Name: Cellule preparazione del blocco da campioni Citologia con predominanza di cellule sparse individualmente (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Scopri il metodo di Shidham per preparare blocchi cellulari da campioni citologici con cellule sparse individualmente. La tecnica utilizza il marcatore AV e HistoGel per migliorare l'immunoprofilo e le colorazioni speciali.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Gli autori ringraziano Chris Chartrand, HT (ASCP) per dimostrare la sezione di taglio del blocco cella con indicatore AV.

Introduzione: Questo è un video che descrive il metodo Shidham per la preparazione del blocco delle cellule da liquido a base di citologia (LBC) campione usando HistoGelTM (Thermo Scientific) (HG). Rispetto ad altri approcci casuali, i seguenti sono le due caratteristiche fondamentali di questo protocollo per la preparazione di blocchi di celle da campioni relativamente ipocellulare singolarmente con cellule sparse sciolti (1-5). <ol><li> Questo protocollo prevede passi per concentrare le cellule lungo il piano parallelo alla superficie di taglio del blocco di celle. </li><li> Esso include anche un faro, quali l&#39;inserimento oscuro della AV-marker (Figura 1b), che serve due delle seguenti finalità: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Per visualizzare il livello al quale si concentrano le cellule. L&#39;area del blocco di celle con le cellule di interesse ora possono essere visualizzate dal histotechnologist quando il faro di colore scuro è esposto durante il taglio. Questa capacità di monitorare impedirvi dal taglio attraverso il livello con la maggior parte delle cellule, o non tagliare troppo superficiale nel livello con più alta concentrazione di cellule del campione. </li><li> Per servire come punto di riferimento localizzatore nella sezione seriale blocco di celle su diverse diapositive. Questo punto di riferimento agisce come un faro per aiutare a localizzare le cellule o gruppi di cellule per la valutazione di un modello di immunoreattività coordinare con l&#39;approccio SCIP (6,7). </li></ol></li></ol> PROTOCOLLO (Figura 2) Preparazione del campione. <ol><li> Trasferire il residuo LBC campione citologia cervicale ad un tubo di vetro piano inferiore (15mm x 45mm di diametro) (Figura 2.1 a 2.4). Posizionare il tubo di vetro in un tubo di plastica più grandi carrier (28 x 85 millimetri) e centrifugare. Rimuovere il tubo fondo di vetro dal tubo portante e versare il sopranatante. </li><li> Il tubo di vetro viene poi ridotta (per evitare la fuoriuscita di acqua di riscaldamento nel passaggio successivo) e rimesso all&#39;interno di un più ampio piatto tubo di plastica vettore fondo </li><li> Il tubo di plastica vettore contenente il tubo di vetro sono state limitate, posto in una centrifuga (con coppe girevole e non tazze angolo fisso in modo che le cellule cadono perpendicolarmente al fondo piatto del tubo di vetro), e mi sono girato a 1805 g (3000 rpm, rotore raggio-17cm) per cinque minuti (Figura 2.5). </li><li> I tubi vengono poi rimossi verticalmente dalla centrifuga e il tubo di vetro più piccolo viene rimosso con una pinza dal tubo portante più grandi di plastica senza disturbare il pellet sedimentato con le cellule. </li><li> Il tubo di vetro con il campione è non ridotti e il sopranatante è versata via facendo attenzione a non disturbare lo strato di cellule piatte sedimento sul fondo (Figura 2.6). </li></ol> Inserimento delle coordinate di riferimento AV-marker e l&#39;aggiunta di gel <ol><li> Un faro scuro AV-marker (circa 2 mm x 2 mm di diametro, superficie piana, frammento di colore scuro, materiale sezionabili) (Figura 3) si aggiunge come indicatore di percorso per il tubo di vetro (Figura 2.7). </li><li> Liquefare una aliquota di HG dalla fusione in forno a microonde per 10 secondi a media potenza. </li><li> Aggiungere 0,5 ml di HG fuso al mix tubo, con il sedimento in fretta, e ricapitolare (Figura 2.8) (Procedere alla fase successiva in fretta senza che il HG per iniziare la solidificazione). </li><li> Aggiungere circa 2,5 ml di caldo (45 ° C) per il tubo di plastica vettore (Figura 2.9). </li><li> Il tubo più piccolo di vetro con