Name: Dissezione di 6,5 embrioni di topo dpc (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 57 s
Description: Impara la dissezione di embrioni di topo a 6,5 dpc per studiare la biologia dello sviluppo embrionale e il patterning genico. Questa tecnica consente di isolare embrioni allo stadio della linea primitiva per analisi di espressione genica.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dissezione di organi riproduttivi di un topo femmina <ol><li> Animali gravidi sono eutanasia da CO 2 asfissia con gas compresso. </li><li> L'animale giaceva supino sul tampone assorbente e immergerlo in etanolo al 70% per ridurre il rischio di contaminare la dissezione con i capelli del mouse. </li><li> Pizzicare la pelle e fare una piccola incisione laterale alla linea mediana con regolare forbici chirurgiche. Tenere la pelle saldamente sopra e sotto l'incisione e tirare la pelle a parte verso la testa e la coda per esporre l'addome. </li><li> Afferrare il peritoneo con una pinza e taglio per esporre la cavità addominale. </li><li> Individuare gli organi riproduttivi nella regione dorsale della cavità del corpo: due corna uterine, l'ovidotto e le ovaie. </li></ol> Primitivo Streak stadi (6,5 DPC) Dissection <ol><li> Rimuovere il corno uterino afferrando l'utero al di sotto del ovidotto e tagliarlo libero lungo il mesometrium. Luogo utero sezionato in ghiaccio PBS freddo. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_7_8_2/160_figure-1.jpg" alt="Figura 1" width="263" height="132"> Figura 1 </li><li> Separare ogni embrione, tagliando tra siti d'impianto lungo corno uterino. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_7_8_3/160._figure-2.jpg" alt="Figura 2" width="575" height="171"> Figura 2 </li><li> Afferrare il rivestimento uterino muscolare facendo scorrere orologiaio pinza tra lo strato muscolare e il tessuto circostante decidua avvolto. Staccare lo strato muscolare, esponendo il decidua. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_4/160_Figure-3.png" alt="Figura 3" width="593" height="166"> Figura 3 </li><li> Clip di una porzione della decidua esposti al vertice (circa 1 / 5 del tessuto decidua), che esporrà la punta midventral o distale dell'embrione racchiuso. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_5/160_Figure-4.png" alt="Figura 4" width="589" height="212"> Figura 4 </li><li> L'embrione può essere sborsato con le punte delle pinze. Pierce decidua con una pinza che circonda l'embrione e pinze aperto a strappare decidua a parte. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_6/160_Figure-5.png" alt="Figura 5" width="249" height="200"> Figura 5 </li><li> Una volta embrione viene rimosso, membrana Reichart può essere ancora attaccato così come il cono ectoplacental (trofoblasto). L'embrione può essere ulteriormente sezionato da dissezione accurata. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_7/160_Figure-6.png" alt="Figura 6" width="356" height="222"> Figura 6 </li></ol>

<ol><li>Nagy, A., et al. Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. (2003).</li>
</ol>

Post-impianto nel topo si verifica tra 4,5 dpc e la nascita. Questo metodo può essere applicato dissezione, essenzialmente come descritto, per isolare prima o dopo gli embrioni scena al 5,5-8,5 dpc.

<table><tbody><tr><td>Pinze da dissezione microchirurgiche zigrinate, dritte</td><td>Strumento</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5130</td><td>2 paia</td></tr><tr><td>Pinzette da dissezione microchirurgiche modello #55 INOX</td><td>Strumento</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5010</td><td>2 paia</td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata al fosfato di Dulbecco&amp;rsquo;s (1x)</td><td>Reagente</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>Piatto di Petri sterile in polistirene Fisherbrand</td><td>Strumento</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeide al 4% in PBS</td><td>Reagente</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forbici da dissezione dritte con punta affilata</td><td>Strumento</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-940</td><td></td></tr><tr><td>Topi femmina gravidi</td><td>Animale</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio stereoscopico</td><td>Microscopio</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

dissezione di 6,5 embrioni di topo dpc

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

Analisi dei modelli di espressione genica durante le prime fasi di sviluppo embrionale dei mammiferi in grado di fornire importanti indizi circa la funzione del gene, l&#39;interazione cellula-cellula e meccanismi di segnalazione che patterning guida embrionale. Tuttavia, la dissezione dell&#39;embrione mouse dal decidua poco dopo l&#39;impianto può essere un procedimento impegnativo e dettagliato passo-passo la documentazione di questo processo è carente. Qui mostriamo come post-impianto (6,5 DPC) sono isolate da embrioni prima dissezione nell&#39;utero di un topo gravide (rilevamento del tappo vaginale è stato designato giorni 0,5 coitum poist) e poi sezionare l&#39;embrione da decidua materna. La dissezione della membrana Reichert è descritto così come la rimozione del cono ectoplacental.

Isolamento di post-impianto di embrioni allo stadio permette di studiare e analizzare patterning gene cellulari lignaggio processi decisionali durante lo sviluppo embrionale, ma corretta dissezione dell&#39;embrione precoce può essere difficile. Questo protocollo descrive un metodo per isolare primi primitivo-striscia-stadio embrioni (~ 6,5 giorni post coitum [dpc]).

Dissezione di 6,5 embrioni di topo dpc

L'analisi dei pattern di espressione genica durante le prime fasi dello sviluppo embrionale dei mammiferi può fornire indizi importanti sulla funzione dei geni, sulle interazioni cellula-cellula...

