Name: Wolbachia infezione batterica in Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Impara a isolare e iniettare Wolbachia in Drosophila melanogaster con un protocollo semplice e riproducibile. Questo metodo facilita lo studio della trasmissione batterica e delle dinamiche di infezione negli insetti.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

wolbachia infezione batterica in drosophila

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Wolbachia infezione batterica in Drosophila

Il mio nome è Voia Friedman. Sono ricercatrice associata presso l'Università di Princeton. Oggi vi illustrerò alcuni protocolli che ho sviluppato per trasmettere l'infezione, inizialmente per isolare, per tornare indietro dall'addome di moscerini infetti, e successivamente per aiutare ad iniettare il ceppo infetto in moscerini non colpiti.Quindi, in pratica, questo è un protocollo molto semplice per isolare lui oly per le basi. E utilizzerai questo dispositivo di, di mepo che contiene un filtro che va sopra un E. Quindi, fondamentalmente, devi mettere te, partiamo da circa cento moscerini. Anestetizzi i moscerini, li inserisci nel dispositivo con filtro, puoi semplicemente usare un imbuto e questo si adatterà molto facilmente a questo dispositivo e lo laverai con etanolo al 70%.Prendete semplicemente il pellet, eliminate il futuro, potete scartare l'etanolo, quindi dopo la terza lavata eseguite l'ultimo lavaggio con acqua molecolare perché non volete avere batteri con tracce di etanolo. Bene, poi passate semplicemente a una nuova provetta e centrifugate in un microcentrifugo, un vero microcentrifugo, per due minuti. Successivamente, potete procedere con l'iniezione. Si nutrono solo le mosche non trattate.Quindi, fondamentalmente, prendete un nastro adesivo doppio e, di solito, questi nastri adesivi doppi hanno due lati, uno dei quali è più adesivo dell'altro. Lasciate il lato più adesivo rivolto verso l'alto, poiché è il lato su cui incollerete i moscerini. In pratica, se avete un apparecchio per gas con una luce posizionata sopra, non ci sarà flusso di gas e i moscerini si risveglieranno se si trovano sopra il vetrino.Quindi puoi semplicemente indirizzare il flusso, creando una piccola cappa o una piccola camera utilizzando del nastro. Poi indirizzi il gas sulle mosche. Quindi posizioni qui la tua luce con il nastro e hai le tue mosche.Attacca le mosche sulla parte superiore del nastro, tutte nella stessa orientazione, con la testa rivolta verso la direzione da cui porterai l'ago. In questo modo puoi passare direttamente sopra l'ala e assicurarti che, dal momento che volano, non volino via. Se si svegliassero durante la procedura, non vorresti che scappassero.Pertanto, assicurarsi di esercitare una leggera pressione con la punta contro le ali della mosca in corrispondenza della coda. È accettabile se le ali subiscono danni. E quando si rimuovono le mosche per l'iniezione, molto probabilmente perderanno comunque le ali, ma sopravvivranno.Questo può essere utile perché non si rischia di perdere le mosche; quindi applica un olio minerale sul micrometro nella parte posteriore dell'ago, poi l'ago di iniezione polare, e a quel punto è sufficiente regolare la pressione per far risalire il materiale fino alla punta dell'ago. Ho iniettato un volume compreso tra 10 e 15 nanolitri, ma purché sia costante, il risultato va bene. Un dettaglio importante in questo esperimento è che la mosca, una volta iniettata, richiede che l'ago penetri il più possibile nella parte superiore dell'addome.Perché qui, fondamentalmente, quando l'ago penetra, si ha uno spazio più ampio per muoversi su e giù. E sostanzialmente, se è più vicino alla cuticola, è meno probabile che vengano perforati organi vitali durante il volo. È molto improbabile, ad esempio, che si possa fare un buco nell'intestino, cosa che potrebbe uccidere l'insetto su cui si sta eseguendo l'intervento chirurgico.Il mio nome è Voia Friedman. Sono ricercatrice associata presso l'Università di Princeton, nel laboratorio di Eric Hels. Oggi vorrei parlarvi di questo protocollo che avete appena visto, la dimostrazione.Questo protocollo è stato eseguito perché volevamo dimostrare che UBA è in grado di attraversare i tessuti. UBA è uno dei parassiti intracellulari più diffusi sulla faccia della terra e infetta dal 20 al 70% degli insetti e di molte altre specie.Ed è inoltre molto importante in relazione alle malattie umane, poiché infetta nematodi che trasmettono malattie come la cecità fluviale o la loiasi. Inoltre, CCA è un endosimbionte obbligato in questi vermi. Esiste un grande e crescente interesse nell'utilizzare CCA anche come mezzo per controllare le malattie parassitarie trasmesse da zanzare, come la malaria e il dengue.Questo protocollo è stato sviluppato fondamentalmente per dimostrare che, una volta presenti nel cavo addominale di una mosca, le CCA possono attraversare i tessuti e raggiungere la linea germinale. Fondamentalmente, quello che si può osservare qui è l'of dell'ovaio di Drosophila; una volta che le CCA sono presenti nell'emolinfa, possono attraversare la peritonea rosa che circonda l'ovaio.E poi attraversano uno strato muscolare. E in realtà uno dei primi luoghi in cui entrano nell'ovaio è l'immagine delle cellule staminali somatiche. Da qui possono raggiungere la linea germinale.E questo batterio viene trasmesso nello stesso modo in cui vengono trasmesse le mitocondrie, cioè attraverso la madre, attraverso i citoplasmi presenti nell'uovo. Pertanto, devono necessariamente essere presenti nella linea germinale. Per questo motivo è stato sviluppato questo protocollo.E questo protocollo può essere molto utile perché, tradizionalmente, il metodo utilizzato per trasinfettare WbAA consisteva nel prelevare WbAA e introdurlo in una nuova specie di insetto attraverso microiniezioni nell'embrione. Tuttavia, questi metodi sono molto più complessi.E fondamentalmente qui stiamo semplicemente sfruttando la biologia degli o, poiché sono in grado di attraversare i tessuti e raggiungere i tessuti delle cellule staminali, riuscendo a passare fino alla linea germinale. Questo rende più facile ottenere UBA da alcune specie di insetti infetti, e questi possono essere trasmessi a specie non infette. Probabilmente, penso che sia l'iniezione stessa.Fondamentalmente, è necessario prestare attenzione a mobilizzare la mosca nel modo più accurato possibile. Utilizziamo del nastro adesivo doppia faccia e occorre inserire l'ago il più vicino possibile, e il più parallelo possibile, rispetto alla mosca, in modo da non andare troppo in profondità. In questo modo, è meno probabile che la mosca muoia dopo aver eseguito l'intervento chirurgico.