tappo viene inserito all&#39;interno del tubo di plastica con acqua calda. (Questo passaggio è necessario per mantenere il HG dalla solidificazione durante le fasi successive) (Figura 2.9). </li><li> Il tubo di plastica vettore è posizionato nella centrifuga (con coppe girevole e non tazze angolo fisso in modo che le cellule cadono perpendicolarmente al fondo piatto del tubo di vetro), e mi sono girato a 1805 g (3000 rpm, raggio di 17 centimetri-rotore) per cinque minuti. Lo scopo di questa fase di centrifugazione è quello di spingere l&#39;AV-marker e di concentrare le cellule in uno strato più vicino alla superficie di taglio della finale blocco di celle paraffina (Figura 1d). </li><li> I tubi vengono poi rimossi con delicatezza e verticalmente dalla centrifuga facendo attenzione a non disturbare il sottile strato sedimentato con le cellule del campione in basso. </li><li> Il tubo di plastica più grande è non ridotti e il tubo di vetro più piccolo viene rimosso verticalmente da una pinza senza disturbare lo strato di sedimento di cellule campione. </li><li> Il piccolo tubo di vetro viene refrigerato in posizione verticale per 15 minuti per raffreddare e solidificare la HG (Figura 2.11). </li></ol> La rimozione del blocco di celle come un pulsante di gel con il campione per l&#39;elaborazione finale <ol><li> Il disco HG solidificato, con lo strato di concentrato / sedimento del campione in basso è staccata dal tubo di vetro piano inferiore da spruzzando formalina al 10% attraverso un ago 23 gauge con la siringa (Figura 2.12). </li><li> L&#39;ago viene inserito lungo il lato del tubo alla periferia del disco solidificato HG con il campione (Figura 2.12). </li><li> Il needle viene ruotato lungo il lato del tubo mentre formalina sta lentamente spinto attraverso la siringa. Il risultato è la separazione del pulsante HG insieme a faro di colore scuro AV-marker e il campione concentrato in essa dal fondo piatto del tubo di vetro (Figura 2.12). </li><li> Il blocco di celle (tasto gel con le cellule del campione) è poi messo in una cassetta etichettati e presentati per la lavorazione dei tessuti per preparare blocchi di celle paraffina (Figura 2.13). </li></ol> Incorporare e il taglio del campione <ol><li> Il disco è incluso in paraffina con il lato oscuro marcatore faro giù come superficie di taglio (Figura 1). </li><li> Il blocco viene sezionato fino a quando il colore scuro AV-marker come un faro è esposta e ben visibile. </li><li> Da tre a quattro sezioni micron vengono tagliate da questo livello che dovrebbe contenere la maggior parte delle cellule singolarmente disperse dal campione. </li><li> Le sezioni sono raccolte sul vetrino per la colorazione ulteriormente, immunoistochimica, o altri test come indicato. I protocolli per questi test tra cui il tipo di diapositive da utilizzare per il montaggio delle sezioni possono variare. Generalmente per immunostaining, vetrini rivestiti sono utilizzati per prevenire la perdita di galleggiamento e sezioni dal diapositive durante le fasi immunocolorazione. </li></ol> Abbreviazioni utilizzate (in ordine alfabetico): CISH, cromogenico in situ test di ibridazione, PESCE, fluorescente in situ test di ibridazione; FFPE, fissate in formalina e inclusi in paraffina, FNA, agoaspirato, HG, HistoGel ™ (Thermo Scientific); LBC, citologia in fase liquida; reazione a catena della polimerasi PCR; <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig1.jpg" alt="figura 1" /> Figura 1. La struttura del blocco di celle preparato dal protocollo di Shidham. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig2.jpg" alt="figura 2" /> Figura 2. La sintesi delle diverse fasi per la preparazione di blocco di celle da un campione LBC dal protocollo di Shidham. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig3.jpg" alt="figura 3" /> Figura 3. Preparazione di AV-marker da bucce di banana. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig4.jpg" alt="figura 4" /> Figura 4. Confronto di blocchi di celle e sezioni con e senza AV-marker. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig5.jpg" alt="figura 5" /> Figura 5. Confronto di cellularità sezioni di blocco di celle con e senza AV-marker.