Il mio nome è Kelly Shea e sono la responsabile del laboratorio e anche una tecnica di ricerca nel Laboratorio di Neilsen; è molto difficile perché molte persone non sanno distinguere i diversi strati del tessuto. Quindi, ciò che bisogna fare è essenzialmente rimuovere tutti gli strati del tessuto per esporre l'embrione sottostante, che a questo stadio non è molto vascolizzato. È quindi molto trasparente e difficile da distinguere.Prendere pinze e forbici piuttosto robuste. Per prima cosa, occorre pizzicare l'animale lungo la linea mediana e procedere effettuando una prima incisione. Da quel punto, è sufficiente tirare la pelle in direzioni opposte, esponendo l'addome dell'animale.C'è un sottile strato del peritoneo che dovrai sollevare con la pinza, quindi puoi tagliarlo con le forbici e ribaltarlo. Devi tagliare lungo la linea mediana dell'animale e separare i due corni uterini, che sono connessi nel mezzo. Puoi tagliare proprio alla base.Probabilmente otterrai molta adiposità insieme al campione. Preleva l'intero corno uterino dell'animale e posizionalo direttamente nel PBS.Quindi questo è all'interno del corno. Questi sono i siti di impianto, 1, 2, 3, 4, 5. Ciò che si deve fare

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biology

Biologia

La capacità di cellule germinali embrionali di differenziarsi in cellule germinali primordiali durante le prime fasi di sviluppo è un modello perfetto per affrontare la nostra ipotesi sul cancro e la sterilità. Questo protocollo mostra come isolare le cellule germinali primordiali di gonadi in via di sviluppo 10,5-11,5 embrioni giorni post coitum mouse.

L&#39;isolamento e la derivazione di cellule embrionali del mouse Germinal

Le proiezioni stereotipata di afferenze sensoriali nel midollo spinale di roditori offrire un sistema facilmente accessibile sperimentale per studiare ramificazione degli assoni attraverso il tracciamento degli assoni singolo.

DII-Etichettatura di neuroni DRG per studiare Branching assonale in un monte intero Preparazione di Spinal Cord embrionali di topo

Un protocollo per la separazione di ectoderma dell'embrione del viso e del mesenchima è descritto. Usiamo dispasi II per il trattamento di embrioni interi in primo luogo, analizzare interi protuberanze del viso, e poi separare il viso ectoderma e mesenchima.

Separazione dei Ectoderma embrionali di topo viso e Mesenchima

Le colture neuronali dell'ippocampo embrionale primario dissociate sono utili per studiare i meccanismi di segnalazione coinvolti nella morte dei neuroni. Il sessaggio degli embrioni prima dell'isolamento e della dissociazione dell'ippocampo consente la preparazione di colture maschili e femminili separate, che consentono al ricercatore di identificare e studiare la segnalazione cellulare sesso-specifica.

Colture neuronali stratificate per sesso per studiare le vie di morte delle cellule ischemiche

Il nodo e la piastra notochordal sono transitori organizzatori nello sviluppo di embrioni del mouse che possono essere visualizzati utilizzando diverse tecniche di segnalazione. Qui, descriviamo in dettaglio come eseguire due delle tecniche per studiare la loro struttura e morfogenesi: 1) microscopia elettronica (SEM); e 2) intero supporto immunofluorescenza (WMIF).

Visualizzare il nodo e la piastra Notochordal In embrioni di topo Gastrulating mediante microscopia elettronica a scansione e intero Monte immunofluorescenza

Vi presentiamo i protocolli per esaminare lo sviluppo del cuore del mouse usando la microscopia intero Monte epifluorescente su embrioni di topo sezionati da ventricolare specifico MLC-2v-tdTomato reporter topi knock-in. Questo metodo permette di visualizzare direttamente ogni fase della formazione ventricolare durante lo sviluppo del cuore del mouse senza laboriosi metodi istochimici.

Analisi della camera cardiaca sviluppo durante l'embriogenesi del Mouse utilizzando l'intero Monte epifluorescenza

Qui, forniamo un protocollo di dissezione necessario per l'immagine dal vivo della gonade maschio drosophila embrionale tardiva . Questo protocollo consentirà l'osservazione di processi cellulari dinamici in condizioni normali o dopo manipolazione transgenica o farmacologica.

Dissezione e Live-Imaging della Drosophila Gonad embrionale tardiva

Qui descriviamo strumenti e metodi computazionali che consentono la visualizzazione e l'analisi di dati di immagini tridimensionali e quadridimensionali di embrioni di topo nel contesto dell'allungamento e della segmentazione assiale, ottenuti mediante tomografia a proiezione ottica in toto e mediante imaging dal vivo e colorazione a immunofluorescenza a montaggio intero utilizzando la microscopia multifotonica.

Approcci di visualizzazione e analisi tridimensionali e quadridimensionali per studiare l'allungamento e la segmentazione assiale dei vertebrati

Classicamente, l'endocardio del primordium della valvola embrionale di topo è stato analizzato utilizzando sezioni trasversali, coronali o sagittali. Il nostro nuovo approccio per l'imaging bidimensionale dell'endocardio nelle regioni valvulogeniche consente l'analisi della polarità planare e del riarrangiamento cellulare dell'endocardio durante lo sviluppo della valvola.

En Face Preparazione del cuscino endocardico per l'analisi della morfogenesi planare negli embrioni di topo

Questo articolo stabilisce una pipeline per sospensioni di singole cellule e nuclei di alta qualità di embrioni di topo gastrulanti per il sequenziamento di singole cellule e nuclei.

Sequenziamento dell'RNA a singola cellula di embrioni interi di topo mutanti: dall'epiblasto alla fine della gastrulazione

Impara la dissezione di embrioni di topo a 6,5 dpc per studiare la biologia dello sviluppo embrionale e il patterning genico. Questa tecnica consente di isolare embrioni allo stadio della linea primitiva per analisi di espressione genica.

Dissezione di 6,5 embrioni di topo dpc

Esplora altri video