wolbachia-bacterial-infection-in-drosophila

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biology

Biologia

Parassitoide (parassita) vespe costituiscono una classe importante di nemici naturali di insetti tra...

An Introduction to vespe parassite di<em&gt; Drosophila</em&gt; E la risposta immunitaria antiparassitari

Fonte: Siva-Jothy, J. A., et al. Infezione batterica orale e caduta in Drosophila melanogaster. J. Vis. Esp. (2018)Il video mostra l'infezione orale di Drosophila melanogaster con batteri patogeni. Include la preparazione di fiale infettive e il trasferimento di mosche affamate per consentire l'ingestione batterica. La procedura cattura la colonizzazione intestinale, seguita dalla sterilizzazione superficiale e dall'omogeneizzazione delle mosche. Infine, mostra la quantificazione del carico...

Infezione orale di Drosophila melanogaster con batteri patogeni

Fonte: Hiroyasu, A., D et al., Estrazione di emociti dalle larve di Drosophila melanogaster per infezioni e analisi microbiche. J. Vis. Esp. (2018)Questo video mostra la procedura per stabilire un'infezione batterica nelle larve di Drosophila inserendole in una goccia batterica e pungendola con un ago di tungsteno. Le larve vengono poi incubate su una piastra agar scanalata e ricca di nutrienti per studiare le interazioni ospite-patogeno.