<ol><li>Shidham, V. B., Epple, J. Chapter 14, Appendix I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShidham%2C+VB+%22Cytopathologic+Diagnosis+of+Serous+Fluids%22">Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids</a>. Shidham, V. B., Atkinson, B. F. , Elsevier. Forthcoming.</li>
<li>Varsegi, G., D'Amore, K., Shidham, V. p16INK4a Immunocytochemistry as an Adjunct to Cervical Cytology - Potential Reflex Testing on Specially Prepared Cellblocks from Residual Liquid Based Cytology (LBC) Specimens. Modern Pathology 22: 98th Annual Meeting of United States and Canadian Academy of Pathology. 2009 Mar 7-13, Boston, Ma, , Abstract 424 97a-97a (2009).</li>
<li>Nigro, K., Tynski, Z., Wasman, J., Abdul-Karim, F., Wang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+cell+block+preparation+methods+for+nongynecologic+ThinPrep+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Cytopathol%22%5BJournal%5D)">Comparison of cell block preparation methods for nongynecologic ThinPrep specimens.</a> Diagn Cytopathol. 35, 640-643 (2007).</li>
<li>Saleh, H. A., Hammoud, J., Zakaria, R., Khan, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Thin-Prep+and+cell+block+preparation+for+the+evaluation+of+Thyroid+epithelial+lesions+on+fine+needle+aspiration+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22CytoJournal%22%5BJournal%5D)">Comparison of Thin-Prep and cell block preparation for the evaluation of Thyroid epithelial lesions on fine needle aspiration biopsy.</a> CytoJournal. 5, 3-3 (2008).</li>
<li>Kyroudi, A., Paefthimiou, M., Symiakaki, H., Mentzelopoulou, P., Voulgaris, Z., Karakitsos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+diagnostic+accuracy+with+a+cell+block+preparation+from+thin-layer+endometrial+cytology%3A+a+feasibility+study%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cytol%22%5BJournal%5D)">Increasing diagnostic accuracy with a cell block preparation from thin-layer endometrial cytology: a feasibility study.</a> Acta Cytol. 50, 63-69 (2006).</li>
<li>Atkinson, B. F. Chapter 5: Immunocytochemistry of effusion fluids: introduction to SCIP approach (Chapter 5. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAtkinson%2C+BF+%22Cytopathologic+Diagnosis+of+Serous+Fluids%22">Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids</a>. Shidham, V. B., Atkinson, B. F. , Elsevier. (2007).</li>
<li>Shidham, V. B. Chapter 15, Appendix II: Immunocytochemistry of effusions processing and commonly used immunomarkers. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShidham%2C+VB+%22Cytopathologic+Diagnosis+of+Serous+Fluids%22">Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids</a>. Shidham, V. B., Atkinson, B. F. , Elsevier. (2007).</li>
</ol>

