l'altro. Ora, posiziona il topo supino sul campo operatorio per mantenere il topo incosciente.

Durante l'intervento chirurgico, posizionare un tubo sul naso che eroga isofluoro alla stessa velocità di flusso utilizzata per indurre lo stato di incoscienza. L'elastasi viene tenuta in ghiaccio ed estratta in una siringa. La siringa viene quindi bloccata e posizionata accanto al campo operatorio e il catetere viene attaccato.

È importante che la punta del catetere rimanga sterile, il che viene fatto posizionando la punta in una fiala sterile. Prima di aprire il mouse, assicurarsi che venga utilizzata una tecnica sterile. Inizia indossando guanti sterili.

Gli strumenti chirurgici, le forbici, i portaaghi e le pinze devono essere igienizzati prima dell'intervento. Prenditi un momento per essere consapevole dei tuoi preparati e cerca di rimediare a qualsiasi altra potenziale fonte di contaminazione durante l'intervento chirurgico. Se la tecnica sterile si interrompe durante la procedura, sterilizzare nuovamente lo strumento in uno sterilizzatore a microsfere caldo.

Una volta preparato tutto, iniziare l'intervento con una lunga incisione addominale sulla linea mediana all'interno della cavità addominale. Spostare il contenuto addominale nello spazio addominale libero o ritrarlo al di fuori dell'addome con una garza sterile per esporre l'aorta addominale. Ora usa una pinza per isolare accuratamente l'aorta addominale dal livello della vena renale sinistra alla biforcazione.

Nel caso mostrato, c'è un singolo ramo che si trova sopra il sito in cui leghiamo l'aorta e quindi non ha bisogno di essere legato. Se ci sono rami aortici tra i siti delle legature dell'aorta distale e prossimale, legare i rami entro un centimetro dalla biforcazione con 10 suture aut nelle porzioni prossimali e distali della posizione dell'aorta. Legature temporanee in seta 6.0 per fermare il flusso sanguigno.

Ora esegui un'atomia alla biforcazione. Inizia perforando la biforcazione con un ago calibro 30. I tubi in polietilene conico a caldo possono essere introdotti attraverso l'autotomia AOR e fissati con un nodo.

Utilizzare la pinza per inserire con cura e delicatezza il tubo nell'aorta. Fare attenzione a non denudare lo strato endoteliale con una pressione di 100 millilitri. Il mercurio perfuse l'aorta con l'elastasi da una sacca salina appesa all'altezza di 136 centimetri.

Assicurarsi che non ci sia aria nel tubo, altrimenti la pressione non sarà esatta. La soluzione salina contiene 4,5 unità per millilitro. Elastasi pancreatica suina di tipo uno e dovrebbe riempire l'aorta in 5-15 minuti.

Durante la perfusione, l'aorta si dilata tipicamente a circa il 140% del suo diametro originale. Al termine, rimuovere la perfusione e chiudere l'autotomia aorica con una sutura da 10 aught per evitare la costrizione. Dopo che l'atomia è stata chiusa, anche la legatura distale deve essere rimossa.

Se c'è poco o nessun sanguinamento dall'atomia riparata, la legatura prossimale viene rimossa. Se c'è un punto di sanguinamento, ulteriori legature temporanee 6.0 ammollano nelle porzioni prossimale e distale dell'aorta e aggiungere un'altra sutura per chiudere completamente l'autotomia AOR. L'aorta espansa si riempirà di sangue subito dopo la rimozione della legatura prossimale.

Una volta terminata la procedura all'aorta, riportare l'intestino nell'addome. Se è stato retratto, l'intestino scivolerà dentro come una grande unità e non c'è stato bisogno di preoccuparsi della loro geometria. Con tutti gli organi in posizione, la ferita esterna può ora essere chiusa in due strati con sei suture aut in nylon e polipropilene.

Ora fornisci al topo un anestetico locale come una goccia dello 0,25% di boop di ICAN per centimetro di incisione. Somministrare anche una dose dell'antinfiammatorio Carin a cinque milligrammi per chilogrammo mediante iniezione sottocutanea. L'intervento chirurgico è ora completo e il topo deve essere posizionato su un'area calda dove gli sia permesso di tornare alla coscienza.

Il recupero di solito avviene entro 15 minuti. Quando il topo riprende conoscenza, viene riportato in una gabbia solitaria e monitorato periodicamente durante il suo recupero. Dopo la procedura, l'aorta si dilata tipicamente a circa il 140-160% del suo diametro originale.

Questa dilatazione iniziale si osserva con la stabilizzazione fino al settimo giorno. La dilatazione secondaria rapida si verifica tra il settimo e il quattordicesimo giorno. Al giorno 14, l'aneurisma può essere osservato nell'aorta infrarenale.

Ti ho appena mostrato come eliminare l'aneurisma addominale con l'elastasi nei topi. Quando si esegue questa procedura, è importante evitare di creare coaguli di sangue all'interno dell'ata. Quindi questo è tutto.

Grazie per aver guardato e buona fortuna con il tuo esperimento.