Stabilimento dell'infezione batterica nelle larve di Drosophila

Drosophila melanogaster è un eccezionale organismo modello per lo studio del sistema immunitario innato e delle conseguenze fisiologiche di infezioni e malattie. Questo protocollo descrive come somministrare infezioni batteriche robuste e quantitativamente ripetibili a D. melanogaster e come misurare successivamente la gravità dell'infezione e quantificare la risposta immunitaria dell'ospite.

Sistemica infezione batterica e immunitario Difesa fenotipi in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Un metodo per l'allevamento di Drosophila melanogaster in condizioni axeniche e gnotobiotic è presentato. Fly embrioni vengono dechorionated in ipoclorito di sodio, trasferiti asetticamente alla dieta sterili, e allevati in contenitori chiusi. Inoculando dieta ed embrioni con i batteri porta ad associazioni gnotobiotic, e la presenza di batteri è confermata dalla placcatura di tutto il corpo omogenati Drosophila.

Allevamento la mosca della frutta<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Sotto axeniche e Gnotobiotic Condizioni

Le zanzare Aedes aegypti infettate con Wolbachia vengono rilasciate in popolazioni naturali di sopprimere la trasmissione dell'arbovirus. Descriviamo i metodi retro Ae. aegypti con Wolbachia infezioni in laboratorio per esperimenti e rilascio di campo, prendendo precauzioni per ridurre al minimo la selezione e l'adattamento di laboratorio.

Mantenimento di Aedes aegypti zanzare infettate con Wolbachia

Questo protocollo descrive metodi per esporre oralmente e di infettare il moscerino della frutta Drosophila melanogaster con batteri patogeni e per misurare il numero di batteri infettivi capannone dopo l'infezione dell'intestino. Descriviamo ulteriormente l'effetto di mutanti immuni sulla sopravvivenza vola dopo l'infezione batterica orale.

Infezione batterica orale e spargimento in Drosophila melanogaster

Questo protocollo viene descritto come stabilire l'infezione virale in vivo in Drosophila melanogaster utilizzando il metodo di nano-iniezione e tecniche di base per analizzare l'interazione virus-ospite.

Istituzione dell'infezione virale e analisi dell'interazione ospite-Virus in Drosophila Melanogaster

Le mosche adulte Drosophila melanogaster sono state ampiamente utilizzate come organismi modello per studiare i meccanismi molecolari alla base delle risposte immunitarie innate antimicrobiche dell'ospite e delle strategie di infezione microbica. Per promuovere lo stadio larvale di D. melanogaster come sistema modello aggiuntivo o alternativo, viene descritta una tecnica di iniezione larvale.

Drosophila melanogaster Protocollo di iniezione della larva

Sono stati utilizzati quattro metodi per rilevare Wolbachia intracellulare, che si sono completati a vicenda e hanno migliorato l'accuratezza del rilevamento dell'infezione da Wolbachia di Aa23 derivato da Aedes albopictus e Aa23-T curato dall'infezione nativa di Wolbachia utilizzando antibiotici.

Rilevamento del ceppo Wolbachia wAlbB nelle linee cellulari Aedes albopictus

Le linee cellulari sono utili negli studi su organismi intracellulari che non possono essere coltivati al di fuori delle loro cellule ospiti. Sebbene le linee infettate da Wolbachia abbiano permesso molte scoperte, l'eterogeneità all'interno di queste linee può portare a risultati sperimentali variabili. Presentiamo un protocollo per la generazione di cloni di singole cellule e colture continue da cellule JW18 infettate da Wolbachia.

Generazione di colture monoclonali da linea cellulare JW18 di Drosophila melanogaster infettata da Wolbachia

Impara a isolare e iniettare Wolbachia in Drosophila melanogaster con un protocollo semplice e riproducibile. Questo metodo facilita lo studio della trasmissione batterica e delle dinamiche di infezione negli insetti.

Wolbachia infezione batterica in Drosophila

Esplora altri video