Blocchi di cellule rappresentano un prezioso strumento per la valutazione dei campioni citologici vari (1). Ancora più importante, oltre ai particolari architettonici del campione, blocchi di celle permettere una valutazione degli studi di accessori, quali immunocitochimica, fluorescente / cromogenico in prove di ibridazione in situ (FISH / CISH) e in situ PCR. Una varietà di metodi per la preparazione del blocco di celle sono descritti. Tuttavia, la maggior parte di questi sono adatti per i non-ginecologica campioni citologici che contengono le cellule relativamente molti e con microfragments tissutale, come nel aspirati FNA e alcuni fluidi sierosi come effusioni (1,3,4,5). Perché blocchi di celle principalmente offrono l&#39;opportunità per la valutazione immunocitochimica, al loro trattamento dovrebbe preferibilmente essere simile a quello della paraffina fissati in formalina-embedded (FFPE) tessuti. In definitiva i risultati ottenuti dopo la valutazione immunocitochimica delle sezioni blocco di celle vengono confrontati con quelli con la letteratura pubblicata effettuato prevalentemente su sezioni di tessuto FFPE. Qualsiasi modifica nel protocollo potenzialmente compromesso e annullare la validità dei risultati ottenuti sui blocchi di celle trattati attraverso fissativi diversi e sequenze di reagenti diversi da quelli utilizzati per FFPE di routine. Alcune tecniche commerciali può avere l&#39;inconveniente di elaborazione attraverso un protocollo di esposizione ad altri fissativo-reagente esposizione. Vari metodi di preparazione delle cellule di blocco sono disponibili per i campioni con una quantità significativa di sedimenti e frammenti di tessuto. Principalmente, i sedimenti concentrato sono supportate da alcuni gel o principio della coagulazione. Il pulsante maneggevole è poi inclusi in paraffina dopo l&#39;elaborazione, come i campioni di patologia chirurgica / biopsie. I gel utilizzati includono gelatina, agar, fibrinogeno / plasma-trombina, e altri gel commerciali come HG. I metodi di concentrazione varia da cubettatura semplice dei sedimenti per centrifugazione della concentrazione di cellule lungo i vari tipi di membrane. Gli esempi includono: Milipore, collodin (celloidina) borse o raschiare le cellule dalla prelievi citologici su vetrini (1). Abbiamo anche valutato una serie di gel provando diverse combinazioni di agar e gelatina. Nessuna delle combinazioni raggiunto la consistenza sufficiente all&#39;azienda di ottenere un disco facilmente manovrabile di gel solidificato con cellule incorporato dal campione in un unico pezzo. HG ha dimostrato coerenza appropriato e nella nostra esperienza i risultati immunostaining su sezioni di cellule HG blocco sono stati eccellenti. Liquido a base di citologia (LBC) i campioni per la citologia cervico-vaginali sono generalmente meno cellulari rispetto ai non-ginecologiche i campioni di cui sopra. Inoltre, i campioni LBC ginecologico prevalentemente contenere singoli sparsi cellule di esfoliazione superficiale di mucosa cervico-vaginali. A causa di questo, cellularità appropriata nelle sezioni bloccare la cella non può essere raggiunto senza un approccio particolare. Poiché questi singolarmente disperse componenti cellulari nel blocco non può essere visto dal histotechnologist durante il taglio sezione, il livello al quale le cellule iniziano ad apparire in sezioni non può essere apprezzato e può perdere, sia per il taglio oltre il livello con la maggior parte delle cellule o no taglio abbastanza in profondità nel livello con più alta concentrazione di cellule del campione (Figura 4). Protocollo Shidham affronta entrambi questi problemi utilizzando HG come incorporare attrezzature di laboratorio di media e convenzionale (2) (Figura 2). Questo protocollo prevede le seguenti due caratteristiche principali (Figura 1): <ol><li> Concentrazione e l&#39;allineamento dei singolarmente cellule sparse in un piano stretto adiacente e parallela alla superficie di taglio del blocco di celle (Figura 5). </li><li> L&#39;inclusione di un faro simil-AV-scuro come un cartello indicatore. Questo è fondamentale per ottenere le seguenti caratteristiche: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Identificare e monitorare il livello al quale si concentrano le cellule nel blocco celle. L&#39;esposizione del cartello di colore scuro mette in evidenza il livello al quale ci si aspetta la maggior parte delle cellule singolarmente sparsi nel blocco delle celle di trovarsi (Figura 4). In questo modo il sovrataglio (taglio oltre il livello con la maggior parte delle cellule) o inferiori (non tagliare abbastanza in profondità nel livello con più alta concentrazione di cellule campione) per il blocco delle cellule e permettono la selezione delle sezioni dal livello nel blocco cella corrispondente con la massima concentrazione delle cellule. </li><li> Il cartello di colore scuro in sezioni serve anche come punto di riferimento di indagine e di identificare esattamente le stesse cellule in diverse sezioni di serie del blocco di celle su diapositive diverse (Figura 4). Questo è fondamentale, mentre interpretare e valutare le proprietà coordinare immunoprofile tali cellule particolare l&#39;approccio SCIP a seguire le stesse cellule in diverse sezioni (6,7). </li></ol></li></ol> Sebbene our protocollo è standardizzato e riportato per i campioni di liquido a base di citologia cervicale, ma può anche essere utilizzata per migliorare resa diagnostica di molti altri non-ginecologiche esemplari, come i fluidi effusione, FNA, brushings, contenuti cisti ecc Inoltre il marcatore AV faciliterebbe una migliore applicazione di approccio SCIP durante la valutazione immunoistochimica di sezioni blocco di celle di questi esemplari. Il mezzo di inclusione può essere sostituito da altri reagenti con le opportune modifiche a passi rilevanti. HG può essere sostituito da plasma (fibrinogeno) da gelificato con trombina a temperatura ambiente (1).

cellule preparazione del blocco da campioni citologia con predominanza di cellule sparse individualmente

Cell Block Preparation from Cytology Specimen with Predominance of Individually Scattered Cells

Questo video dimostra metodo Shidham per la preparazione di blocchi di celle da campioni di liquido a base di citologia cervico-vaginali contenenti cellule individuali e gruppi sparsi a piccole cellule. Questa tecnica utilizza HistoGel (Thermo Scientific) con attrezzature di laboratorio convenzionali. L&#39;uso di sezioni di blocco cellulare è uno strumento prezioso accessorio per la valutazione della non-ginecologiche citologia. Esse permettono di studiare citopatologo ulteriori dettagli morfologici campione compresa l&#39;architettura della lesione. Più importante, consentono per la valutazione degli studi ancillari, quali immunocitochimica, in prove di ibridazione in situ (FISH / CISH) e in situ di reazione a catena della polimerasi (PCR). Tradizionali tecniche di preparazione delle cellule blocco sono stati per lo più applicate ai vettori non ginecologica campioni citologici, di solito per effusioni liquidi corporei e aspirazione con ago sottile biopsie. I campioni di liquido a base cervico-vaginali sono relativamente meno rispetto ai loro cellulari non-ginecologica controparti con molte singole celle sparse. Per questo motivo, cellularità adeguata all&#39;interno delle sezioni blocco di celle è difficile da raggiungere. Inoltre, il histotechnologist sezionamento del blocco non è possibile visualizzare il livello al quale le cellule sono a più alta concentrazione. Pertanto, è difficile monitorare il livello appropriato in cui le sezioni possono essere selezionati per essere trasferito al vetrini per il test. Di conseguenza, l&#39;area del blocco di celle con le cellule di interesse può mancare, sia per il taglio del passato o non taglio abbastanza profondo. Attuale protocollo per il metodo Shidham affronta questi temi. Anche se questo protocollo è standardizzato e riportato per ginecologiche campioni citologici liquido a base, può essere applicato anche ai non-ginecologiche esemplari, come i fluidi effusione, FNA, brushings, cisti ecc contenuti per una migliore qualità del materiale diagnostico nelle sezioni blocco di celle.

Shidham metodo per la preparazione di blocchi di celle con AV-marker da campioni citologici contenenti cellule individuali e gruppi sparsi a piccole cellule.

Cellule preparazione del blocco da campioni Citologia con predominanza di cellule sparse individualmente

Questo video illustra il metodo di Shidham per la preparazione di cell block da campioni di citologia cervicovaginale a base liquida contenenti singolarmente...

La preparazione del blocco cellulare inizia con il trasferimento delle cellule del campione concentrate in un tubo di vetro a fondo piatto inserito all'interno di un tubo più grande. Le cellule vengono quindi stratificate sul fondo mediante centrifugazione, prima di aggiungere il marcatore AV e l'HistoGel fuso. L'aggiunta di acqua calda al tubo di vetro portatore garantisce che l'HistoGel rimanga liquido.Una successiva centrifugazione spinge il marcatore AV attraverso il gel e concentra le cellule in uno strato vicino alla superficie di taglio del blocco cellulare. Una volta solidificato, il pulsante di gel può essere rimosso e processato per l'inclusione in paraffina. Salve, sono il dottor George Varszegi della sezione di citologia del Dipartimento di Anatomia Patologica del Medical College del Wisconsin a Milwaukee, Wisconsin.E io sono il dottor Vsam, anch'io del reparto di Citopatologia del Dipartimento di Anatomia Patologica del Medical College of Wisconsin di Milwaukee. Oggi vorremmo mostrarvi una procedura per la preparazione di blocchi cellulari da preparati citologici con una prevalenza di cellule singole e disperse. Utilizziamo questa procedura per studiare il profilo immunitario delle cellule presenti in questi aggregati di cellule singole nelle sezioni del blocco cellulare e anche per la valutazione di colorazioni speciali su tali sezioni.Iniziamo. Per iniziare questa procedura, trasferire circa 0,5 millilitri del campione, preferibilmente concentrato, in un tubo di vetro con fondo piatto lungo 45 millimetri e con un diametro di 15 millimetri. Successivamente, inserire il tubo di vetro in un tubo portatore di plastica più grande con fondo piatto e centrifugare a 1800 G per cinque minuti a temperatura ambiente.Dopo la centrifugazione, rimuovere il tubo in vetro con fondo piatto dal tubo portante in plastica e versare delicatamente il sopranatante, avendo cura di non disturbare lo strato piatto di sedimento cellulare sul fondo. Viene aggiunto alle cellule un marcatore scuro su Johnny Vena o marcatore AV come punto di riferimento.Dopo che le cellule sono state incorporate, un marcatore AV serve a identificare il livello in cui le cellule sono concentrate all'interno del blocco di paraffina. Utilizzando una pipetta speciale, aggiungere un cubo di marcatore AV con superficie piana, preparato in precedenza, alle cellule nel tubo. Iniziare ora il processo di aggiunta del gel: liquefare un'aliquote di istogel o HG sciogliendolo in un forno a microonde per 10 secondi a potenza media oppure seguendo le istruzioni del produttore.Aggiungere 0,5 millilitri dell'HG fuso al tubo contenente le cellule sedimentate. Mescolare rapidamente e richiudere il tubo. Procedere immediatamente aggiungendo circa due millilitri e mezzo di acqua calda a 45 gradi Celsius al tubo di plastica portatore.Inserire quindi il tubo CAPA contenente le cellule, il marcatore AV e l'HistoGel. Lavorare rapidamente e utilizzare acqua calda per evitare che il gel si solidifichi durante i passaggi successivi. Successivamente, centrifugare per far penetrare il marcatore AV attraverso il gel e concentrare le cellule in un unico strato, che risulterà più vicino alla superficie di taglio del blocco cellulare finale incluso in paraffina.Utilizzare dei becher a rotazione invece di quelli a angolo fisso in modo che le cellule si concentrino perpendicolarmente al fondo piatto del tubo di vetro e centrifugare a 1800 G per cinque minuti a temperatura ambiente. Al termine della centrifugazione, rimuovere delicatamente e in verticale i tubi dalla centrifuga, avendo cura di non disturbare lo strato sottile di sedimentato cellulare sul fondo. Utilizzando pinzette, rimuovere il tubo di vetro più piccolo in senso verticale senza disturbare lo strato di sedimentato delle cellule del campione.Infine, refrigerare il piccolo tubo di vetro in posizione verticale per 15 minuti per raffreddare e solidificare il gel. Trascorsi 15 minuti, procedere a rimuovere il gel contenente le cellule dal tubo di vetro per staccare il disco di HG solidificato, che contiene uno strato di campione concentrato nella parte inferiore insieme al marcatore AV di colore scuro. Utilizzare un ago da 23 gauge collegato a una siringa riempita con formalina al 10%.Iniziare inserendo l'ago lungo il lato del tubo alla periferia del disco di HG solidificato. Procedere ruotando l'ago lungo il lato del tubo, spingendo al contempo lentamente la soluzione di Formina attraverso la siringa. Osservare il distacco del pulsante di HG dal fondo piatto del tubo di vetro.Il pulsante del gel separato contenente il marcatore di riferimento AV di colore scuro e il campione concentrato è definito come completamento del blocco cellulare posizionando il blocco cellulare in una cassetta etichettata e inviandolo per la lavorazione dei tessuti al fine di preparare blocchi cellulari inclusi in paraffina. Una volta incluso il blocco cellulare, procedere al taglio del campione iniziando a tagliare il disco del blocco cellulare incluso in paraffina; montare il blocco cellulare incluso in paraffina sul microtomo ed eseguire un taglio preliminare per livellare la superficie del blocco di paraffina ed esporre il disco del blocco cellulare finché il marcatore AV di colore scuro non sia esposto e chiaramente visibile. Una volta esposto il marcatore AV di colore scuro, effettuare sezioni spesse da tre a quattro micron.Queste sezioni contengono cellule concentrate dal campione originale. Raccogliere ciascuna sezione su un vetrino per ulteriori colorazioni seguite da microscopia. Qui, a basso ingrandimento, si osserva l'impatto dell'inclusione di un marcatore a base di buccia di banana con inchiostro AV nel campione sulla cellularità di queste sezioni colorate con ematossilina ed eosina.Si può osservare nell'immagine a sinistra che questo marcatore consente il monitoraggio della profondità di taglio della sezione per raggiungere il livello con buona cellularità. Il marcatore AV permette inoltre di seguire l'orientamento di diverse cellule, in particolare sezioni, in diverse sezioni seriali su altri vetrini mediante il marcatore. In assenza di questo, la profondità di taglio non potrebbe essere monitorata.I campioni di tessuto sono stati raccolti in un piano di sezionamento con scarsa cellularità. Il grado di cellularità presente nei campioni è ancora più evidente in ingrandimento elevato; con il marcatore AV presente, la profondità di taglio può essere facilmente monitorata e si può evitare agevolmente di ottenere campioni con scarsa cellularità. È stato illustrato un metodo per preparare il blocco cellulare dal campione contenente frammenti e cellule scarsamente aggregati.Il marcatore AV scuro, che abbiamo aggiunto durante l'elaborazione del blocco cellulare, aiuta a selezionare le sezioni con la concentrazione più elevata di cellule. Permette inoltre di orientare correttamente queste sezioni sui vetrini. È importante che l'HistoGel sia in fase fusa mentre le cellule si allineano lungo il fondo in vetro del tubo, ovvero la superficie di taglio.Tuttavia, questa procedura potrebbe essere modificata per altri metodi, inclusi metodi freddi come trombina, fibrinogeno, mediante modifiche adeguate. È tutto. Grazie per aver guardato e buona fortuna con le vostre procedure.Grazie.

cell-block-preparation-from-cytology-specimen-with-predominance

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biology

Biologia

Questo protocollo descrive la preparazione di campioni tumorali di tumore inclusi in paraffina fissati in formalina che vengono utilizzati per conservare campioni di tessuto e citologia da carcinoma polmonare non a piccole cellule...

Preparazione di campioni tumorali inclusi in paraffina fissati in formalina: un protocollo per conservare campioni di tessuto e citologia dal carcinoma polmonare non a piccole cellule (NSCLC)

Questo video descrive la preparazione di frazioni subcellulari da cellule leucemiche, che è un metodo per generare frazioni cellulari e nucleari da cellule leucemiche. Le frazioni nucleari e citoplasmatiche possono essere utilizzate per ulteriori analisi a valle.

Preparazione di frazioni subcellulari da cellule leucemiche: un metodo per generare frazioni cellulari e nucleari da cellule leucemiche

I cromosomi possono essere isolate da cellule vive come linfociti o fibroblasti cutanei, e da organismi compresi gli esseri umani o topi. Queste preparazioni cromosomiche possono essere ulteriormente utilizzati per routine di G-banding e le procedure di citogenetica molecolare quali la ibridazione in situ fluorescente (FISH), ibridazione genomica comparativa (CGH), e cariotipo spettrale (SKY).

Cromosoma Preparazione da cellule in coltura

L'uso del campionamento con citospazzola per raccogliere linfociti e monociti dall'endocervice è una tecnica minimamente invasiva che fornisce campioni per l'analisi dell'immunità del tratto genitale femminile. In questo protocollo, descriviamo la raccolta di campioni di citospazzola e l'isolamento delle cellule immunitarie per i saggi di citometria a flusso.

Raccolta, isolamento e analisi citofluorimetrica di campioni endocervicali umano

Comprendere il ruolo delle cellule staminali tumorali nella recidiva del tumore e nella resistenza alle terapie è diventato un argomento di grande interesse nell'ultimo decennio. Questo articolo descrive l'isolamento e la caratterizzazione della sottopopolazione di cellule staminali tumorali da linee cellulari di carcinoma squamoso della testa e del collo (HNSCC).

Isolamento e caratterizzazione di un testa e del collo a cellule squamose Carcinoma sottopopolazione Avere Stem Cell Caratteristiche

Qui, presentiamo un protocollo per preparare campioni con un basso numero di cellule per l'analisi al microscopio elettronico a trasmissione (TEM).

Un approccio alternativo per la preparazione del campione con un basso numero di cellule per l&#39;analisi TEM

Questo protocollo descrive l'uso di classificazione mediante veicolo fluido centrifuga per separare le cellule di leucemia linfoblastica acuta primaria in fasi del ciclo cellulare diverso.

Preparazione delle cellule di leucemia linfoblastica acuta primaria nel ciclo cellulare diverse fasi di classificazione mediante veicolo fluido centrifuga

Attualmente, macchiatura immunofluorescente su celle fisse è il metodo di scelta per la determinazione dei livelli di espressione della proteina quando informazioni morfologiche sono anche necessari. Questo protocollo presentato qui fornisce un metodo alternativo di immunocitochimica su blocchi di paraffina delle cellule.

Determinazione del livello di espressione della proteina in cellule coltivate di immunocitochimica su blocchi di paraffina celle

Questo protocollo di frazionamento consentirà ai ricercatori di isolare proteine citoplasmatiche, nucleari, mitocondriali e di membrana da cellule di mammifero. Le ultime due frazioni subcellulari vengono ulteriormente purificate tramite gradiente di densità isopicnica.

Frazionamento cellulare di cellule U937 mediante purificazione del gradiente di densità isopicnica

Il successo della trascrittomica e della multiomica a singola cellula/singolo nucleo dipende in gran parte dalla qualità delle cellule/nuclei. Pertanto, l'isolamento di cellule/nuclei dai tessuti e la loro purificazione devono essere altamente standardizzati. Questo protocollo descrive la preparazione di nuclei dal cervello e dal midollo osseo per il test multioma a singolo nucleo a valle.

Preparazione di nuclei cerebrali e del midollo osseo di alta qualità per saggi multiomi a nucleo singolo

Il protocollo fornisce un approccio affidabile e ottimizzato all'isolamento dei nuclei da campioni di tumore solido per il sequenziamento multioma utilizzando la piattaforma 10x Genomics, comprese le raccomandazioni per le condizioni di dissociazione tissutale, la crioconservazione delle sospensioni a singola cellula e la valutazione dei nuclei isolati.

Isolamento ottimizzato dei nuclei da campioni di tumore solido freschi e congelati per il sequenziamento di più omi

Scopri il metodo di Shidham per preparare blocchi cellulari da campioni citologici con cellule sparse individualmente. La tecnica utilizza il marcatore AV e HistoGel per migliorare l'immunoprofilo e le colorazioni speciali.

Cellule preparazione del blocco da campioni Citologia con predominanza di cellule sparse individualmente

Esplora altri video